饥饿对锯缘青蟹幼体生化组成的影响

对锯缘青蟹 (scyllaserrata)刚孵化幼体在饥饿状态下生化组成的变化进行分析测定 ,为合理投饵和提高青蟹早期幼体的成活率提供理论依据 .研究发现 :1)饥饿幼体同时动用蛋白质和脂类作为能量来源 ,且以脂类为主 .当幼体饥饿超过 1.5d ,脂类储存就已接近匮乏 ;2 )饥饿的幼体明显地保留高度不饱和脂肪酸 2 0∶4n 6和 2 0∶5n 3(EPA) ,而 2 2 :6n 3(DHA)的保留程度很低 ,饱和脂肪酸 16∶0、单不饱和脂肪酸 16∶1和 18∶1是主要的供能脂肪酸 ;3)在饥饿状态下 ,幼体蛋氨酸和亮氨酸的比例略为升高 ,脯氨酸的比例有所降低 ,其他氨基酸的比例基本不变 .上述结果表明 ,应尽早投喂富含 2 2∶6n 3(DHA)的高脂食物 ,以保证早期幼体的生长发育 。

多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)在文昌鱼神经系统和性腺中的免疫细胞化学定位

用免疫细胞化学ABC法对多巴胺 (DA)和去甲肾上腺素 (NE)在文昌鱼神经系统和性腺中进行定位研究。免疫反应结果显示 :DA和NE免疫阳性神经细胞广泛分布在文昌鱼端脑后部、中脑前部和中部以及脊髓。我们还观察到 ,在文昌鱼漏斗部也有DA免疫阳性神经细胞及其纤维 ;在中脑中部 ,NE免疫阳性神经细胞及其纤维与另一个神经细胞相接触。此外 ,文昌鱼精巢和卵巢中也存在DA和NE免疫阳性物。研究结果表明 ,DA和NE可能像在鱼类中那样 ,参与调节文昌鱼哈氏窝上皮细胞的分泌活动以及性腺发育。

大黄鱼脑垂体组织学与免疫组织化学

用组织学和免疫组织化学方法研究不同发育时期大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)脑垂体的形态结构和各种促激素分泌细胞的分布。结果表明:(1)大黄鱼脑垂体呈"鸡心"形,由神经垂体和腺垂体组成,腺垂体可分为前外侧部(RPD)、中外侧部(PPD)和垂体中间部(PI)。(2)RPD部有3种细胞,分别为催乳激素(PRL)细胞,促肾上腺皮质激素(ACTH)细胞,促性腺激素(GtH)细胞。(3)PPD部位于腺垂体腹面,也有3种细胞,其中1种为促生长激素(GH)分泌细胞,呈嗜酸性,另2种呈嗜碱性,分别为GtH细胞与促甲状腺激素(TSH)分泌细胞。(4)垂体中间部有2种细胞,1种为促黑激素(MSH)细胞,呈嗜酸性,另1种为GtH细胞,呈嗜碱性。随性腺发育成熟,大黄鱼GtH细胞的分布从中外侧部扩展至前外侧部和中间部背面;GtH细胞胞质空泡可作为其分泌活动的标志。

鲻鱼脑垂体组织生理学的研究

本文应用多种脑垂体染色技术和免疫组织化学方法对鲻鱼脑垂体各部分的组织结构进行较详细观察。结果表明 ,鲻鱼脑垂体可分为神经垂体和腺垂体两部分。腺垂体又可分为前外侧部、中外侧部和中间部 ,腺垂体中外侧部的体积随性腺发育成熟而增大。嗜碱性细胞 (促性腺激素细胞 )的分布从中外侧部扩展至前外侧部 ,同时还可区分促甲状腺细胞与促性腺激素细胞在中外侧部的形态和分布。免疫组织化学方法进一步证实脑垂体染色技术所鉴定各种类型细胞的正确性。这项研究对调控鲻鱼性腺发育成熟的生殖生理学提供重要的基础资料。

从锯缘青蟹幼体及其饵料的含脂情况探讨其脂营养需求

应用气相色谱仪和其他生化方法测定了锯缘青蟹幼体发育各发育期及其饵料轮虫和卤虫无节幼体的总脂含量、脂类组成和脂肪酸组成,为了解锯缘青蟹幼体的脂营养需求提供一些资料.结果表明,蚤状幼体的脂类含量随着发育逐渐增加,变态为大眼幼体后明显减少,说明幼体变态时对脂类有较高的营养需求.磷脂和胆固醇是幼体的脂类基本营养需求,轮虫和卤虫无节幼体基本上能满足幼体对饵料磷脂和胆固醇的需求.幼体的主要脂肪酸有16∶0,18∶1和20∶5n-3.在幼体发育过程中,高度不饱和脂肪酸20∶4n-6(AA)和20∶5n-3(EPA)的含量保持稳定,22∶6(DHA)则逐渐减少.笔者认为,饵料中DHA含量不足是影响幼体存活、发育和变态的关键因子之一.

雌、雄激素受体在文昌鱼神经系统和哈氏窝的免疫识别

用雌、雄激素受体的多克隆抗体对不同发育时期的文昌鱼神经系统和哈氏窝进行免疫识别。结果显示 ,雌、雄激素受体免疫阳性识别发生在文昌鱼端脑和中脑的中部与后部 ,以及神经管的背面和中央 ,后脑则为免疫阴性反应。两种激素受体免疫阳性物多数分布在神经细胞核内及其神经纤维 ,少数在胞质。雌、雄激素受体免疫阳性识别还出现在文昌鱼哈氏窝基部的上皮细胞核内或胞质中。雌、雄激素受体在文昌鱼神经系统和哈氏窝的免疫识别部位与脊椎动物相类似。研究表明 ,性类固醇激素像在脊椎动物中那样 。

文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺GnRH受体mRNA原位杂交的研究

用地高辛标记的寡核苷酸探针对GnRH受体在文昌鱼 (Branchiostomabelcheri)神经系统、哈氏窝和性腺中的定位和表达进行原位杂交研究。结果显示 ,神经系统中神经细胞、尤其是在中脑右侧延伸出与哈氏窝相接触的漏斗样结构中的神经细胞、哈氏窝上皮细胞以及雌雄性腺中生殖细胞都有GnRH受体mRNA杂交信号 ,信号物质分布于胞质 ,胞核为阴性。表明文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺都能合成GnRH受体 ,从而成为GnRH在脑、哈氏窝和性腺中的靶细胞。为GnRH刺激哈氏窝上皮细胞的分泌活动、调节性腺发育成熟和生殖活动 ,在分子水平上提供了确凿的证据。还讨论了文昌鱼漏斗样结构在调节哈氏窝分泌活动中的作用 ,一方面可介导脑与哈氏窝之间的信息传递和调节 ,另一方面作为刺激或抑制哈氏窝分泌活动的调节中枢。

水温对文昌鱼生殖活动的影响及其内分泌机制

采用慢性实验方法,研究在不同水温条件下饲养性腺发生前的文昌鱼(Branchiostomabelcheri)对其性腺分化和发育的影响。另外,在繁殖季节研究在低温16℃、中温22℃和高温28℃下饲养性成熟的文昌鱼对其产卵和排精的影响。同时,采用免疫组织化学方法对几种生殖相关激素在不同发育期文昌鱼的生殖调控轴(脑-哈氏窝-性腺)中的分布进行免疫识别,并用磁酶免定量测定方法检测睾酮和17β-雌二醇在文昌鱼性腺中的含量,以分析和探讨水温影响文昌鱼生殖活动的内分泌机制。结果表明:低温有利于文昌鱼性腺向雌性分化,雌雄比例为4.2∶1,中温和高温组则不受影响,雌雄数量大致相等。高水温则有利于文昌鱼的精巢发育和生精活动。28℃海水适于文昌鱼的产卵和排精。根据免疫组织化学和磁酶免定量测定的结果分析提示,温度影响文昌鱼性别分化和发育以及繁殖活动的内分泌机制是:首先水温经皮肤或哈氏窝化学感受器,刺激神经系统(脑泡)释放GnRH。然后GnRH促进哈氏窝分泌LH,从而可能刺激性腺产生和分泌性类固醇激素,始动文昌鱼性腺的发育至成熟及其生殖活动。此外,脑中芳香化酶可能介导文昌鱼性别分化。

鲻鱼甲状腺免疫组织化学与超微结构

用组织学、免疫组织化学和电镜技术对鲻鱼甲状腺的分布与形态结构进行研究。结果表明 ,鲻鱼甲状腺滤泡分散地分布在第 1对至第 3对鳃弓的入鳃动脉之间 ;构成同一滤泡的单层上皮细胞呈扁平形和立方形两种形态 ,反映出同一滤泡中上皮细胞生理活动的不同步 ,且发现不同发育时期的鲻鱼这两种形态细胞的比例有显著差异。用特异性甲状腺球蛋白 (TG)抗体对甲状腺滤泡的免疫染色反应显示 ,阳性物质分布在滤泡上皮细胞的胞膜及围绕滤泡腔的周边与中央胶质 ,幼年与成年鲻鱼甲状腺滤泡的免疫阳性反应部位有所不同。两种不同活动状态的细胞 ,扁平形细胞和立方形细胞 ,在核与胞质的超微结构上有显著不同。扁平形细胞的核为扁平形或椭圆形 ,核内常染色质十分丰富 ,核膜光滑 ,核周腔和核孔没有扩张 ,胞质中各种细胞器发育较差 ;立方形细胞的核膜高度凹陷 ,将核分为 2叶至 3叶 ,核周腔和核孔扩张 ,胞质中各种细胞器发育良好 ,出现长棒形和哑铃形线粒体 ,且数量明显多于扁平形细胞 ,多层粗面内质网呈板层状排列 ,还有发育好的高尔基复合体。另外 ,我们还观察到一种介于扁平形细胞和立方形细胞之间的中间型细胞 ,其胞质和核的发育明显好于扁平形细胞 ,但比立方形细胞差。

17β-雌二醇诱导鲻鱼雌性化的机制:芳香化酶和雌激素受体双染定位研究

用免疫细胞化学双重染色技术和鼠抗人芳香化酶抗体、兔抗人雌激素α受体与β受体亚型(ER α和ER β)抗体、兔抗人雌激素(E2)抗体,对鲻鱼(Mugilcephalus)脑各部位进行定位研究。结果显示,芳香化酶和E2、芳香化酶和ER α、芳香化酶和ER β、ER α和E2的双染免疫活性物质分布在鲻鱼嗅脑、大脑、间脑和小脑的神经细胞的胞核或胞质及其突起或神经纤维上。值得指出的是,鲻鱼下丘脑视前区芳香化酶免疫活性细胞上共存有雌激素α受体与β受体亚型,提示E2诱发鲻鱼雌性化的作用机制是,E2先与芳香化酶样神经细胞上的雌激素受体结合,而后激发与性分化相关的芳香化酶基因的表达。

GnRH-A和紫萁抑制大黄鱼性腺早熟的机制

应用脑垂体组织生理学和免疫组织化学方法 ,对GnRH A和紫萁抑制大黄鱼性早熟的作用机制进行了研究。结果表明 ,性早熟大黄鱼脑垂体许多促性腺激素分泌细胞的胞质出现空泡 ,提示性早熟的原因可能是由于GtH细胞提早进入分泌活动所致。长期服用促性腺激素释放激素类似物的养殖大黄鱼 (没有性早熟 ) ,它的脑垂体GtH细胞对GnRH抗独特型抗体发生弱的免疫阳性反应 ,而对照组性早熟鱼仍出现强的反应 ,表明实验组大黄鱼脑垂体GtH细胞对GnRH A的应答能力下降 ,出现脱敏效应 ,这可能与GnRH A抑制大黄鱼性早熟有关。养殖大黄鱼长期服用紫萁 ,它的脑垂体GtH细胞膜上GnRH受体则没有出现脱敏现象 ,提示紫萁抑制大黄鱼性早熟的机制不同于GnRH类似物 。

锯缘青蟹幼体饵料蛋白质的营养价值评价

本文分析测定了锯缘青蟹幼体从刚孵化至大眼幼体各发育阶段及其饵料轮虫和卤虫无节幼体的氨基酸组成 ,并使用必需氨基酸指数 (EAAI)来评价饵料蛋白质的质量 .结果表明 ,青蟹各期幼体的氨基酸组成基本趋于一致 ,且与饵料转换不存在明显的相关性 .对于各期幼体 ,饵料轮虫和卤虫无节幼体的必需氨基酸指数均大于 90 ,可以认为 ,轮虫和卤虫无节幼体能够满足锯缘青蟹幼体对饵料中必需氨基酸的营养需求 .

全雌鲻鱼培育的进一步研究

为了验证和完善培育全雌鲻鱼的技术路线 ,我们在首次培育试验成功的基础上 ,通过调整用药剂量和增加试验鱼数量 ,进行第二次培育试验 .试验选用体长 2 .8～3.5cm、性别未分化的鲻鱼苗 ,分为三组 .高剂量组和低剂量组分别投喂拌有不同剂量 1 7β 雌二醇的饲料 ,持续 6个月 ,对照组则投喂不含药物的饲料 .结果显示 ,高剂量组鲻鱼全部分化为雌性 ,低剂量组雌性率达 90 % ,对照组雌性率仅为 1 0 % .与第一次试验结果相比较 ,我们认为 ,全雌鲻鱼培育的技术路线更为成熟和合理 。

神经肽Y和β-内啡肽内分泌细胞在鲻鱼肠道中的分布和形态

用链霉亲合素 生物素 过氧化物酶复合物 (StreptAvidin Biotin peroxidaseComplex ,SABC)免疫细胞化学方法和兔抗人神经肽Y与兔抗人 β 内啡肽抗体对鲻鱼肠道不同部位的内分泌细胞进行鉴别和定位研究。结果显示 ,这两种神经肽的免疫活性内分泌细胞不同程度地分布在鲻鱼前肠前段和后段、中肠和后肠。神经肽Y免疫活性细胞的形态多样 ,大多数属开放型细胞 ,具有胞质突起 ,少数为封闭型细胞 ,阳性细胞一般出现在肠褶的中部和近端部。β 内啡肽免疫活性细胞则几乎为封闭型细胞 ,且定位在肠褶基部。神经肽Y主要分布在前肠前段和后段 ,分布密度分别为 18.7个细胞 mm2 和 2 6 .3个细胞 mm2 ,而在中肠和后肠仅少量分布 ( <5 .5个细胞 mm2 )。β 内啡肽的分布密度在后肠最高 ,达 31.5个细胞 mm2 ,其次从前肠前段至中肠顺序递减。

饥饿对斜带石斑鱼稚鱼胃肠道内分泌细胞的形态、定位和分布密度的影响

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)稚鱼在摄食和饥饿2种营养条件下胃肠道中5种内分泌细胞的形态、定位和分布密度进行比较研究.采用免疫细胞化学方法和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、生长抑素(somatostain,Som)、胃泌素(gastrin,Gas)、P物质(substance P,SP)及神经肽Y(neuropeptide,NPY)的特异性抗血清进行胃肠道免疫活性细胞的检测.结果显示,5种胃肠激素内分泌细胞在斜带石斑鱼稚鱼胃肠各部位均有开放型和封闭型2种,饥饿对细胞的形态有所影响但不明显.统计分析结果显示5种内分泌细胞在摄食组和饥饿组的斜带石斑鱼稚鱼胃肠各部位的分布密度存在明显差异.在贲门胃,饥饿组5-羟色胺和生长抑素免疫活性细胞数量上升,为正常摄食组的2.2倍和12.4倍,而在胃体和幽门胃则下降了1/3～5/6;饥饿组的胃泌素和P物质免疫阳性细胞数量在幽门胃下降为1/2,在肠道则有升有降;唯有神经肽Y免疫活性细胞在摄食组和饥饿组2组间没有显著差异.这些结果表明,胃肠激素参与调控斜带石斑鱼稚鱼胃肠的消化和吸收功能.一旦发生饥饿,斜带石斑鱼稚鱼胃肠激素细胞的分泌活性发生相应改变,最终可能会导致细胞功能失调,成为幼体死亡的因素之一.

催乳素及其受体样免疫活性在文昌鱼神经系统、哈氏窝和其它组织的分布

用兔抗人催乳素多克隆抗体和鼠抗人催乳索受体单克隆抗体对文昌鱼神经系统、哈氏窝和其它组织进行免疫组织化学研究。结果显示:催乳素免疫活性细胞及催乳素受体定位在文昌鱼脑泡、神经管、哈氏窝、轮器、内柱、消化管和性腺(卵巢和精巢),表明催乳素在文昌鱼有广泛分布,并且从进化观点来看,证明催乳素是一种高度保守的古老激素。双重免疫染色进一步揭示催乳素及其受体免疫反应阳性物质共存于同一卵母细胞胞膜和胞质以及精巢中精原细胞、初级与次级精母细胞和Sertoli细胞。研究结果首次证明了文昌鱼脑泡和哈氏窝以及其它组织能够合成和分泌催乳素,表明像脊椎动物一样,催乳素可能参与调节文昌鱼体内代谢和对环境的适应以及性腺发育,提示文昌鱼可能出现原始的脑泡-哈氏窝(催乳素)-靶细胞调控轴的雏形。本研究为文昌鱼哈氏窝内分泌学以及催乳素的起源与演化提供新的基础资料。

锯缘青蟹幼体饵料的营养强化

用酵母、小球藻、鱼油强化和豆油强化四种不同方式培养轮虫，再分别投喂锯缘青蟹幼体。分析测定轮虫和幼体的生化组成，结果显示，（１）不同方式培养的轮虫之间以及摄食这些轮虫的锯缘青蟹幼体之间的蛋白质含量都没有显著差异；（２）轮虫的脂类含量和脂肪酸组成与培养方式密切相关。小球藻轮虫的脂类含量最高，２０：５ｎ－３（ＥＰＡ）占总脂肪酸的比例也最高，为１８．０５％。鱼油轮虫则含有最多的２２：６ｎ－３（ＤＨＡ），占总脂肪酸３．１６％，脂类含量仅次于小球藻轮虫；（３）锯缘青蟹幼体的脂类含量和脂肪酸组成受相应饵料营养成分的影响。另外，幼体培育实验也发现，饵料营养成分影响幼体的存活率。结果表明，提高轮虫的ＥＰＡ和ＤＨＡ含量，尤其是ＤＨＡ含量，将有利于锯缘青蟹幼体的存活和发育。

神经肽Y和β-内啡肽样免疫阳性物质在文昌鱼神经系统和哈氏窝的分布

用免疫组织化学方法首次发现,神经肽Y(NPY)和β-内啡肽(β-Ep)样免疫阳性物质分布在文昌鱼神经系统和哈氏窝。NPY样免疫阳性神经元出现在端脑前部和中部、中脑前部和中部以及后脑,NPY样免疫阳性神经纤维在文昌鱼脑的各部分与神经元交错呈网状密集分布。神经管的背面与中部均可观察到NPY样免疫阳性神经元及其阳性纤维。β-Ep样免疫阳性神经元及其神经纤维定位在中脑前部和中部以及神经管,且分布范围明显小于NPY。文昌鱼哈氏窝也有NPY和β-Ep样免疫阳性物质分布。这些结果表明,NPY和β-Ep可能作为脑内的一种神经递质,像鱼类那样,参与调节文昌鱼哈氏窝促性腺激素分泌细胞的分泌活动,这为文昌鱼脑-哈氏窝复合体的密切关系提供新的形态学证据。

Ghrelin样免疫活性细胞在文昌鱼体内的分布-免疫组织化学的定位

用免疫组织化学方法和兔抗合成的哺乳类ghrelin多克隆抗体,研究了ghrelin样免疫活性细胞在文昌鱼(Branchiostoma belcheri)体内的分布.结果表明,ghrelin样免疫活性细胞广泛分布在文昌鱼神经系统、哈氏窝和轮器、消化道和性腺(卵巢和精巢).在神经系统,ghrelin样免疫活性神经元及其突起特异性分布在脑泡背面与腹面和脑泡漏斗部以及在神经管均可见分散的免疫活性神经细胞及其神经纤维.哈氏窝1—3层的上皮细胞和轮器细胞中均显ghrelin样免疫阳性,阳性物质沿胞膜分布.在消化道,ghrelin样免疫活性细胞分布在肝盲囊、中肠前部和中肠后部,其中以肝盲囊阳性细胞的数量最多,中肠后部次之,中肠前部最少,它们分别属开放型和封闭型内分泌细胞.在性腺,小生长期和大生长期卵巢中卵原细胞、卵母细胞和滤泡细胞以及精巢中早期生精细胞和足细胞均检测到ghrelin样免疫阳性物质.ghrelin样细胞在文昌鱼体内的广泛分布,表明该细胞在进化上的保守性及功能多样性.研究发现文昌鱼脑泡和哈氏窝均存在ghrelin样免疫活性细胞,为它们之间可能建立调节哈氏窝分泌生长激素的兴奋系统提供新的形态学证据.

日本鳗鲡产卵后生存及其繁育

为证明日本鳗鲡(Anguillajaponica)生活史最后一步—产后鳗的命运,本研究模拟产后的日本鳗鲡继续在海水中养殖,观察其存活率及繁育情况。结果表明,产后鳗在海水中停食约18d后,体能得到恢复,部分亲鱼开始出现摄食,1个月左右全部恢复摄食,经244d养殖,雌、雄鳗体质量增加,存活率达94.6%。随后,给产后鳗注射外源性促性腺激素(鲤鱼脑垂体匀浆CPE和人绒毛膜促性腺激素HCG)后激发其退化的性腺(卵巢和精巢)重新发育(与当年银鳗作对照)。通过性腺组织切片观察产后鳗和对照鳗性腺发育成熟的全过程及其差异,发现产后鳗起初性腺发育比当年银鳗差,但经多次注射激素后,产后鳗性腺成熟与当年银鳗同步,证明产后鳗生殖细胞对激素的敏感性高。应用17α,20β—双羟孕酮和促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A3)使催熟的产后鳗和对照鳗均产卵和排精,并孵化出仔鱼,从而有力地证明,鳗鲡产后虽体质弱,但待体能恢复后能够继续生存和繁殖。本研究旨在探讨利用产后鳗作为今后鳗鲡人工繁殖亲鳗的可行性。