天然纤溶酶的来源及生产方法研究进展

全球每年有1790万人丧命于心血管疾病,占全球死亡人数的31%。而在各种心血管病中,血栓形成是最常见的一种,如何有效防治血栓是一个全球性的重大医学问题。在血栓防治中,纤溶酶潜力巨大。纤溶酶是一种蛋白水解酶,对血栓栓塞性疾病的防治非常重要。该文综述了血栓形成及纤溶酶的作用机制,总结了纤溶酶的来源(海洋微生物、发酵食品微生物、植物和动物)和生产方法,并对纤溶酶生产方法作出总结和展望,以期为相关领域研究提供参考。

等待肾移植患者体内预存HLA抗体特点及致敏因素分析

目的分析研究等待肾移植手术的患者体内预存群体反应性抗体(PRA)特点及其产生原因。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测1 618名等待肾移植患者PRA,根据患者原有的输血史、妊娠史和移植史,将其分为5组:未输血未妊娠组(n=804);单纯输血组(n=330);单纯妊娠组(n=229);输血合并妊娠组(n=196);有移植史组(n=59)。结果 1 618名等待肾移植患者中,未输血未妊娠组、单纯输血组、单纯妊娠组、输血合并妊娠组和有移植史组PRA阳性率分别为5.97%、18.18%、22.71%、48.47%和76.27%。患者出现频率较高的HLAⅠ类抗体有抗-A2、-A23、-A66和-B7等,HLAⅡ类抗体有抗-DR52、-DR53、-DQ5和-DQ6等。有移植史组患者产生DR53和DR52抗体的频率较高,占HLAⅡ类抗体总数的19.32%。结论不同个体对相同致敏因素反应不同;在相同致敏因素存在的情况下,男性和女性患者PRA阳性率差异无统计学意义;输血史、妊娠史和移植史可协同提高致敏率;抗体产生的频率与抗原频率分布不相一致;HLAⅡ类抗体中,DR52和DR53抗体的产生与移植物失功存在一定关联性。

案例教学法在“生物化学”课程中的应用与分析——以医学院校为例

“生物化学”在医学院校是基础医学的一门核心课程,因为课程理论性强,内容庞杂且抽象,学生学习兴趣不高,学习主动性不强。针对以上现状,也为适应中医药本科院校培养应用型人才的目标,将案例教学法引入“生物化学”教学,旨在激发学生学习“生物化学”的热情和兴趣,调动其学习积极性和主动性,改善医学院校“生物化学”课程的教学质量,提高学生综合能力,培养学生的临床思维,培养具有综合素质、全面发展、符合21世纪医学培养目标的医学人才。

医学院校《生物化学》课程教学方法的应用与分析

本文阐释了适用于医学《生物化学》课程的三种教学方法(传统教学法、案例教学法和自学自讲、自我展示教学法)的优点、不足及其在医学《生物化学》课程中的运用。结合课题组的教学研究,重点阐释了自学自讲、自我展示教学法的一般流程、优缺点、效果评价及改进措施。文章旨在通过对三种教学方法的比较分析,初步探讨适用于医学《生物化学》课程的教学模式。

RhD阴性围产期妇女RH基因型及同种免疫研究

目的研究江西地区RhD阴性围产期妇女RhD抗原的基因分型及RhD抗原同种免疫状况,寻找D抗原免疫的具体特点,并针对RhD阴性围产期妇女同种免疫的特点制定不同的检测和防治策略。方法详细记录2013年-2014年170例初筛为RhD阴性的围产期妇女孕产史;采用血清学方法确认Rh血型系统各抗原特异性,进行不规则游离抗体筛查和抗体特异性鉴定;使用PCR-SSP法对IAT确认为RHD阴性的样本行RHD基因分型。结果 RhD阴性孕妇RhC/E血型分型结果中前两位为:ccee:94例(55%)与Ccee:54例(32%);RHD基因分型结果为:RHD-CE(2-9)-D型:107例(63%),DEL RHD1227A:21例(12%),弱D15型:5例(3%),RH阳性:32例(19%),RH阴性:5例(3%);170例初筛为RhD阴性的孕产妇抗中共有8例产生了抗-D,产生比例为4.71%,此类孕妇均多次流产且至少生产一次,且Rh血型系统血清学分型均为ccee,8人中,RHD基因学分型为3例RHD-CE(2-9)-D型,5例RHD阴性。结论流产史与生育史和RhD阴性孕妇抗-D的产生呈正相关,怀孕生产次数增加提高了Rh D阴性围产期妇女产生抗-D的可能性;产生抗-D的RhD阴性孕妇C/E血清型主要为ccee;除RHD阴性外,RHD-CE(2-9)-D型孕妇产生抗D的几率较高;及时检测围产期孕妇的RHD基因型并筛查其血清抗体,可对RhD新生儿溶血病的及时治疗提供重要依据。

154例RhD阴性表型个体的D基因多态性分析

目的研究RhD阴性个体基因多态性。方法采用抗人球蛋白试验（IAT）确认RhD阴性个体;对RhD阴性个体再运用PCR-SSP方法分析其基因分布情况。结果154例IAT确定为RhD阴性的个体中,86例所检测的外显子完全缺全（55.84%）、36例完整（23.38%）、32例部分缺失（20.78%）;其检出DelRhD1227A、弱D15型、RHD-CE（2~9）-D、DVa（Has）、DVIⅢ等多种RhD阴性等位基因。结论江西地区血清学RhD阴性人群中存在RHD基因且呈现多态性,提示可联合应用血清学和基因分型两种方法来检测D抗原。

抗流感药物研究进展

流感是由流感病毒引起的高度传染性的病毒性疾病,虽然疫苗接种在预防流感大流行方面发挥了重要作用,但由于流感病毒的抗原变异和易感人群的存在,每年都会出现流感的散发或小规模流行,开展及时的药物治疗,是有效减轻流感症状和并发症发生的有效途径,通过把抗流感病毒药物分为西药、中药和生物医药类这三大类并对其研究进展分别进行了综述。

高温对大鼠组织CS、OGDH含量和下丘脑线粒体数量的影响

为了解高温环境对正常大鼠和中枢麻醉大鼠腓肠肌、肝组织柠檬酸合酶(CS)、酮戊二酸脱氢酶(OGDH)含量和下丘脑线粒体数量等能量代谢指标的影响。将40只SPF级SD大鼠,随机分为常温正常对照组(常对组)、高温正常对照组(高对组)、常温中枢麻醉组(常麻组)、高温中枢麻醉组(高麻组),连续饲养30d后测定大鼠葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和腓肠肌、肝组织CS、OGDH含量,并观察下丘脑线粒体数量。结果显示,高对组和高麻组的体重和肝组织OGDH的含量、常麻组和高麻组血清TC、高对组和常麻组肝组织CS的含量均显著下降(P<0.01,P<0.05),而高对组和高麻组血清TG和腓肠肌OGDH的含量、常麻组和高麻组腓肠肌CS的含量和下丘脑线粒体数量均显著升高(P<0.01,P<0.05);与常麻组比较,高对组和高麻组的体重和肝组织OGDH的含量、高对组腓肠肌CS的含量和下丘脑线粒体数量均显著下降(P<0.05,P<0.01),但高对组和高麻组血清TG的含量、高麻组肝组织CS的含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。由此认为,高温可降低大鼠体重、血清TC、肝组织OGDH含量,增高血清TG、腓肠肌OGDH、CS含量,中枢神经麻醉对以上结果均有一定的协同作用;中枢神经麻醉可显著增加大鼠下丘脑线粒体数量,高温环境对其增加有一定协同作用。

Kidd血型抗-JK^a致1例疑难配血结果分析

Kidd血型系统是目前认知已较为清楚的人类红细胞血型系统之一，JKa抗原在20世纪50年代首次被发现。由于该系统抗体性质的特殊性和复杂性，在临床上常导致严重的迟发性溶血输血反应，引起急性溶血性输血反应亦偶见报道。笔者在输血前疑难交叉配血的抗体检测中发现抗-JKa抗体，并对其血型进行检测，现将结果报告如下。

优化冰冻血小板制备条件的初步研究

目的探讨最佳的冰冻血小板制备条件。方法分组使用两种浓度(75%或100%)的冰冻血小板保护剂二甲基亚砜(DMSO),根据质量体积比加入需冰冻的血小板中,使之终浓度为5%,采用不同解冻方法复苏血小板,对比组间差异。结果 DMSO的浓度、注入速度和操作状况对血小板质量均有一定影响;各种制备条件所得的结果的差异均有统计学意义;DMSO原液与75%DMSO制备的冰冻血小板复融后絮状物的出现差异有统计学意义。结论 75%的DMSO更适合制备冰冻血小板。

基因工程实验考核方式的新探索——以江西中医药大学生物工程专业为例

基因工程实验教学是基因工程教学的重要组成部分。基因工程实验的考核方式是引领学生实验的导向,也是反映学生实际能力的标尺。本文基于江西中医药大学基因工程实验考核方式的改革和实践,探索了全程式的实验考核新方式。实践结果表明,这种考核方式能有效促进学生多方面能力的培养。

STR峰高与峰下面积在干细胞移植后状态判断的应用探讨

目的探讨短串联重复序列(STR)信息位点的峰高与峰下面积在异基因造血干细胞移植后嵌合状态判断中的作用,寻找适合于异基因造血干细胞移植状态判断的指标。方法分别采集两名无关供者及M2患者及其HLA全相合供者两组血标本,以白细胞含量为依据制备不同比例混合血样,提取DNA,使用STR试剂盒,建立PCR扩增体系,在ABI3100仪上检测扩增片段,筛选得到理想的信息位点,获取其峰高及峰面积进行移植嵌合率的计算。结果各筛选位点以峰高或面积得出的模拟嵌合率间差异均无统计学意义,且各位点模拟嵌合率与制备的浓度梯度之间的相关系数均在0.9965以上。结论峰高或峰下面积均可作为嵌合状态的定量监控指标。

淡豆豉中产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗作用和毒素合成关键基因mRNA表达的影响

目的考察从淡豆豉Sojae Semen Praeparatum(SSP)炮制过程中分离的15株产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出具有抑制产毒黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的高效拮抗菌,探究高效拮抗菌发酵产物对黄曲霉毒素(aflatoxins)合成关键基因mRNA表达量的影响。方法运用平板对峙法与十字交叉法检测15株产γ-氨基丁酸微生物及其发酵产物对产毒黄曲霉标准株(简称:产毒标准株)生长的影响,超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测15株菌对AFB1的降解效果,考察其对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出高效拮抗菌;针对高效拮抗菌发酵产物分别运用菌丝干重法检测其对产毒标准株菌丝生长的影响,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测其对黄曲霉毒素合成关键基因(aflR、aflD、aflM、aflP)mRNA表达的影响。结果15株菌及其发酵产物对产毒标准株的生长抑制率分别在15.88%~56.05%和25.74%~52.12%,对AFB1降解率在2.74%~57.87%,表明它们对产毒黄曲霉菌均有一定的拮抗作用,并筛选出具有高效拮抗作用的黑曲霉菌Aspergillus niger(JC2)和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(Xd1)。当高效拮抗菌发酵产物加入量为2000µL时,JC2和Xd1对产毒标准株菌丝生长的抑制率分别为73.82%和63.34%,且能明显抑制黄曲霉毒素合成关键基因aflR、aflD、aflM、aflP的mRNA表达。结论淡豆豉炮制中存在既能产γ-氨基丁酸又能明显抑制产毒标准株生长和产毒的拮抗菌,其拮抗作用可能通过抑制产毒标准株菌丝生长和毒素合成关键基因的mRNA表达。

淡豆豉炮制过程中不产毒黄曲霉菌的分布特征及其对产毒菌的拮抗作用

目的明确淡豆豉Sojae Semen Praeparatum炮制中不产毒黄曲霉菌Aspergillus flavus的分布特征及其拮抗能力。方法按实验室前期已建立的规范炮制工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉炮制中9个不同时间点的样本,各样本用氯硝胺18%甘油培养基(DG-18)进行培养、分离纯化,经形态学初筛、分子生物学鉴定为黄曲霉菌。通过紫外荧光法初筛和超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定黄曲霉菌产毒能力,确定为不产毒黄曲霉菌(简称:不产毒菌)。用平板对峙法检测不产毒菌及其代谢产物对产毒黄曲霉菌标准株(产毒菌)生长的影响。结果从淡豆豉炮制过程中共筛选出21株不产毒菌,其中“黄衣上遍”过程中的第3、6天分别筛选出3、6株,“再闷”过程中的第3、6、9天分别筛选出2、7、3株,再闷第6天筛选到的不产毒菌最多。不产毒菌对产毒菌的生长抑制率在26.75%~36.69%,抑制效果最好的是F6-L8(指第1批在“黄衣上遍”阶段的发酵第6天样品中筛选到的第8株疑似黄曲霉菌),为36.69%,发酵上清液对产毒菌的抑制率在14.29%~43.23%,抑制效果最好的是Z3-X1(指第2批在“再闷”阶段的第3天样品中筛选到的第1株疑似黄曲霉菌),达43.23%。结论淡豆豉炮制过程中存在不产毒黄曲霉菌,且在炮制的不同时间点其数量变化呈现“上升-下降-再上升-再下降”的独特趋势,不产毒菌及其发酵液具有抑制产毒菌生长的作用。为进一步研究不产毒黄曲霉菌在淡豆豉炮制过程中的作用、黄曲霉毒素污染的生物防控提供实验依据。

淡豆豉炮制过程中产纤溶酶微生物的筛选和鉴定

目的筛选和鉴定淡豆豉炮制过程中产纤溶酶的优势菌株。方法按《中国药典》2020年版制备淡豆豉;采用酪蛋白平板法和纤维蛋白平板法分别对淡豆豉炮制不同时间点样本中产纤溶酶的微生物进行初筛和复筛;将产纤溶酶微生物分别接种在特定的液体培养基中培养,获得纯种发酵液,用纤维蛋白平板法测定发酵液的纤溶酶活力;应用16S rDNA和18S rDNA通用引物分别对产纤溶酶细菌和真菌进行PCR扩增、对扩增产物进行测序,测序结果通过NCBI同源性比对、MEGA4.1软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定。结果筛选获得3种产纤溶酶细菌,分别为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia、微球菌Micrococcus。纤维蛋白平板法测定纯种发酵液纤溶酶活力的结果显示,嗜麦芽窄食单胞菌所产纤溶酶活力最高,达527.49 IU/mL。结论淡豆豉炮制过程中存在高产纤溶酶的优势菌株,淡豆豉的溶栓作用值得进一步研究。为揭示淡豆豉炮制中纤溶酶形成机制奠定基础。

基于学生自主学习能力培养的教学模式在《细胞生物学》课程中的应用

长久以来,《细胞生物学》课程的教学大多沿用传统教学方法,即主要以教师讲、学生听为主,此教学方法强调对知识的传承,但学生的自主学习能力得不到充分发挥。在新形势下,自主学习能力是竞争激烈的现代社会重要的生存能力,对当代大学生来说,自主学习能力的培养比知识的获取更为重要。针对《细胞生物学》现有教学模式的不足,该文以学生自主学习能力培养为着眼点,在教学过程中,采用问题讨论式教学结合思维导图教学的教学模式,改变一考定成绩的考核评价体系,初步探究了旨在培养学生自主学习能力的《细胞生物学》课程教学模式。实施效果表明,该教学模式达到了预期教学目标,有助于培养学生的自主学习能力。

半夏曲炮制过程中微生物数量动态变化的初步分析

目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)制备半夏曲,取半夏曲炮制过程中0,30,60,90,120 h共5个不同时间点样品,分别用选择性培养基进行细菌、霉菌、酵母菌的培养和分离纯化,并进行菌落计数;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,宛氏拟青霉Paecilomyces variotii,丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis,黑曲霉Aspergillus niger进行绝对定量,分别以枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉重组质粒为对照品,经倍比稀释后制作标准曲线,对半夏曲炮制至5个不同时间点(0,30,60,90,120 h)样品中的4种微生物进行定量分析。结果:半夏曲炮制过程中细菌数量少且变化平缓,而酵母菌和霉菌数量至发酵后期时迅速增加,至发酵结束时均>1×10^6CFU·m L^-1。枯草芽孢杆菌5个不同时间点样品中的拷贝数分别为3.53×10^5,7.56×10^4,1.58×10^5,1.90×10^6,1.85×10^6copies·g^-1;宛氏拟青霉的拷贝数为0,0,0,3.45×10^7,4.15×10^8copies·g^-1;丝衣霉菌的拷贝数为0,0,0,1.04×10^8,2.28×10^8copies·g^-1;黑曲霉的拷贝数为0,0,9.48×10^5,1.47×10^6,7.56×10^6copies·g^-1。结论:半夏曲炮制过程中微生物菌群变化趋势可以用4种优势微生物的动态变化来反映,霉菌在半夏曲炮制中可能起重要作用。荧光定量PCR技术具有快速灵敏、重复性好和特异性高的优点,适用于半夏曲的炮制机制研究。

花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响

目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因m RNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况。结果:模型组COX4I1蛋白量和m RNA水平均比空白组显著增加(P<0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 m RNA水平(P<0.01,P<0.05)。模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P<0.05)。模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 m RNA水平显著增加(P<0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 m RNA水平(P<0.05,P<0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 m RNA水平(P<0.05,P<0.01)。花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响。结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使m RNA水平降低。

“科学前沿进课堂”——高校生物化学特色教学初探

生物化学是高校许多专业的专业基础课,该课程原理繁多、概念抽象,如何让学生掌握其知识与技术,激发学生学习热情是教学中值得研究的问题。本文根据生命科学研究迅猛发展的特点,并结合自己的教学经验,详细介绍了"科学前沿进课堂"的特色教学法,包括该教学法的特点、素材选择和准备、该教学法的课堂实施及其教学效果等,旨在促进与同行的教学交流,共同提高高校生物化学的教学质量。

浅议基础医学课程的课堂导入设计

课堂导入,是指在新的教学内容或教学活动开始时,引导学生进入学习状态的教学行为。一个好的课堂导入不但可以迅速规复课堂秩序,吸引学生注意,更为重要的是能够激发学生的学习兴趣和求知欲望,使学生进入情绪高昂、智力振奋的心理状态,从而提高听课效率[1-2]。反之。