新孢子虫病免疫学诊断和免疫预防的研究进展

新孢子虫病是一种对多种动物危害严重的原虫病，给畜牧业带来很大的经济损失，特别是奶牛饲养业。新孢子虫病越来越被人们所关注，特别是诊断和防制成为国内外兽医界研究的热点。该文对新孢子虫病免疫诊断方法的适用范围、优缺点及新孢子虫病免疫预防机制和疫苗研究情况进行了综述。

奶牛新孢子虫重组蛋白NcSRS2t间接ELISA方法的建立及初步应用

以纯化的犬新孢子虫(Neospora caninum)重组蛋白NcSRS2t为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件。采用已建立的间接ELISA反应条件,对218份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定了间接ELISA的判定标准,即OD450nm值大于等于0.32为阳性,小于0.32为阴性。应用建立的间接ELISA方法对128份阴性血清和50份阳性血清(经IDEXX公司新孢子虫抗体检测试剂盒证实)进行检测,结果表明,间接ELISA方法的特异性为93.0%,敏感性为90.0%。采用本试验建立的新孢子虫间接ELISA诊断方法对黑龙江省克山、海林、双城、甘南、克东、富裕、牡丹江、大庆等8个县(市)奶牛场的540份奶牛血清进行了检测。结果表明,被检的540份奶牛血清样本中奶牛新孢子虫的抗体阳性率为13.33%。该间接ELISA诊断方法的建立及初步应用为新孢子虫病诊断试剂盒的研制和新孢子虫病的预防研究奠定了基础。

牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用

【目的】以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法。【方法】将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白。利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法。【结果】成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应。与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%。采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江、佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病。这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。

PCR诊断牛新孢子虫病的初步应用

目的以犬新孢子虫Nc-5基因为目的基因的PCR诊断方法,检测奶牛流产的胎牛脑组织的新孢子虫。方法根据GenBank发布的新孢子虫特异性基因片段Nc-5基因序列,设计1对特异性引物,以犬新孢子虫(Neospora caninum)标准株DNA为模板,PCR扩增Nc-5基因,与pMD18-T载体连接,转化大肠埃希菌JM109,获得阳性重组质粒pMD18-T-Nc-5,并测序。以环形泰勒虫、牛巴贝斯虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫以及犬新孢子虫标准株DNA为模板进行扩增以验证PCR的特异性,采用紫外分光光度计测定犬新孢子虫标准株DNA浓度和纯度,取高纯度的DNA样品用灭菌水稀释,分别取不同量的DNA进行PCR扩增,确定PCR方法的敏感性;利用该方法对32份奶牛流产的胎牛脑组织样品进行检测,同时,对其中23份流产的母牛血样进行ELISA血清学检测(作为对照),以评价犬新孢子虫PCR方法的检测效果。结果克隆的犬新孢子虫标准株目的基因大小为350bp,与GenBank(AY459289)中Nc-5基因序列一致性为98%,建立的犬新孢子虫PCR方法与环形泰勒虫、牛巴贝斯虫、刚地弓形虫和杜氏利什曼原虫均无交叉反应,最低能检测犬新孢子虫DNA3.125pg,检测流产胎牛脑组织阳性率为18.8%(6/32)。ELISA检验流产母牛血样抗体阳性率为17.4%(4/23),这4份阳性样品与其流产胎牛PCR检测结果均为阳性。结论建立的犬新孢子虫PCR诊断方法用于检测奶牛流产的胎牛脑组织新孢子虫的感染效果较好。

灰雁甲状腺的组织学研究

为研究灰雁与鹅的甲状腺结构的异同,采用不同方法,观察灰雁的甲状腺组织结构,在H-E染色的组织切片中,甲状腺实质由滤泡组成,滤泡由单层上皮细胞组成;在PAS反应中,甲状腺滤泡腔内的胶质深红染,显示胶质为糖类物质;在银染切片中,C细胞胞质内含有黑色的特异性嗜银颗粒,与太湖鹅、四季鹅不同。

4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析

收集黑龙江省大庆地区牛源、绵羊源、绒山羊源和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫，以SDS-蛋白酶K法抽提其基因组DNA，用特异性引物通过PCR扩增土耳其斯坦东毕吸虫成虫细胞色素C氧化酶亚基1基因（coxl）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1基因（nad1）并进行测序，应用Chromas和DNAStar软件分析扩增产物的变异情况。结果表明，大庆地区4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因均为1125bp，nad1基因均为518bp；且其线粒体基因存在差异，coxl的同源性为99．0％～99．7％，nad1的同源性为98．3％～99．4％。

牛羊源土耳其斯坦东毕吸虫ITS和28S rDNA-LSU序列分析

目的探讨牛羊源土耳其斯坦东毕吸虫(Orientobilharzia turkestanicum)核糖体内转录间隔区(ITS)和28S核糖体大亚基序列(rDNA-LSU)的差异。方法粪便检查、剖杀自然感染东毕吸虫的绒山羊、山羊、绵羊和黄牛,收集虫体,形态学鉴定为土耳其斯坦东毕吸虫。抽提成虫基因组DNA,扩增其ITS(包括ITS-1、5.8S rDNA和ITS-2)和28S rDNA-LSU序列,测序并分析以上序列,以及28S rDNA-LSU序列RNA二级结构。结果牛、羊源土耳其斯坦东毕吸虫的ITS-1、5.8S rDNA、ITS-2和28S rDNA-LSU序列分别长384、159、331和1304bp。牛源和羊源的ITS-1和5.8S rDNA序列完全相同;黄牛源、绵羊源和绒山羊源的ITS-2序列完全相同,与山羊源存在1个碱基的差异;绵羊源和绒山羊源的28S rDNA-LSU序列完全相同,与牛源和山羊源分别有2个碱基的差异。绵羊源和绒山羊源的28S rDNA-LSU序列RNA二级结构相同,与山羊源存在微小差异,但牛源与羊源存在较大差异。结论不同终末宿主源土耳其斯坦东毕吸虫的核糖体序列存在不同程度的差异,羊源28S rDNA-LSU序列的RNA二级结构相同或相似,但与牛源存在较大差异。

CAI课件在家畜寄生虫学教学中的应用探索

CAI教学是现代化教育技术的重要组成部分,它将文本、声音、图片、动画、录像等有机结合在一起,很大程度上改变了传统的教学模式,提高了教学质量。作者利用多年积累的资料,自行制作了家畜寄生虫学CAI课件,并应用于动物医学专业2003级教学中,取得了令人比较满意的效果。

产酶益生素对罗曼褐蛋鸡生产性能和种蛋孵化率的影响

试验选用25周龄罗曼褐父母代蛋鸡900只,随机分为5个组,每组各4个重复,每个重复45只。在基础日粮中分别添加土霉素、复合酶制剂和产酶益生素,研究其对蛋鸡产蛋高峰期和产蛋后期生产性能、种蛋孵化率的影响。结果表明:在饲料中添加0.2%产酶益生素能显著提高蛋鸡的产蛋率(P<0.05),分别比空白对照组、土霉素组、复合酶制剂组和0.1%产酶益生素组提高了6.42%、1.99%、5.52%和3.34%,同时降低了饲料报酬,并且各组间种蛋孵化率无显著差异(P>0.05)。

微生态制剂在水产养殖中的应用

本文综述微生态制剂的概念、作用机理、在水产养殖中的应用及微生态制剂的合理使用与注意事项,概括了水产微生态制剂具有抑制病原菌、刺激免疫系统、提高免疫力、提供营养、改善机体代谢、促进动物生长、改善水质的作用和功效,为水产微生态制剂的进一步研究提供了理论依据。

猪常见寄生虫病的诊断方法

寄生虫病是养猪场的常见疾病之一，使大多数猪场蒙受巨大损失，是影响猪场效益的重要因素之一。但是由于寄生虫危害表现不明显，呈现一种慢性、消耗性的过程，对大多数猪场或猪群没有造成明显的大量死亡，所以对其引起的损失往往被忽视。本期将对影响猪群健康的常见寄生虫病及其防治进行详细的介绍，望能对大家有所帮助。

绒山羊东毕吸虫病的诊断与治疗

东毕吸虫病是由裂体科、东毕属的各种吸虫寄生于牛、羊等反刍动物门静脉和肠系膜静脉内而引起的一种血吸虫病。该病在黑龙江省多呈地方性流行，给当地畜牧业生产造成很大经济损失。2006年9月，黑龙江省大庆市某个体养殖户饲养的绒山羊出现了以精神沉郁、贫血消瘦、腹部增大、排褐色或带有血液稀便、死前流产为主要症状的疾病，通过临床症状观察、病理剖检和实验室检查，确诊为东毕吸虫病，通过采用特效药物进行治疗，使病情得到了控制。

鹅体内二种寄生蠕虫的形态鉴定

目的对在大庆鹅体内检出的一种吸虫和一种绦虫进行形态学鉴定。方法采用盐酸卡红,苏木素对虫体染色制成装片,或对新鲜虫体直接观察,显微照相,进行形态学鉴定。结果吸虫为纤细背孔吸虫,绦虫为矛形剑带绦虫。结论检出的两个虫种均为大庆市鹅寄生虫新记录,纤细背孔吸虫为黑龙江省鹅体寄生虫首次报道。

复合型功能芽孢杆菌制剂对鲤鱼生长性能、免疫及抗感染能力的影响

试验旨在研究饲料中添加复合芽孢杆菌制剂对鲤鱼生长性能、免疫指标及抗感染能力的影响。试验选用540尾鲤鱼,随机分为6组,每组设3个重复,每个重复30尾鱼。试验组饲喂基础日粮,各试验组分别饲喂添加500、1000、2000、3000 mg/kg复合功能型芽孢杆菌制剂的基础饲料。预饲期14 d,正式试验期56 d。结果显示:与对照组相比,2000 mg/kg添加组、3000 mg/kg添加组鲤鱼增重率、特定生长率、肥满度均显著提高(P<0.05),鲤鱼血清中溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(ALP)活性及免疫球蛋白M(IgM)、补体C3、总蛋白(TP)含量显著提高(P<0.05);1000 mg/kg添加组鲤鱼特定生长率、肥满度显著提高(P<0.05),血清LZM、ALP活性及IgM含量显著提高(P<0.05);各添加组死亡率显著降低(P<0.05),成活率显著提高(P<0.05)。3000 mg/kg添加组鲤鱼的增重率、特定生长率、肥满度显著高于500 mg/kg添加组、1000 mg/kg添加组(P<0.05)。2000 mg/kg添加组、3000 mg/kg添加组血清C3含量显著高于500 mg/kg添加组、1000 mg/kg添加组(P<0.05)。2000 mg/kg添加组、3000 mg/kg添加组死亡率显著低于500 mg/kg添加组、1000 mg/kg添加组(P<0.05),成活率显著高于500 mg/kg添加组、1000 mg/kg添加组(P<0.05)。研究表明,复合芽孢杆菌制剂添加量为2000、3000 mg/kg时,两组各指标差异不显著,因此建议实际生产应用中复合芽孢杆菌制剂的最佳添加剂量为2000 mg/kg。