独活寄生汤对骨关节炎软骨退变的影响及其作用机制

目的:探讨独活寄生汤对骨关节炎软骨退变的影响及其作用机制。方法:将45只8周龄雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,每组15只。模型组、独活寄生汤组采用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,空白组不做任何处理。独活寄生汤组给予9.3 g·kg-1的独活寄生汤水煎浓缩液进行灌胃,模型组和空白组给予等剂量生理盐水灌胃;每天灌胃1次,连续灌胃12周。末次灌胃后分别取各组大鼠双侧股骨髁,采用HE染色观察关节软骨组织形态,并采用Mankin's关节软骨组织学评分法评价软骨退变程度;采用Western blot法检测软骨中G蛋白偶联信号传导系统的关键调控因子的蛋白表达情况。分别从模型组和独活寄生汤组各取50 mg关节软骨组织,采用基因芯片检测软骨基质降解基因表达情况。结果:(1)软骨组织形态。空白组关节软骨结构层次清晰,潮线完整,软骨表面较为平滑;模型组关节软骨结构层次较为紊乱,未见潮线,表层软骨膜破损,膜样结构消失并呈丝绒样;独活寄生汤组关节软骨结构层次较为清晰,软骨破坏程度比模型组轻。(2)软骨退变程度。3组大鼠关节软骨的Mankin's组织学评分比较,差异有统计学意义[(3.46±2.04)分,(12.58±2.55)分,(7.75±1.91)分,F=13.114,P=0.006];空白组和独活寄生汤组低于模型组(t=-5.114,P=0.002;t=2.709,P=0.035);空白组与独活寄生汤组比较,差异无统计学意义(t=-2.406,P=0.053)。(3)药物干预后G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子的蛋白表达。3组大鼠G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子Gαs、Gαq、Gαo、Gαi蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义[(1.59±0.09)kDa,(1.01±0.04)kDa,(1.45±0.14)kDa,F=29.760,P=0.001;(1.03±0.06)kDa,(0.53±0.04)kDa,(0.75±0.09)kDa,F=14.969,P=0.027;(0.36±0.02)kDa,(0.11±0.01)kDa,(0.17±0.02)kDa,F=204.105,P=0.000;(0.20±0.02)kDa,(0.56±0.05)kDa,(0.33±0.07)kDa,F=28.357,P=0.001];空白组Gαs、Gαq、Gαo表达量均高于模型组(t=0.407,P=0.000;t=0.546,P=0.012;t=1.933,P=0.000),Gαi表达量低于模型组(t=-0.750,P=0.000);模型组Gαs、Gαq、Gαo表达量均低于独活寄生汤组(t=-5.584,P=0.001;t=-2.431,P=0.093;t=-4.584,P=0.004),Gαi表达量高于独活寄生汤组(t=4.377,P=0.005);独活寄生汤组Gαs、Gαq表达量与空白组比较,组间差异均无统计学意义(t=-1.816,P=0.119;t=-3.029,P=0.056);独活寄生汤组Gαo表达量低于空白组(t=-14.749,P=0.000),Gαi表达量高于空白组(t=3.119,P=0.021)。(4)药物干预后关节软骨基质降解基因的表达。药物干预后,表达上调2倍以上的软骨基质降解基因为基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)8、硒蛋白P(selenoprotein P,SELP),表达下调2倍以上的软骨基质降解基因为蛋白聚糖酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)1、ADAMTS2、ADAMTS8、钙黏蛋白3(cadherin 3,CDH3)、胶原(collagen,COL)1A1、COL5A1、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、整合素(integrin,ITG)b1、ITGb4、MMP12、MMP14。模型组MMP8、SELP基因表达量均低于独活寄生汤组(1.00±0.00,2.81±0.60,t=-5.225,P=0.035;1.00±0.00,2.31±0.81,t=-2.808,P=0.107),ADAMTS1、ADAMTS2、ADAMTS8、CDH3、COL1A1、COL5A1、CTGF、ITGb1、ITGb4、MMP12、MMP14基因表达量均高于独活寄生汤组(1.00±0.00,0.21±0.05,t=27.366,P=0.001;1.00±0.00,0.31±0.16,t=7.458,P=0.018;1.00±0.00,0.11±0.04,t=38.538,P=0.001;1.00±0.00,0.30±0.23,t=5.271,P=0.034;1.00±0.00,0.12±0.09,t=17.380,P=0.003;1.00±0.00,0.09±0.16,t=10.168,P=0.010;1.00±0.00,0.21±0.30,t=4.605,P=0.044;1.00±0.00,0.37±0.20,t=5.456,P=0.032;1.00±0.00,0.13±0.22,t=6.960,P=0.020;1.00±0.00,0.05±0.08,t=19.388,P=0.003;1.00±0.00,0.05±0.10,t=15.671,P=0.004)。结论:独活寄生汤可以明显延缓骨关节炎软骨的退变,其作用机制可能是通过激活G蛋白偶联信号传导通路而抑制软骨基质降解,从而使受损的软骨组织修复,但其具体作用靶点有待进一步深入研究。

独活寄生汤含药血清抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨独活寄生汤含药血清抑制白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制。方法:将10只2月龄雄性SD大鼠随机分为正常组和独活寄生汤组,独活寄生汤组以9.3 g·kg^(-1)剂量的独活寄生汤灌胃,正常组给予等量生理盐水灌胃;每日灌胃2次,连续1周;末次灌胃后,经腹主动脉取血,分别制备独活寄生汤含药血清及空白血清,低温保存备用。截取6只4周龄SD大鼠膝关节软骨,采用酶消化法分离并培养软骨细胞,光学显微镜下观察软骨细胞形态,并用Ⅱ型胶原酶免疫组化鉴定。取生长良好的第2代软骨细胞,采用MTT法检测含药血清培养24 h、36 h、48 h、72 h后的软骨细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定不同浓度IL-1β干预后软骨细胞的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13含量。将培养好的第2代软骨细胞随机分为空白血清组、模型组、独活寄生汤含药血清组,其中空白血清组以含10%空白血清的培养基(dulbecco modified eagle medium,DMEM)培养;模型组加入浓度为15 ng·m L^(-1)的IL-1β干预24 h后,采用含10%空白血清的DMEM培养;独活寄生汤含药血清组加入浓度为15 ng·m L^(-1)的IL-1β干预24 h后,采用含10%独活寄生汤含药血清的DMEM培养;3组均连续培养48 h,采用Western blot法检测软骨细胞中G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子的蛋白表达情况。结果:(1)软骨细胞形态及免疫组化鉴定结果。第2代软骨细胞胞浆丰富,细胞周围可见具有折光性的细胞外基质,细胞长势呈"铺路石"状,胞浆呈棕黄色阳性染色。(2)独活寄生汤含药血清培养不同时间后的软骨细胞活性。含药血清培养24 h、36 h、48 h、72 h后的软骨细胞活性比较,差异有统计学意义(1.01±0.01,1.03±0.02,1.07±0.01,1.02±0.02,F=8.300,P=0.008)。含药血清培养24 h时的软骨细胞活性低于培养48 h时的软骨细胞活性(t=-4.648,P=0.002);与培养36 h、72 h时的软骨细胞活性比较,差异无统计学意义(t=-1.549,P=0.160;t=-0.775,P=0.461)。(3)不同浓度IL-1β干预后的MMP-13含量。在含IL-1β浓度为0 ng·m L^(-1)、5 ng·m L^(-1)、10 ng·m L^(-1)、15 ng·m L^(-1)、20 ng·m L^(-1)、25 ng·m L^(-1)的DMEM中培养24 h后软骨细胞MMP-13含量比较,差异有统计学意义[(0.07±0.01)ng·m L^(-1),(0.08±0.01)ng·m L^(-1),(0.09±0.01)ng·m L^(-1),(0.10±0.01)ng·m L^(-1),(0.08±0.01)ng·m L^(-1),(0.06±0.01)ng·m L^(-1),F=6.823,P=0.001]。未经IL-1β干预时的软骨细胞MMP-13含量与浓度为5 ng·m L^(-1)、20 ng·m L^(-1)、25 ng·m L^(-1)的IL-1β干预后软骨细胞MMP-13含量比较,差异均无统计学意义(LSD-t=-2.049,P=0.055;LSD-t=-2.083,P=0.052;LSD-t=0.496,P=0.626);浓度为10 ng·m L^(-1)、15 ng·m L^(-1)的IL-1β干预后软骨细胞MMP-13含量高于未经IL-1β干预时的软骨细胞MMP-13含量(LSD-t=-3.412,P=0.003;LSD-t=-4.216,P=0.001);浓度为10 ng·m L^(-1)的IL-1β干预后软骨细胞MMP-13含量与浓度为15 ng·m L^(-1)的IL-1β干预后软骨细胞MMP-13含量比较,差异无统计学意义(LSD-t=-0.804,P=0.432)。(4)软骨细胞中G蛋白偶联信号传导系统关键调控因子的蛋白表达。空白血清组、模型组和独活寄生汤含药血清组的Gαs、Gαq、Gαo和Gαi蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义[(0.81±0.09)k Da,(0.31±0.07)k Da,(0.78±0.13)k Da,F=23.669,P=0.001;(0.22±0.04)k Da,(0.14±0.02)k Da,(0.20±0.02)k Da,F=6.500,P=0.031;(0.25±0.02)k Da,(0.12±0.01)k Da,(0.18±0.03)k Da,F=27.214,P=0.001;(0.21±0.02)k Da,(0.26±0.02)k Da,(0.19±0.03)k Da,F=6.882,P=0.028];空白血清组Gαs、Gαq、Gαo蛋白表达量高于模型组(LSD-t=6.134,P=0.001;LSD-t=7.370,P=0.000;LSD-t=3.465,P=0.013),Gαi蛋白表达量低于模型组(LSD-t=2.572,P=0.042);模型组Gαs、Gαq、Gαo蛋白表达量低于独活寄生汤含药血清组(LSD-t=5.766,P=0.001;LSD-t=3.401,P=0.014;LSD-t=2.599,P=0.041),Gαi蛋白表达量高于独活寄生汤含药血清组(LSD-t=3.609,P=0.011)。结论:独活寄生汤含药血清可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,其作用机制可能与G蛋白偶联信号传导系统的调控有关,但其具体作用靶点有待进一步深入研究。

牛膝有效成分防治骨关节炎的作用机制探讨

综述牛膝有效成分的药理活性及其与骨关节炎的关系,探讨牛膝有效成分治疗骨关节炎的可能作用机制,为牛膝治疗骨关节炎的研究及新药开发提供新的思路与方向。

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制。方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只。低剂量组按5 mL.kg-1体质量以5 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL.kg-1体质量以10 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL.kg-1体质量以20 mg.mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL.kg-1体质量以生理盐水灌胃。每天灌胃2次,连续7 d,最后1 d连续2次灌胃,中间间隔2 h。末次灌胃后3 h提取各组实验兔含药血清低温保存备用。将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能。将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT-PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态。结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒。干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P=0.034,P=0.011)。各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P=0.012,P=0.004);中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞。结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据。

川牛膝、怀牛膝治疗骨关节炎的药效物质基础探讨

川牛膝、怀牛膝治疗骨关节炎功效有明显差异,但作用机制尚不清楚。通过分析川牛膝、怀牛膝的有效成分及其治疗骨关节炎的可能作用途径,探讨川牛膝、怀牛膝治疗骨关节炎疗效差异的有效物质基础,为部分阐述川牛膝、怀牛膝治疗骨关节炎的科学内涵提供理论依据。

牛膝引药下行靶向调节骨关节炎软骨退变的机制探讨

在分析、综合、归纳相关文献的基础上,以牛膝引药下行为切入点,采用文献检索方法建立牛膝的化学成分分子集,以骨关节炎为研究对象,针对骨关节炎的病理特点,探讨牛膝对骨关节炎软骨细胞、软骨基质及软骨下骨的影响,提出牛膝引药下行靶向调节骨关节炎软骨退变的可能作用模式,旨在为部分阐明牛膝引药下行的科学内涵提供理论基础。

内质网应激调控骨关节炎软骨细胞凋亡的机制

探讨内质网应激调控软骨细胞凋亡的机制,旨在为骨关节炎的防治提供可行性的研究导向。内质网是细胞内重要的细胞器,各种刺激因素易引起内质网应激,导致内质网相关性死亡。软骨细胞凋亡在骨关节炎软骨退变进程中发挥重要的调控作用,而处于特殊缺氧环境的软骨细胞对各种刺激因素敏感,微环境的改变使软骨细胞发生内质网应激,导致内质网相关性死亡。

独活寄生汤拆方水提物对软骨细胞活性的影响

目的观察独活寄生汤拆方水提物对软骨细胞活性的影响。方法将独活寄生汤分为祛风湿止痹痛、益肝肾、补气血3个拆方的水提物,浓度为0、100、200、400、800μg/mL作用于体外培养软骨细胞48 h,用MTT法检测其对软骨细胞活性的影响。结果祛风湿止痹痛方、益肝肾方水提物200μg/mL干预后,软骨细胞活性高于对照组(P<0.05);补气血方水提物400μg/mL干预后,软骨细胞活性高于对照组(P<0.05)。结论独活寄生汤拆方的水提物有不同程度的促进软骨细胞增殖作用,以祛风湿止痹痛方的作用最明显。

micro RNA调节颞下颌骨关节炎软骨退变的机制

颞下颌骨关节炎的确切发病机制尚不明确,软骨退变为其基本病理改变,微小RNA(microRNA)在软骨退变中起重要的调控作用。基于颞下颌骨关节炎的基本病理,文章从软骨退变密切相关的软骨细胞凋亡、软骨细胞自噬和软骨细胞代谢探讨micro RNA调节颞下颌骨关节炎软骨退变的可能作用机制,旨在为颞下颌骨关节炎的研究和防治提供新的思路。

跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响研究

目的:研究跳骨片不同极性部位对软骨细胞活性的影响。方法:用跳骨片的水提物、醇提物、多糖以及醇提物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物及残留的水相共8个组分干预体外培养的软骨细胞,采用MTT法检测不同极性部位作用48h后软骨细胞的活性。结果:在一定剂量范围内,跳骨片的水提物、多糖,醇提物的乙酸乙酯萃取部位和水相干预组软骨细胞的活性增强,醇提物以及醇提物的石油醚、氯仿和正丁醇萃取部位干预组软骨细胞的活性降低。结论:跳骨片的水提物、多糖和醇提物的乙酸乙酯萃取及残留的水相部位能够促进软骨细胞的增殖,为跳骨片的有效部位。

独活寄生汤联合揉膝推髌点穴法治疗膝骨关节炎临床观察

目的：观察独活寄生汤联合揉膝推髌点穴法治疗膝骨关节炎的临床疗效。方法：选择X线分期为Ⅰ~Ⅲ期的膝骨关节炎患者104例（122膝）,随机分为治疗组51例（60膝）和对照组53例（62膝）。治疗组口服独活寄生汤,同时予揉膝推髌点穴法治疗,对照组口服氨基葡萄糖、通痹片治疗。2组均治疗2周。比较治疗前后膝关节运动功能评分及膝关节西安大略和麦克马斯特大学（WOMAC）骨关节炎指数的变化,观察各期患者的临床疗效。结果：2组共完成治疗95例（109膝）,其中治疗组47例（55膝）,对照组48例（54膝）。治疗后,治疗组Ⅰ、Ⅱ期及对照组Ⅰ~Ⅲ期膝关节运动功能评分均增加（P〈0.01或P〈0.05）,且治疗组Ⅰ、Ⅱ期增加程度明显高于对照组同分期（P〈0.01）;2组Ⅰ~Ⅲ期WOMAC骨关节炎指数均降低（P〈0.01或P〈0.05）,且治疗组Ⅰ~Ⅲ期降低程度高于对照组同分期（P〈0.01或P〈0.05）;治疗组Ⅰ、Ⅱ期优良率高于对照组同分期（P〈0.01或P〈0.05）;治疗组Ⅰ期总有效率高于对照组同分期（P〈0.05）。结论：独活寄生汤联合揉膝推髌点穴法能有效改善膝骨关节炎患者的关节运动功能,缓解关节疼痛,提高生活质量,尤其对Ⅰ、Ⅱ期患者较佳。

HPLC测定独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量

目的建立独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的HPLC分析方法。方法色谱柱:Ultimate^(TM) XB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A(水)∶B(甲醇)=0~10 min,60∶40;10~12 min,20∶80;12~22 min,20∶8;流速:1.0 m L/min;进样体积:10μL;紫外检测器波长:230 nm;柱温:30℃。结果 HPLC检测独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素的含量分别为0.100 7%、0.003 1%、0.015 6%。结论 HPLC分析方法可用于独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量测定,为独活寄生汤水提物质量控制提供参考。

阿利沙坦酯联合钙通道阻滞剂治疗单药效果欠佳高血压的临床观察

目的观察分析阿利沙坦酯联合钙通道阻滞剂治疗单药效果欠佳高血压的临床价值。方法纳入我院2020年1月至2021年2月收治的阿利沙坦酯单药效果欠佳的原发性高血压患者68例,均为轻中度高血压病例。本组患者入组后均接受2周的安慰剂清洗干预,后均给予连续4周的阿利沙坦酯给药(治疗后血压水平收缩压≥140mmHg,舒张压水平≥90mmHg),在此基础上通过随机数字表法分为研究组、对照组,各34例,对照组继续接受阿利沙坦酯单药治疗,研究组则在阿利沙坦酯给药基础上联合给予钙通道阻滞剂(苯磺酸氨氯地平)治疗,继续用药12周,评价两组患者血压水平、血清因子水平改善情况及血压达标率。结果治疗前、治疗4周后两组患者收缩压、舒张压、ET及HGF水平比较差异无统计学差异意义(P>0.05),治疗12周后研究组患者收缩压、舒张压、ET及HGF水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),研究组血压达标率高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论对阿利沙坦酯单药效果欠佳的高血压患者联合开展钙通道阻滞剂干预,有助于降低血压水平,改善血清因子水平,提升血压达标率。

南少林理筋整脊手法治疗腰椎间盘突出症89例临床观察

目的:观察南少林理筋整脊手法治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法:将173例腰椎间盘突出症患者随机分为治疗组89例和对照组84例。治疗组采用南少林理筋整脊手法治疗,对照组采用传统手法治疗,2组均隔日1次,共治疗2周。观察2组临床疗效,采用Mc Gill疼痛问卷简表的疼痛评级指数(PRI)、视觉模拟评分法(VAS)评分及腰椎日本骨科协会评估治疗分数(JOA评分)评价腰背疼痛及功能恢复情况。结果:2组共完成治疗162例,其中治疗组82例,对照组80例。治疗组治愈27例,好转48例,未愈7例,总有效率为91.46%;对照组治愈18例,好转50例,未愈12例,总有效率为85.00%。2组比较,差异有统计学意义(P <0.01)。治疗后,2组PRI、VAS评分、JOA评分较治疗前均有改善(P <0.01或P <0.05),且治疗组优于对照组(P <0.01)。结论:南少林理筋整脊手法能有效改善腰椎间盘突出症患者的腰背疼痛、腰椎活动功能,提高生活质量。

独活寄生汤水提物对软骨细胞G_1期调控因子mRNA表达的影响

目的：探讨独活寄生汤水提物对软骨细胞G1期的影响。方法：取4周龄雄性sD大鼠，建立软骨细胞体外培养体系，第3代软骨细胞进行干预，采用MTY法检测不同浓度的独活寄生汤水提物对软骨细胞活性的影响；lit-PCR检测空白组、独活寄生汤水提物低、中、高剂量组（100，200，400mg·L-1）软骨细胞CyclinD1，CDK4，CDK6及P21mRNA的表达。结果：MTF法检测显示，在一定的药物质量浓度范围内（50～800mg·L-1），软骨细胞活性显著上升（P〈0．01）；干预24h后，CyclinD1，CDK4及CDK6mRNA表达量各剂量组明显增加（P〈0．05），200mg·L-1表达量最大（P〈0．01）；P21mRNA表达量降低，且200mg·L-1抑制作用最明显（P〈0．01）。结论：独活寄生汤水提物通过影响软骨细胞G1期调控因子mRNA的表达，促进软骨细胞的增殖。