大肠杆菌菌种空间变异的研究

为研究微生物菌种在空间条件下产生的变异，在利用我国发射的返回式卫星上，搭载了适用于突变研究的大肠杆菌菌株ＣＳＨ１０８、Ａ３和Ａ２，使用了三种搭载方式。卫星返回后，测定了菌种的存活及产生的ｌａｃＩ－突变和Ａｒｇ＋回复突变的频率。结果表明：大肠杆菌在空间条件下是可以存活的；经小生物舱搭载的Ａ３菌株产生的ｌａｃＩ－突变体的频率是地面对照的６７倍；铅罐中搭载的ＣＳＨ１０８菌株产生的Ａｒｇ＋的回复突变频率是地面对照的１０倍左右，而且回复体中无义抑制基因的突变频率明显增加。由此可见，空间条件有可能显著地提高微生物中某些基因的突变频率，空间诱变可望成为获得微生物优良菌种的有效途径之一。

新一代分子标记技术──AFLP

ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是近年来发展起来的最有效的新一代分子标记技术．本文对ＡＦＬＰ的发生发展、基本原理、反应程序，在植物分子生物学研究中的应用以及方法本身的优缺点进行了介绍和评述．

大肠杆菌核糖体蛋白质L24和L27突变对λN和λQ基因表达的影响

核糖体是生物体翻译遗传密码的唯一埸所,核糖体各组份的确切功能目前仍不清楚,本实验室的研究已证实:有些核糖体蛋白质突变能在翻译水平上影响核糖体翻译的特异性,本文使用转座子Tn10将核糖体蛋白质L24(rpIX)和L27(rpmA)突变从A19的衍生株转到T83菌株上,并研究这2个突变对λN和λQ基因及对N-lacZ和Q-lacZ融合基因表达的不同影响,为核糖体蛋白质能影响核糖体翻译的特异性提供了又一个实例。

光敏核不育水稻等位突变系的AFLP分析

通过对NK58S和NK58F这一对光敏核不育水稻等位突变系的AFLP分析,比较了AFLP,RAPD及RFLP检测DNA多态性的相对效率。结果表明,这三种分子标记的DNA多态性检出效率依次为AFLP>RAPD>RFLP;找出了水稻AFLP分析的最适反应条件;通过AFLP和集群混合分析(Bulkedsegregatinganalysis,BSA),筛选出了一批与水稻光敏核不育(PGMS)基因连锁的多态性AFLP产物,已完成了对4个多态性AFLP产物的克隆,Southern杂交证明其中2个为单拷贝顺序,另外2个为低拷贝顺序。对上述三种分子标记各自的优缺点及它们在DNA多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。

RSAP标记技术在紫菜遗传多样性检测及种质鉴定中的应用

限制性位点扩增多态性（restriction site amplification polymorphism，RSAP）是根据基因组内普遍存在的酶切位点来设计特殊的引物，通过简单的梯度PCR反应来产生多态性。本研究首次将RSAP标记技术成功应用于紫菜遗传多样性检测和种质鉴定。利用所建立的适合于紫菜RSAP分析的PCR反应体系和反应条件，使用30对引物对15个紫菜系DNA进行了PCR扩增，经过3次重复验证，有12对引物能够扩增出清晰且稳定的条带。这12对引物共扩增出413条带，其中408条为多态性条带，多态性比例96％，平均每对引物产生34条多态性条带，片段大小在50-500bp之间。利用这413条带进行聚类分析，产生了这15个紫菜系的进化树。15个紫菜系在0.69相似系数水平上分为两大类：一类包括坛紫菜；另一类包括条斑紫菜和少精紫菜。选2对引物R1／R6和R3／R4所扩增的10条稳定且重复性好的条带，构建了这15个紫菜系的RSAP-DNA指纹图谱。在该指纹图谱中，每个紫菜系都有其独一无二的指纹模式，能够很容易地与其它紫菜系相区分。

根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种

研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。

月季种质鉴定和多样性分析

利用RAPD技术对 2 8个月季品种和 2个蔷薇品种进行了遗传多样性分析 ,从 14 5个引物中筛选出 12个引物 ,可以扩增出清晰、稳定和多态性高的产物。其中 3个引物从 30个材料中扩增出 3个品种特异的RAPD分子标记 ,并将其中的一个成功地转换成了SCAR标记。利用筛选出的 12个引物扩增出的 6 5条多态性片段作了聚类分析 ,对这些月季品种的亲缘关系和进化作了初步探讨。

玉米自交系8112特异SCAR标记的获得

通过对３个玉米骨干自交系特异ＲＡＰＤ标记的克隆、测序、合成特异引物及ＳＣＡＲ－ＰＣＲ反应条件优化，成功地把其中一个自交系８１１２的特异ＲＡＰＤ标记（０．９ｋｂ）转换成了稳定的ＳＣＡＲ标记。

AFLP分析中多态性扩增产物的回收、克隆及鉴定

本研究在摸索和优化了水稻ＡＦＬＰ分析体系的基础上，发展了多态性ＡＦＬＰ产物的高效克隆方法。特异ＡＦＬＰ扩增产物直接从变性聚丙烯酰胺凝胶上分离纯化，再经过一至二轮ＰＣＲ扩增，即可高效地克隆于ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ系统中。本实验利用该方法成功地克隆了水稻温敏核不育等位突变系５４６０Ｓ和５４６０Ｆ间的４个多态性ＡＦＬＰ产物，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析证明其中３个产物在水稻基因组中为单拷贝序列，另一个为低拷贝序列。ＡＦＬＰ技术强有力的多态性检出能力再结合多态性扩增产物的高效克隆方法，为寻找与目标基因紧密连锁的分子标记提供了有力工具。

山东省玉米骨干自交系间亲缘关系的RAPD分析研究

在对山东省玉米生产上应用的12个优良自交系进行RAPD分析的基础上,比较了这些自交系间遗传上相似的程度.研究发现,山东玉米亲本自交系间相似系数高达0.66～0.97,说明它们遗传上关系较近,应当拓宽种质基础,丰富自交系DNA水平上的多样性.以RAPD标记进行的聚类分析,将山东玉米优良自交系分为三大类群:第一大类群是由黄早4及其衍生系组成,包括三个亚群;第二大类群包括478和488两个姊妹系;第三大类群则由107和Mo17等构成.从育种实践上对山东省玉米生产上的强优势杂交种的亲本组合的分析,有力地证明这种以RAPD标记进行的在DNA水平上的亲缘分群方法比单纯以系谱分群更合理、更可靠.

紫菜无性系特异SCAR标记的获得

1 引言 紫菜为我国重要的大型经济海藻,在开发利用紫菜种质资源的过程中,种质混杂问题,长期以来一直是困扰其应用的严重问题.分子标记技术,如RAPD技术、AFLP技术、SSR技术克服了传统的形态分类学方法的诸多缺点,已经广泛应用于农作物的种质资源鉴定中[1-5].但是在海藻种质鉴定中的应用刚刚起步[6].

西瓜核心种质的AFLP指纹图谱和SCAR标记(英文)

西瓜 (Citrulluslanatus (Thunb .)Mansf.)种质资源的鉴定与评价是对其有效利用的基础。以往的研究表明 ,西瓜是一种遗传资源特别狭窄的作物 ,在用同工酶、RAPD及SSR技术对西瓜种质资源进行鉴定时 ,发现很难将品种完全区分开来。本研究利用高效可靠的AFLP技术 ,对 30个西瓜核心种质材料进行了遗传分析 ,最终建立了这30个材料的DNA指纹图谱。在该图谱中 ,每个材料均有其独特的“指纹” ,材料之间可以相互区分开来。为了进一步利用AFLP分子标记 ,将重要抗病种质材料“PI2 96 341”

RAPD标记在紫菜遗传多样性检测和种质鉴定中的应用(英文)

用RAPD技术对 4类紫菜 (Porphyrayezoensis,P .haitanensis,P .katadaivar.hemiphylla和P .oligosper matangia)的 15个无性系丝状体进行了遗传多样性分析 ,从 5 0个OPERON引物中经过初筛 ,其中 6个引物可以扩增出稳定的可重复的图谱。这 6个引物共扩增出了 6 9条带 ,多态性比例达 97.1%。根据RAPD结果将这 15个无性系聚类为 3个群 ,此聚类结果与分类地位基本相符。利用来自引物OPJ_18和OPN_0 2扩增的 8条多态性条带构建了紫菜的DNA指纹图谱 ,该图谱可以方便地应用于紫菜无性系的种质鉴定。本研究还回收并克隆了 5个紫菜无性系的 5条特异片段 ,将用于无性系鉴定、种质资源保护和产权保护。

用于紫菜无性系种质鉴定的计算机化DNA指纹的建立

研究用 ＲＡＰＤ技术对条斑紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）、坛紫菜（Ｐ． Ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）。半叶紫菜（Ｐ．Ｋａｔａｄａｉ ｖａｒ． Ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ）和少精紫菜（Ｐ．Ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样分析，用１２０个Ｏｐｅｒｏｎ引物进行了筛选，从中选用来自ＯＰＪ－１８和ＯＰＮ—０２扩增出的８条多态性条带构建了这１５个紫菜无性系的ＤＮＡ指纹图谱，在该图谱中每个紫菜无性系均有各自特异的ＤＮＡ指纹．用１和０分别表示ＤＮＡ带的出现和缺失，将各个无性系的ＤＮＡ指纹用计算机语言表示，建立了１５个紫菜无性系的计算机化ＤＮＡ指纹；在此基础上设计了紫菜无性系种质鉴定的计算机软件ＰｈＧＩ．

紫菜无性系特异分子标记的获得

用RAPD技术对我国紫菜生产中广泛应用的 15个无性系丝状体进行了遗传多样性分析 ,用 12 0个Operon引物进行了筛选 ,从中挑选可以扩增出清晰、稳定、重复性好和多态性高的 8个引物 ,并用这 8个引物从 15个无性系中找到了 8个特异的RAPD分子标记 ,而且分别来自 8个不同的无性系 ,利用这些标记可以有效地对这 8个无性系进行特异性鉴定。现已完成了对这些RAPD特异产物的回收和克隆。把它们转换成SCAR标记或STS标记的工作正在进行中。这些特异标记的发现对紫菜无性系种质鉴定、持久合理利用以及产权保护具有重要意义。

番茄转TCS基因植株的生物学性状研究

研究和比较了番茄转ＴＣＳ基因植株与对照植株的生物学特性。结果显示，转基因植株的生物学性状与对照存在着明显的差异，株高比对照低约４１．５ｃｍ，每序花数比对照多３．２朵，单果重比对照低３７ｇ，叶片叶绿素含量、光合速率及气孔导度分别比对照高４０．６％、１２．５％和１１．１％，对ＴＭＶ、ＣＭＶ和ＴＢＲＶ有一定抗性，叶片能抑制蚜虫和粉虱的生长。

转AmGS基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析

对转AmGS基因(从沙冬青中克隆的肌醇半乳糖苷合成酶基因)的红叶石楠植株进行多项分子检测(PCR,Southern,RT-PCR),结果表明AmGS基因已经整合到转基因株系R6和R7的基因组DNA中,并检测到转录水平上的表达。随后,经对R6和R7两个转基因株系进行连续6代芽切扩繁继代株系的PCR检测,发现导入的AmGS基因传递到所有芽切扩繁后代植株中。植株抗寒能力试验结果表明,在相同低温处理条件下,转基因株系均比未转基因植株的存活率要高。相对电导率测定结果表明,随着处理温度的降低,2个转基因株系相对电导率升高的程度明显低于未转基因的对照植株。低温半致死温度(LT50)测定结果表明,2个转基因株系(R6和R7)的LT50明显低于未转基因的对照植株。上述结果说明导入的AmGS基因提高了转基因株系的抗寒性。

紫菜自由丝状体SCAR标记的获得

应用RAPD技术对27个紫菜自由丝状体材料进行遗传多样性分析，获得7个紫菜材料的7个特异标记。对这7个特异片段进行了回收、克隆，对其中5个片段已完成了序列测定，根据这5个序列的两端顺序合成了5对SCAR—PCR引物，经过优化PCR反应条件成功地将紫菜材料Porphyra tenuipedalis的RAPD扩增片段OPZ-19140和P．yezoensis qd-8的RAPD扩增片段OPJ-18488转换成两个SCAR标记。因为这两个标记的序列已全部测通，故又称为STS标记。这两个SCAR标记(STS标记)可以作为紫菜P．tenuipedalis和P.yezoensis qd-8自由丝状体材料种质鉴定、优良品系选育和产权保护的分子标记。

TCS基因转化泡桐及抗病能力

泡桐（Paulownia）是经济价值较高的优良绿化造林树种。由于丛枝病的危害,每年我国林业的直接经济损失就高达数千万元,并且严重影响农民种植泡桐的积极性（杨俊秀等,2007）。近年来。

天花粉蛋白基因转化番茄的研究

核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）是一类作用于核糖体，抑制蛋白质合成的蛋白毒素，它具有广谱抗植物病毒和动物病毒的活性，在异种植物中的抗性效应尤其明显。迄今为止，人们已经从５０多种植物中分离出６０多种不...