简易BH3分析法在血液肿瘤药敏筛选的初步探索

目的建立一种血液肿瘤BCL-2抗凋亡蛋白抑制剂药敏筛选的简易BH3分析法。方法建立基于显微镜和JC-1染色的BH3分析方法,通过BH3-only模拟肽描绘K562、NB4细胞系BCL-2家族抗凋亡蛋白依赖谱,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)加以验证;回溯临床治疗疗效,检验该方法对临床样本BH3药敏分析结果的符合情况。结果BH3分析结果显示NB4对抗凋亡蛋白的依赖程度依次为BCL2>MC1-1>BCL-XL;K562的依赖程度依次为BCL-XL>MC1-1>BCL2。PCR分析BCL-2家族基因表达量显示,K562抗凋亡蛋白MCL-1、BCL2、BCL-XL相对表达程度较高,BH3-only促凋亡蛋白中BIM、PUMA、NOXA高表达而HRK低表达,细胞抗凋亡能力更依赖于BCL-XL;NB4抗凋亡蛋白BCL-XL表达明显低于MCL-1与BCL-2,BH3-only促凋亡蛋白NOXA低表达,细胞抗凋亡更依赖于MCL-1与BCL-2而非BCL-XL,与BH3分析结果相符。对连续6例血液肿瘤患者骨髓进行BH3分析,结果显示6例患者均对HRK(BCL-XL抑制物)、VEN(BCL-2抑制物)不敏感;4例患者(例1~3,例5)对NOXA(MCL-1抑制物)表现为敏感,2例(例4、例6)的敏感度较低(<50%)。药敏预测结果显示6例患者均对BCL-2抑制剂耐药,例1~3、例5患者对MCL1抑制剂敏感,例4和例6对MCL1抑制剂可能耐药。回溯临床用药效果(4~6个疗程)显示例1~5患者对BCL-2抑制剂相关方案治疗无效,考虑与BCL-2抑制剂不敏感有关,例5更换西达苯胺治疗有效,例4和例6患者西达苯胺相关方案疗效不佳,考虑与MCL-1抑制物不敏感有关,上述临床结局与BH3预测结果一致。结论基于荧光显微镜和JC-1染色的BH3分析是简便可行的,可用于检测血液肿瘤细胞对不同抗凋亡蛋白的依赖性,从而为BCL-2家族相关抑制剂的选择提供证据。

大气污染原因和环境监测治理对策思考

大气污染治理问题是现阶段倍受关注和重视的社会焦点问题,这对于人们的身体健康以及生存环境质量和社会的可持续发展都会起到至关重要的影响。本文将目光集中于大气污染,分析了大气污染的构成原因,阐述了大气污染环境监测方法和治理对策,希望通过本文的探讨和分析可以为相关单位提供更多的参考与帮助,有效落实环境监测工作,优化大气污染治理策略,提高大气污染治理效果。

骨髓增生异常综合征患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平及意义

目的了解骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓γδT细胞及其亚群的水平,探索MDS患者骨髓微环境的免疫缺陷状况。方法收集MDS患者治疗前后及正常供者骨髓样本,多色流式检测骨髓γδT细胞及亚群水平,并分析MDS患者治疗后各细胞亚群的变化。结果MDS患者骨髓γδT细胞和滤泡辅助性γδT细胞明显降低(P<0.05)。不同分化程度的γδT细胞,仅初始γδT细胞水平明显降低(P=0.037),中枢记忆、效应记忆和终末分化γδT细胞MDS患者与正常供者差异无统计学意义(P>0.05)。免疫检查点PD1和TIM3阳性的γδT细胞分别存在一定程度的降低和升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后获得疗效患者的γδT细胞和初始γδT细胞水平较治疗前明显升高,效应记忆γδT细胞较治疗前明显降低(P<0.05),85.71%(6/7)的MDS患者γδ+TIM3+T细胞水平治疗后不同程度的降低。结论MDS患者骨髓微环境γδT细胞及其亚群的水平存在不同程度的异常,治疗有效的患者,异常的γδT细胞恢复,通过γδT细胞及亚群水平检测可了解MDS的免疫缺陷状态,有可能作为判断疗效的指标,并为抗肿瘤免疫疗法提供新的资料。

减量FLAG方案治疗难治性急性白血病

目的 :观察减量FLAG方案对难治性急性白血病 (AL)的疗效、骨髓抑制时间以及不良反应。方法 :氟达拉滨 (Flu) 5 0mg/d ,5～ 6d ;阿糖胞苷 (Ara C ) 0 5～ 2 0g/d ,5～ 6d ;WBC <1 0× 10 9/L时用粒细胞集落刺激因子 (G CSF) 3 0 0 μg/d直至WBC >1× 10 9/L ,治疗 14例难治性AL。结果 :14例AL中 ,总有效率为 2 8 5 % ,其中完全缓解 (CR)率为 14 3 % ,部分缓解 (PR )率为为 14 3 %。中性粒细胞最低时间在开始用药后 5～ 9d ,持续时间 7～ 3 0d ;血小板最低时间在开始用药后 5～ 10d ,持续时间 6～ 3 0d ;感染率 10 0 % ,重度感染率 3 7 5 % ,2例早期治疗相关死亡。结论 :减量FLAG方案治疗难治性AL ,疗效不理想 。

FABC预处理方案同胞异基因造血干细胞移植治疗成人高危急性淋巴细胞白血病

目的:探讨以FABC预处理进行同胞异基因造血干细胞移植治疗成人高危急性淋巴细胞白血病(ALL)的疗效及相关临床预后因素。方法:2004年8月至2010年8月期间,广东省人民医院采用FABC预处理方案(氟达拉滨联合阿糖胞苷,马法兰,环磷酰胺,足叶乙甙或替尼泊甙)治疗23例成人高危ALL患者,应用Kaplan-Meier法及Cox回归模型进行生存及预后分析。结果:所有患者均于+14～+21d获完全供者植入,骨髓获CR或CRi,中性粒细胞和血小板植活中位时间分别为12(4～43)d和12(5～44)d;aGVHD及cGVHD累积发生率分别为47.8%和84.2%。中位随访21(4.4～70.5)个月,移植相关死亡率为21.7%(5/23),复发率为17.4%(4/23);死亡(8/23)原因:复发3例,肺部真菌感染2例,移植相关性微血管病、巨细胞病毒肺炎和cGVHD各1例。3年的预期总生存率和无病生存率(DFS)分别是(54.4±14.6)%和(51.9±14.1)%。预后分析显示:cGVHD是DFS独立有利因素,其相对危险度为0.062(95%可信区间0.007～0.584,P=0.015)。结论:FABC预处理同胞异基因造血干细胞移植是治疗成人高危ALL安全有效的方法,cGVHD是长期无病生存的独立有利因素。

G-CSF对供者外周血CD34^+细胞黏附分子表达的影响

目的通过观察健康供者外周血CD34+细胞黏附分子表达的变化,探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的机制及其对供者的影响。方法应用流式细胞仪分析15名健康供者在接受G-CSF10μg.kg-1.d-1动员前(Pre-G)、动员d4和停止动员后7d(Pro-G)外周血CD34+细胞比例及其表面黏附分子非常延迟抗原-5(VLA-5,CD49e)和L-选择素(CD62L)的表达情况。结果G-CSF动员后供者外周血CD34+细胞比例较动员前增高5-10倍,停止动员后恢复至动员前水平。G-CSF动员后CD34+CD49e+细胞比例(97.74%)明显高于动员前(79.95%),停止动员后7d CD34+CD49e+细胞比例基本恢复至动员前水平;CD34+CD62L+细胞比例在G-CSF动员过程中无明显改变;CD34+细胞表面CD49e与CD62L的平均荧光强度于动员后呈减弱趋势,但无显著统计学意义。结论G-CSF动员后d4可显著增加供者外周血CD34+细胞比例,可致CD34+CD49e+细胞比例一过性增加,但不影响CD34+CD62L+细胞群的比例。

rhG-CSF对健康供者的影响

目的 :探讨人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对健康供者的影响。方法 :1998年 1月至 2 0 0 3年6月年间 2 2例接受rhG CSF 10 μg·kg-1·d-1动员的健康供者 ,观察动员及分离过程的不良反应 ,检测动员前后血常规、CD3、CD4、CD8细胞比例 ;采集物进行单个核 (MNC)、CD3 4+细胞计数 ;所有供者随访至 2 0 0 3年 10月 3 0日。结果 :2 2例供者在rhG CSF动员过程中出现 1～ 2级 (按WHO急性毒副作用分级标准 )肌肉或骨痛 ( 4 5 5 % )、头痛( 2 2 7% )、食欲减退 ( 5 0 % )等副作用 ,无需终止动员。动员后白细胞较动员前显著升高 ,停止动员后 7d基本恢复至动员前水平。血红蛋白及血小板、CD3 +、CD4+、CD 8+和CD 4/CD8比值于动员前、动员第 4天及停止动员后 7d的变化无统计学意义。结论 :绝大多数健康供者可耐受rhG CSF剂量为 10 μg·kg-1·d-1的短程动员和PBSC采集过程 ;rhG CSF对健康供者的T淋巴细胞亚群分布无影响。

初发难治与非难治性急性白血病免疫表型分析

目的 探讨初发难治与非难治急性白血病 (acuteleukemia ,AL)免疫表型的特点 ,为临床治疗及判断预后提供指导。方法 应用单克隆抗体和流式细胞仪对 38例难治与 39例非难治初发急性白血病骨髓白血病细胞免疫表型进行检测。结果 初发难治性AL的CD34抗原阳性表达数明显高于非难治组 ,AML尤为明显 ;AML伴有CD19+ 表达在难治组与非难治组分别为 2 8 6 %和 8 3% ,ALL伴有CD13+ 表达在难治组与非难治组各占 6 0 %和2 0 %。结论 免疫表型有助于初发急性白血病的预后判断 ,AML伴CD34、CD19抗原表达以及ALL伴CD13抗原表达提示预后不良。

间充质干细胞治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病

目的:探讨体外扩增骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的临床疗效和安全性。方法:4例恶性血液病患者经HLA匹配同胞外周血干细胞联合骨髓移植后,诊断为激素耐药重度aGVHD,在原有免疫抑制治疗的基础上给予MSCs0.5×106/kg受者体重。结果:4例患者经静脉输注体外扩增MSCs共9例次,未发现输注相关不良反应。所有患者均显示不同程度的治疗反应,总有效率达100%。4例发生消化道aGVHD,完全缓解2例,显著缓解1例,部分缓解1例。2例合并肝脏aGVHD患者中1例获完全缓解,1例获部分缓解。初始显效和充分显效的中位时间分别为3d(2～5d)和23d(10～72d)。MSCs输注后,病情缓解者外周血CD8+CD28-T细胞比例明显上升,而CD8+CD28+T细胞比例下降。结论:MSCs可快速缓解激素耐药重度aGVHD病情,其可能通过对CD8+CD28-/CD8+CD28+T细胞比例的调控发挥抗aGVHD的作用。

间充质干细胞诱导小鼠CD8α^+ CD11b^+ jagged2^(high)调节性树突状细胞的方法

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导CD8α+CD11b+jagged2high调节性树突状细胞(DCregs)的方法。方法:应用4种细胞因子体外刺激BALB/c(H-2d)小鼠骨髓有核细胞(BMCs)3 d,流式细胞术(FCM)分选树突状细胞(DCs),与BMSCs共培养10 d,诱导DCregs产生。FCM分析共培养前后DCs的表型、细胞周期及Notch信号通路中Jagged1、Jagged2配体的表达变化。结果:小鼠BMSCs在体外成功诱导新型DCs转变为DCregs,其CD86、CD80、CD40、MHC-II表达均明显下降(P<0.05),而CD205、Jagged1、Jag-ged2表达均明显上升(P<0.05);细胞周期中(G2+S)期细胞增加。结论:MSC可诱导DC细胞向DCregs转化,该MSC-DCregs具有致免疫耐受性表型,增殖能力提高;MSC诱导免疫耐受的机制可能与上调DC的Jagged1和Jagged2基因表达,激活T细胞Notch信号通路相关。

G-CSF对造血干细胞的动员机制及对健康供者的影响

粒细胞集落刺激因子 (G CSF)通过影响造血干细胞粘附分子的表达及其功能 ,以及影响骨髓微环境 ,从而促使骨髓造血干细胞向外周血释放 ,使外周血造血干细胞移植得以实施。G CSF可引起供者骨痛、疲乏、头痛、恶心、呕吐、发热等不良反应及免疫功能的暂时性改变。绝大多数供者可耐受上述不良反应 ,但G CSF对供者的远期影响尚待进一步研究和观察。

rhG-CSF对正常供者淋巴细胞亚群及其活化的影响

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对供者淋巴细胞亚群及其表面活化标志的影响。方法 应用流式细胞术检测 2 2例异基因造血干细胞供者rhG CSF动员前、中、后外周淋巴细胞亚群的比例及T淋巴细胞活化指标的变化。结果 rhG CSF动员第 4天 ,淋巴细胞数、B淋巴细胞、CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞绝对值均明显升高 ;CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 细胞的比例及CD4 /CD8值动员前、中、后无明显变化。除CD4 + CD2 5 + 、CD4 + CD4 5RO+ 表达动员后降低外 (且于动员停止后第 7天恢复至动员前水平 ) ,其余活化标志的表达无明显变化。结论 rhG CSF可暂时性升高正常供者的淋巴细胞数及降低T淋巴细胞活化水平 ,但于停止动员后

血浆置换治疗浆细胞病高M蛋白血症

目的：探讨血浆置换（ＰＥ）治疗浆细胞病高Ｍ蛋白血症的疗效、适应证和方法。方法：对７例浆细胞病高Ｍ蛋白血症患者进行ＰＥ治疗，治疗前后监测ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及血象，记录每次ＰＥ量，ＰＥ过程中出现的不良反应，追踪ＰＥ后１～６个月内的Ｍ蛋白相关并发症的发生率。结果：每次置换后Ｍ蛋白下降４０２４％（Ｐ＜００５），Ｍ蛋白去除率与ＰＥ量呈正相关，置换前Ｍ蛋白值与置换后Ｍ蛋白下降值呈正比关系，ＰＥ后１～６个月内高Ｍ蛋白并发感染、出血、肾损害等情况好转。结论：ＰＥ是降低高Ｍ蛋白成分的快速、有效、安全的方法。

肿节风防治化疗后血小板减少症的研究

目的 :探讨肿节风对大剂量化疗后小鼠血小板减少的防治作用。方法 :本研究以Babl/c纯系清洁级小鼠为实验对象 ,通过大剂量 5 氟尿嘧啶腹腔注射复制血小板减少的动物模型 ,用肿节风稀释液从实验开始连续进行灌胃干预 ,分别在预处理前、化疗前、化疗后第 2、第 4及第 7天测定小鼠血常规 ;并在化疗后第 7天处死小鼠 ,行骨髓病理活检 ,观察骨髓造血情况。结果 :经过肿节风预处理后 ,化疗前单药干预组及联合干预组小鼠外周血小板数量显著高于同期对照组 (P <0 0 5 ) ,化疗后两个实验组小鼠的血小板数量与对照组相比无显著下降 (P <0 0 5 ) ,而两实验组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。骨髓病理检查结果提示 ,两实验组小鼠骨髓增生活跃 ,骨髓腔内可见巨核细胞 ,对照组小鼠骨髓增生低下 ,未发现巨核细胞。结论 :肿节风具有对抗大剂量 5 FU所造成的血小板减少的作用 ,从而预防并治疗化疗后血小板减少症的发生。

骨髓增生异常综合征患者地西他滨治疗后DNA甲基化水平变化

目的了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者地西他滨治疗后DNA甲基化水平的变化。方法 7例MDS患者难治性贫血伴原始细胞增多Ⅰ型或Ⅱ型(RAEBⅠ/Ⅱ)接受规律的地西他滨治疗,5天方案(4例)和3天方案(3例),每个疗程分4个时间点采集其外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(real time-Q-PCR)方法检测外周血P15和CDH1基因的甲基化水平。结果用药前3例患者(例2、例4和例7)P15甲基化水平较高(20%～65%),CDH1均较低(0.5%～5%)。无论5天还是3天方案,用药前甲基化水平越高,用药后下降越明显,患者用药第5/7天后P15、CDH1甲基化水平下降幅度最大,达20%～60%,P15可维持在下降后的水平,在随后的治疗中未再出现明显的下降,但是CDH1的波动较大,用药期间CDH1甲基化水平可升至≥用药前水平。目前的数据表明甲基化的变化与血象变化不一致。应用重复测量方法分析5天与3天方案两个基因甲基化水平变化,两种不同方案组间去甲基化水平差异无统计学意义(均P>0.05);有血液学改善的患者与未改善患者的去甲基化程度差异无统计学意义。结论地西他滨治疗后P15和CDH1的甲基化水平均有不同程度降低,但甲基化水平与治疗方案和疗效无关。

定量检测bcr-abl mRNA在慢性粒细胞白血病患者异基因造血干细胞移植后的意义

本研究确切了解CML患者异基因造血干细胞移植后bcr-abl mRNA的变化情况,为临床诊断早期复发提供实验依据。用实时荧光定量PCR方法检测15例慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因造血干细胞移植前后78份外周血和骨髓标本的bcr-abl mRNA水平。结果表明,移植前患者的bcr-ablmRNA水平较高,中位数为29.303%;移植后1个月时检测bcr-abl mRNA水平较移植前大幅度降低,中位数为0;移植后1年内,连续多次检测bcr-abl mRNA水平,变化模式不一致,但6个月后的总体水平较6个月前明显降低,移植1年以上的受者绝大多数bcr-abl mRNA检测不到,或偶可检测到,但水平极低(0.007%、0.004%和0.021%),所检测受者的骨髓和外周血像均正常;同期骨髓与外周血bcr-abl水平无明显差异,且变化趋势一致。结论:CML患者移植后早期bcr-abl水平变化起伏较大,连续动态检测可明确其变化趋势,有助于判断移植效果、指导临床治疗,但6个月前检测到bcr-abl存在并不提示疾病复发;检测外周血bcr-abl或许更适于临床上对患者的随访。

伴t(8;21)异常白血病行异基因造血干细胞移植后并发粒细胞肉瘤的临床分析

目的:观察1例15岁伴有t(8;21)异常的急性髓性白血病患者骨髓移植后缓解情况。方法:患者经TA方案诱导化疗达到完全缓解,继续强化巩固治疗3个疗程后行同胞HLA相合造血干细胞移植术。结果:患者移植后7个月因左膝关节疼痛再次入院,局部髂骨活检组织病理及免疫组化证实粒细胞肉瘤的诊断。骨髓涂片及原位杂交术检测AML1/ETO基因证实骨髓仍然缓解。予以中剂量A-rac化疗后出院,在院外随访过程中死亡。结论:此为首例伴有t(8;21)异常白血病行异基因造血干细胞移植术后并发髓外粒细胞肉瘤的报道。

伊曲康唑注射液在血液肿瘤患者经验性抗真菌治疗的临床研究

本研究回顾分析了35例接受化疗或造血干细胞移植的血液肿瘤患者用伊曲康唑进行经验性抗真菌治疗的疗效,探讨其在侵袭性真菌感染中经验性治疗的有效性及安全性。根据IDSA指南推荐,对于使用广谱抗生素治疗4 d以上无效的发热患者,使用伊曲康唑注射液进行经验性抗真菌治疗。结果显示,接受伊曲康唑注射液经验性治疗的35例患者的临床总有效率为62.9%(22/35),联合终点治疗成功率为54.3%(19/35),不良反应事件有6例(17.1%),因不良反应停药2例(5.7%)。进一步分析表明,发热早期(<5 d)使用伊曲康唑经验性治疗反应率更高(P=0.031),临床拟诊患者伊曲康唑治疗有效率明显高于临床诊断及确诊患者(P=0.002),粒细胞缺少期使用唑类预防对伊曲康唑经验性治疗疗效无显著影响(P=0.054)。结论:伊曲康唑注射液是一种安全有效的抗真菌药,在血液肿瘤患者中可以作为经验性抗真菌治疗的首选。

AML1-ETO阳性急性髓系白血病患者c-kit突变及其临床意义

本研究探讨AML1-ETO融合基因阳性急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者c-kit突变的发生情况及其临床意义。采用PCR和直接测序法检测31例AML1-ETO阳性AML患者c-kit基因17外显子突变的发生情况,并分析c-kit基因突变与患者的临床、实验室特征以及疗效的关系。结果表明:31例患者中14例检测到c-kit突变,突变率为45.16%,突变组男性患者的比例为71.43%、初诊时白细胞计数>10×109/L患者的比例为78.57%和伴有髓外浸润患者的比例为21.43%,均明显高于无突变组(29.41%、41.18%、0%,P=0.020,0.036,0.045),两组患者的年龄和骨髓原始细胞比例无明显差异(P=0.437和0.510)。c-kit突变和无突变组化疗完全缓解(CR)率(64.29%∶80%)和复发率(58.33%∶21.43%)的差异无统计学意义(P=0.344和0.054),而死亡率(57.14%)在c-kit突变组明显高于无突变组(20%,P=0.039)。结论:AML1-ETO阳性AML患者c-kit突变常见,突变患者预后差,常规检测c-kit突变对患者的危险度分层、预后评估和选择有效治疗方案有重要意义。