骨髓间充质干细胞来源的外泌体对环磷酰胺导致的睾丸间质细胞损伤的保护作用

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体对环磷酰胺(CP)导致的小鼠睾丸间质细胞TM3损伤的改善作用。方法:利用超高速离心法提取BMSC来源的外泌体(exo),然后分析其粒径大小和观察其在电镜下的形态,蛋白免疫印迹法检测exo的典型标志蛋白。将外泌体与睾丸间质细胞TM3共培养做摄取实验,观察TM3细胞对exo的摄取情况。构建睾丸间质细胞CP损伤模型,主要分组为对照组、CP组及CP+exo组,利用CCK-8法检测各组细胞活力,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液的睾酮水平,最后利用蛋白免疫印迹法检测与睾酮合成相关的关键酶类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)的表达。结果:CP组与对照组相比活力明显降低,而加入exo共培养后,可以恢复TM3细胞的部分活力(P<0.05)。流式凋亡结果图中,CP组的凋亡率明显比对照组的升高,而CP+exo组则在一定程度上降低了凋亡率(P<0.01)。CP组细胞上清液中的睾酮水平较对照组下降,而加入exo后可提高睾丸间质细胞TM3分泌的睾酮水平(P<0.01)。StAR蛋白免疫印迹上,提示在CP组中StAR的表达量相比于对照组是降低的,而CP+exo组则是有一定程度的升高(P<0.01)。结论:BMSC-exo对CP导致的睾丸间质细胞TM3损伤具有保护作用,并且在一定程度上能恢复TM3细胞分泌的睾酮水平。

沉默SEMG1蛋白对精原细胞GC-1细胞周期及凋亡的影响

目的:探究沉默生精蛋白Ⅰ(SEMG1)对精原细胞系GC-1细胞周期及凋亡的影响。方法:利用脂质体转染法将SEMG1小干扰RNA(siRNA)转染精原细胞株GC-1,以空白组(空白对照组)和非特异性siRNA转染组(阴性对照组)作为对照;使用Western印迹法检测各组细胞SEMG1蛋白的表达水平,流式细胞术分析各组细胞的凋亡率及细胞周期。结果:与空白对照组和非特异性siRNA转染组相比,siRNA-SEMG1(si-SEMG1)转染组细胞的SEMG1蛋白表达水平(2.51±0.13,2.50±0.12 vs 1.80±0.05)明显降低(P<0.01);空白对照组、阴性对照组和siRNA-SEMG1转染组细胞的细胞周期无明显差异(P>0.05),但siRNA-SEMG1转染组细胞凋亡率达到(6.77±0.15)%,明显高于空白对照组(0.70±0.06)%和阴性对照组(0.8±0.06)%(P<0.01)。此外,Western印迹结果显示,siRNA-SEMG1转染组细胞的caspase-3蛋白表达水平显著上升(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:siRNA-SEMG1能有效沉默精原细胞GC-1中SEMG1蛋白的表达,并最终促进GC1-细胞凋亡。