UHPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢物的浓度

目的建立利用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中环磷酰胺及其代谢产物(羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺)浓度的方法。方法以Agilent poroshell SB-C_(18)柱(75mm×2.1mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-10mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25mL/min,柱温25℃,进样量5μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),选择多重反应离子监测(MRM)正离子模式。取8只成年雄性SD大鼠分离获得血浆样品,测定血浆样品中环磷酰胺及其代谢产物的血药浓度和药代动力学参数。结果方法学验证表明,环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺在浓度为20~4 000ng/mL范围内线性关系良好(r分别为0.998 0、0.995 3和0.998 6),脱氯乙基环磷酰胺在浓度为5~1 000ng/mL范围内线性关系良好(r=0.996 8)。日内、日间相对标准差(RSD)对于质控(QC)样品和最低定量限(LLOQ)样品分别小于8.73%和15.38%,基质因子的RSD均在-15%~15%之间,提取回收率均在(66.44±5.53)%^(96.66±1.73)%之间;所有待测化合物的稳定性均表现良好。大鼠血浆中各化合物药代动力学参数如下:环磷酰胺、羧基磷酰胺、4-酮基环磷酰胺和脱氯乙基环磷酰胺的Cmax分别为(207.52±13.20)、(18.47±2.66)、(6.59±1.33)和(8.27±1.44)μg/mL,T_(1/2)分别为(1.28±0.09)、(5.03±0.48)、(6.72±0.47)和(7.47±0.68)h,AUC_(0→t)分别为(372.52±32.79)、(65.70±5.04)、(33.26±11.76)和(45.03±8.93)μg·h·mL^(-1)。结论该方法操作简单、灵敏、准确、专属性强,适用于高剂量环磷酸铵在大鼠血浆中药代动力学研究。

五酯胶囊/五味子酯甲和环磷酰胺联合给药对大鼠体内环磷酰胺药动学的影响研究

目的:研究五酯胶囊(WZC)/五味子酯甲(Sch A)和环磷酰胺联合给药对大鼠体内环磷酰胺(CTX)药动学的影响。方法:36只大鼠随机分为CTX组(尾静脉注射CTX溶液300 mg/kg),CTX+WZC组(灌胃五酯胶囊300 mg/kg+尾静脉注射CTX溶液300mg/kg),CTX+Sch A低、中、高、极高剂量组(灌胃Sch A 30、300、3 000、30 000μg/kg+尾静脉注射CTX溶液300 mg/kg),每组6只。分别于给药前及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h自眼眶静脉丛取血0.3 m L,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中CTX及其代谢产物[脱氯乙基环磷酰胺(DC-CTX)、4-酮基环磷酰胺(4-keto CTX)、羧基磷酰胺(CPM)]的质量浓度,绘制药-时曲线,并用DAS 2.0软件拟合药动学参数。结果:CTX组,CTX+WZC组,CTX+Sch A低、中、高、极高剂量组大鼠血浆中DC-CTX的c_(max)分别为(22 167.85±2 844.93)、(10 920.53±1 490.89)、(18 951.29±1 558.81)、(18 622.08±791.19)、(18 515.20±2 560.61)、(15 133.21±1 305.07)μg/m L,AUC_(0-48 h)分别为(173 864.01±65 342.21)、(100 996.98±33 530.02)、(137 028.16±45 975.19)、(131 650.18±53 196.41)、(113 699.40±34 131.36)、(110 773.27±30 307.15)μg·m L/h;与CTX组比较,CTX+WZC组,CTX+Sch A低、中、高、极高剂量组大鼠血浆中DC-CTX的c_(max)分别降低50.74%、14.51%、16.10%、16.48%、31.73%,AUC_(0-48 h)分别降低约42.23%、21.45%、24.63%、33.37%、36.55%,差异均有统计学意义(P<0.05),t_(1/2)、t_(max)等其余药动学指标无明显变化。结论:WZC与Sch A均可在一定程度上降低DC-CTX的生成,表明二者可以抑制CTX毒性代谢途径进而减少毒性代谢产物氯乙醛的生成;但Sch A对毒性代谢途径的抑制作用弱于WZC,且不存在剂量依赖性。

五味子对CYP450活性的影响及其机制探讨

五味子为木兰科五味子属植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实,在临床上主要用于与其他药物的联合治疗,研究其药物-药物相互作用对于今后的临床应用意义重大。本文对相关文献进行归纳,分析了五味子生药及其中主要活性成分木脂素对CYP450酶活性的作用,并对其作用途径进行了初步推测。结果表明,五味子中主要木脂素类成分甲素、乙素、醇乙于3个水平影响CYP450的活性分别为诱导CYP450基因表达、诱导CYP450 m RNA翻译及直接作用于酶蛋白并抑制蛋白活性。这3个水平的作用于宏观表现为五味子对CYP450活性的双重作用。6、9位亲脂取代基或者大基团取代基是抑制CYP450活性的结构基础。

蒲葵子化学成分及药理活性的研究进展

目的综述蒲葵子化学成分及药理活性的研究进展,为进一步研究蒲葵子的抗癌机制提供依据,并为其临床应用提供参考。方法对近20年的相关文献进行系统调研,整理归纳与蒲葵子药理活性相关的文献。结果总结了蒲葵子的化学成分、药理活性、作用机制及毒性。结论蒲葵子中含有鞣质、酚类、黄酮、生物碱、甾体、糖及脂肪酸等多种化学成分。蒲葵子的药理活性主要体现为抗肿瘤活性,作为一味潜在的抗癌药,蒲葵子具有广阔的开发前景。

基于中医理论探讨风寒和风热感冒的发病机制及其动物模型的研究进展

普通感冒是最常见的急性呼吸道感染性疾病,中医理论认为,感冒是由于素体卫气不足,而后六淫病邪或时行之邪侵袭人体所致,可进一步据其病机不同分为若干类型,风寒、风热感冒为其中的2大类。中药复方对于风寒及风热感冒具有良好的疗效及悠久的应用历史,但其药效、药理机制研究仍存在一定局限,主要原因在于目前并无较为成熟的、基于中医理论的感冒动物模型。通过文献调研及整理,对风寒感冒及风热感冒病机进行探讨及总结,并结合近代药理文献对感冒体征相关动物模型的制备方法进行归纳,为建立成熟、基于中医理论的风寒和风热感冒动物模型及其评价标准提供依据。

南北五味子及其制剂与其他药物相互作用的研究进展

五味子为木兰科植物五味子(北五味子)及华中五味子(南五味子)的干燥成熟果实,其制剂已被广泛应用于临床。本文综合了近些年国内外相关文献,对南北五味子作用机制进行归纳总结,对南北五味子与其他药物的相互作用以及其相关制剂的联合用药进行了概述,从而为临床安全用药提供参考。

UHPLC-MS/MS测定大鼠尿液中环磷酰胺及其代谢产物浓度

目的基于UHPLC-MS/MS建立测定给予高剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)后大鼠尿液中CTX及其代谢产物脱氯乙基环磷酰胺(dechloroethylcyclophosphamide,DCCTX)、4-酮基环磷酰胺(4-Ketocyclophosphamide,4-Keto CTX)、羧基磷酰胺(carboxyphosphamide,CEPM)浓度的方法。方法大鼠尿液样品经10%甲醇水溶液直接稀释,离心后取上清液,采用UHPLC-MS/MS进行检测分析。色谱柱:Agilent poroshell SB-C18(2.1 mm×75 mm,2.7μm);流动相:甲醇-10 mmol·L-1乙酸铵水溶液,进行梯度洗脱,流速0.25 m L·min^(-1),柱温25℃。采用电喷雾离子源,以多重反应监测模式进行正离子检测。用于定量检测分析的离子对分别为:CTX:m/z 261.10→140.10;DCCTX:m/z 199.20→78.00;4-Keto CTX:m/z 275.10→142.00;CEPM:m/z 293.10→221.10;替硝唑(tinidazole,TNZ):m/z 248.10→121.10。结果 CTX及其代谢产物尿中浓度在40~2 000 ng·m L-1内线性关系良好(CTX、DCCTX、4-Keto CTX、CEPM的r2分别为:0.991 5,0.991 0,0.995 6,0.991 8),最低定量限均为40 ng·m L-1;日内、日间RSD分别为0.67%~12.76%,1.30%~11.92%;由内标归一化的基质因子计算RSD,结果为0.52%~7.60%;该方法的提取回收率为74.00%~102.70%(n=6),方法回收率为85.89%~110.69%(n=5);测定成分和内标的稳定性均良好。结论该方法快捷、准确可靠、重复性好,适用于大鼠高剂量CTX后CTX及其代谢产物尿药浓度的测定及排泄研究。

南北五味子提取物对大鼠体内环磷酰胺代谢的影响

目的:探讨南北五味子提取物分别对环磷酰胺(CTX)及其代谢产物羧基磷酰胺(CPM)、4-酮基环磷酰胺(4-Keto CTX)、脱氯乙基环磷酰胺(DC-CTX)血浆药动学及尿排泄的影响,从药物相互作用影响环磷酰胺代谢的角度阐明南北五味子的减毒作用机制。方法:采用UHPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆或尿液中CTX及其代谢产物的浓度。将SD大鼠随机分组分别给药分别取样,采集不同时间点血浆样品,绘制药-时曲线,并用DAS2.0软件一室模型拟合药动学参数,使用单因素方差分析法比较组间药动学参数的差异性;采集不同时间段尿液样本,计算待测成分的累积排泄量。结果:CTX单独给药组、合并南五味子提取物(制剂五酯胶囊,WZC,300 mg·kg^(-1))给药组,以及合并北五味子醇提物(BWWZ,750 mg·kg^(-1))给药组,不同待测物的AUC(μg·h^(-1)·mL^(-1))分别为:CTX:411.818±82.10,483.492±174.49,683.92±91.70;DC-CTX:683.97±91.70,35.95±70.51,8.44±3.96;4-Keto CTX:87.27±38.81,25.78±10.03,17.18±37.2;CPM:99.74±16.18,110.21±57.99,104.90±16.23。Cmax(μg·mL^(-1))分别为:CTX:233.41±32.10,255.021±45.90,249.27±17.52;DC-CTX:3.63±1.25,1.21±13.48,1.31±0.72;4-Keto CTX:5.24±1.04,5.34±2.41,2.84±0.81;CPM:25.88±5.26,27.53±8.11,22.42±4.75。48 h内的累积排泄量(μg)分别为:CTX:1 455.36,3 829.16,4 830.69;DC-CTX:2 136.21,921.18,468.87;4-Keto CTX:759.18,1 348.54,338.38;CPM:9 268.06,17 386.18,8 902.05。结论:WZC和BWWZ对CTX的代谢产物DC-CTX的药动学及尿液排泄均有显著影响,均可通过抑制CYP3A4活性使得侧链代谢毒性产物氯乙醛的生成明显降低;结合血浆、尿液中的实验结果可知在血浆中浓度较高的待测物在尿液中排泄也较多,使用WZC和BWWZ均可促进CTX原型和CPM的排泄。