树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计

Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.

Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响

木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。为了改变树干毕赤氏酵母木糖还原酶的辅酶依赖性,对它的第21位赖基酸Lys进行了突变。利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因K21A-XYL1、K21R-XYL1及野生基因WT-XYL1在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后测定酶学性质。结果表明:K21R突变子的辅酶依赖性没有改变,但K21A突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH。

探讨如何实现城市照明节能科学化

近年来,城市照明设施随着各地经济和交通的迅速发展,其规模及数量越来越大,相伴而生的城市照明的用电量不断上升。本文从濮阳市城市照明节能方面现状、存在问题,分别从城市照明管理部门、智能系统、灯具、光源电器等方面,就如何以科学、高效、合理的方式,实现城市道路照明工作的节能,浅谈个人的一点看法。

浅析城市照明工程的造价控制管理

本文根据城市照明工程造价存在的问题,探讨了在照明工程实施的各个阶段造价管理的方法和需要重点注意的问题,通过加强城市照明工程的建设过程各个阶段的造价控制监督管理,才能实现整个建设项目全过程的造价管理。

关于濮阳市路灯无线监控系统调研报告

文章介绍了濮阳市路灯控制系统的发展历程及目前无线监控系统的控制方式，通过对无线监控系统的分析，介绍了无线监控的先进性与便利性，重点阐述了路灯无线监控系统的实现过程。

探析城市环卫设施项目质量的管理

随着现阶段我国城镇化的不断加快，城市规模和人口增长迅速，城市原有的承载能力无法满足现代城市发展过程中的需求。城市环卫基础设施作为承担着维护城市市容市貌的重要作用，大量环卫设施需要新建、改造提升，这给城市环卫设计建设带来了新机遇与挑战。以确保质量来经营的观念进行项目质量策划，确保质量第一，严把质量一关，建立健全质量保证制度细则：严格把握招标与投标程序，进行质量目标监督管理，使相互的责任分明，把工程质量与经济挂钩，保证现场质量：积极利用科学和技术进行改革，构建恰当的合作管理制度，使项目质量得到保障；运用集成质量系统体系，完成相关联的单位质量的信息共享，最终，使公民对项目感到满意。

关于有效提高道路照明节能的探讨

道路照明的根本目的在于为行车和行人提供良好的视觉条件,以提高交通的效率,保障交通安全。随着国家绿色照明工程的推进,节能型的道路照明成为趋势。结合道路照明的特点,提出高光效钠灯+变功率系统+高效率灯具及LED路灯两种节能道路照明解决方案。

濮阳市城市照明可持续发展研究

濮阳市城市照明最近几年发展很快，但同时也存在不少问题，本文试从目前濮阳市城市照明工作存在的主要问题，提出一些建议和措施来促进濮阳市城市照明的可持续发展。

濮阳市夜景照明发展与对策

濮阳市夜景照明最近几年发展很快，但同时也存在不少问题，本文试从目前濮阳市夜景照明工作存在的主要问题，针对问题提出一些建议和措施来促进濮阳夜景照明的有序发展。