FAM84B抑制p53通路对食管鳞癌细胞增殖作用的影响

目的 研究食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中FAM84B的表达情况,及其通过p53通路对细胞生长的调控机制。方法 收集中国食管癌高发区山西省肿瘤医院及新疆医科大学附属肿瘤医院共508份ESCC肿瘤样本及其邻近正常组织样本,进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS)和外显子测序(whole exome sequencing,WES),筛选出拷贝数明显扩增的FAM84B基因。在高表达FAM84B的ESCC细胞系KYSE150中,用小干扰RNA感染法干扰FAM84B后,采用MTT和硬克隆形成试验检测FAM84B对细胞生长的影响;在低表达FAM84B ESCC细胞系KYSE450中,用质粒pCMV-3×flag-FAM84B过表达FAM84B后,采用MTT和硬克隆形成试验检测FAM84B对细胞生长的影响。采用Western blot法检测敲低FAM84B表达对细胞周期蛋白CDK4、CDK6和CCND1表达的影响。结果 对508份ESCC石蜡切片进行WGS,发现109份FAM84B基因拷贝数扩增(21.45%);FAM84B基因存在于8q24.21附近,并且存在1个显著放大的病灶峰。敲低FAM84B抑制ESCC细胞增殖,过表达FAM84B促进ESCC增殖。FAM84B低表达促进p53介导的细胞周期进行。结论 FAM84B通过抑制ESCC细胞p53通路蛋白的表达,促进细胞周期由G1期向S期转化,进而促进细胞增殖。

CDCA7调控CCNB1IP1表达影响食管鳞癌发生发展的作用机制

目的 探讨CDCA7对食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞系KYSE450、KYSE150和KYSE180体外增殖能力的影响,并进一步分析CDCA7促进ESCC细胞增殖的作用机制。方法 利用CDCA7-siRNA敲低KYSE150和KYSE450细胞系中的CDCA7,并利用过表达载体在KYSE180细胞系中进行CDCA7的外源表达;通过qRT-PCR和Western blot法检测KYSE150、KYSE450细胞系CDCA7的敲低效率和KYSE180细胞系CDCA7的外源过表达效率;CCK8、硬克隆试验检测CDCA7对ESCC细胞体外增殖能力的影响;染色质免疫共沉淀测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-sequence)寻找CDCA7调控的下游靶基因,Western blot和qRT-PCR法分别检测敲低和过表达细胞系中靶基因CCNB1IP1的mRNA和蛋白表达水平;采用TCGA数据库转录组数据分析CDCA7与CCNB1IP1的mRNA表达水平的相关性;双荧光素酶报告试验验证CDCA7对CCNB1IP1的转录调控作用。结果 CDCA7在食管鳞癌组织中高表达,且CDCA7表达升高的ESCC患者预后差;敲低CDCA7显著抑制ESCC的细胞增殖,相反,过表达CDCA7显著促进ESCC的细胞增殖;CDCA7能够在转录水平上正向调控CCNB1IP1的表达,从而影响CCNB1IP1的蛋白表达水平。结论 CDCA7通过转录水平调控CCNB1IP1的表达影响CCNB1IP1蛋白表达水平,从而调控ESCC细胞增殖以及ESCC的发生发展。