阻遏矽肺纤维化的实验研究

目的比较骨髓间充质样干细胞（BM＋MSCs）与pcDNA3．1肝细胞生长因子（HGF）转染的BM—MSCs对SiO，所致大鼠肺泡炎和早期肺纤维化的影响并探讨其机制。方法收集培养雄性Wistar幼鼠的原代BM-MSCs，并进行4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记。将50只雄性Wistar大鼠气管滴注40mg／mlSiO2，混悬液1ml造模后，随机分为模型组、BM—MSCs组和pcDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组。造模次日，模型组（10只）：尾静脉注入PBS1ml；BM—MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6／mlBM-MSCs1ml；pcD-NA3．1-HGF＋BM-MSCs组（20只）：尾静脉注入10^6个／mlpcDNA3．1-HGF转染的BM-MSCslm1。14和28d后，分别处死大鼠，取肺组织冰冻切片，荧光显微镜下检测体内DAPI标记细胞；HE和Masson染色观察肺炮炎和纤维化情况；免疫印迹（Westernblot）法测各组大鼠肺组织的I-IGF表达量；ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子（TNF）．or．的含量，样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸（HYP）的含量。结果14、28d时，pcDNA3．1-HGF＋BM-MSCs组肺组织肺泡炎评分（14d：1．16±0.3，28d：0.8＋0．20）均低于同时期BM-SCs组（14d：1．68＋0．17，28d：1．58±031）和模型组（14d：2．36＋_0．17，28d：2．80_＋0．14），BM—MSCs组肺泡炎评分均低于同时期模型组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。14、28d时pcDNA3．1-HGF＋BM～MSCs组肺纤维化评分（14d：0．10＋_0．11，28d：1．16＋_0．13）均明显低于同时期BM—MSCs（14d：0．54＋0．15，28d：1．36±0．13）和模型组（14d：0．64＋0．09，28d：1．84＋0．17），差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时pcDNA3．1一HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量[14d：（280．48＋23．11）pg／mg，28d：（249．78_＋22．33）pg／mg]均明显低于BM—MSCs组[14d：（342．58_＋35．34）pg／mg，28d：（319．5l±17．84）pg／mg]~模型组『14d：（442．29±36．76）pg／mg，28d：（348．53＋_33．95）pghngl，BM—MSCs组肺组织匀浆中TNF—d含量低于模型组，差异均有统计学意义（P〈O．05）。14、28d时peDNA3．1-HGF＋BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量f14d：（O．46＋0．04）~g／mg，28d：（0．65_＋0．05）Ixg／mg】均明显低于同时期BM—MSCs组[14d：（0．63＋0．04）~g／mg，28d：（1．04_＋0．07）jxg／mg】和模型组【14d：（0．72_＋0．06）}xg／mg，28d：（1．39＋0．06）jxg／mgl，差异均有统计学意义（P〈0．05）；28d时，BM—MSCs组肺组织匀浆中HYP表达量低于模型组，差异有统计学意义（P〈O．05）。结论应用pcDNA3．1-HGF转染后的BM—MSCs比单独应用BM—MSCs能更有效地对抗SiO：诱导的大鼠肺泡炎和早期肺纤维化，作用机制可能与其减轻肺组织的炎症有关。