缺氧微环境调控肿瘤转移研究进展

缺氧微环境是大多数肿瘤的重要特征。缺氧条件下,一方面缺氧诱导因子家族表达增高,促使肿瘤及其微环境分泌多种促血管生成因子,促进异常血管形成;另一方面巨噬细胞、嗜中性粒细胞向促瘤表型转化,抑制T细胞和自然杀伤细胞的杀伤作用,使肿瘤细胞具有免疫逃逸能力。此外,缺氧时环状RNA可通过调节血管内皮细胞及上皮间质转化,促进肿瘤转移或细胞衰老,但调控机制尚未明确。因此,增加自然杀伤细胞及T细胞的杀伤能力,沉默或上调某些特定环状RNA可能成为治疗肿瘤的辅助方式。本文就缺氧微环境调控肿瘤转移的研究进展作一综述。

表观遗传学诱导的长链非编码RNA1在肝细胞癌中的表达及功能

目的观察表观遗传学诱导的长链非编码RNA1(lncRNA EPIC1)在肝细胞肝癌(HCC)的表达及其对肝癌细胞株增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测EPIC1在7例HCC组织和其癌旁组织和五株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)和人正常肝细胞株(HL-7702)的表达量。使用携带有EPIC1目的基因的重组慢病毒颗粒[LV-小干扰RNA(siRNA)]转染Hep G2、HuH-7-80作为实验组,转染阴性对照慢病毒颗粒(LV-NC)的Hep G2、HuH-7-80作为对照组。转染后细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测Hep G2、HuH-7-80的增殖能力;Transwell侵袭实验检测HepG2、HuH-7-80的侵袭能力;流式细胞术检测Hep G2、HuH-7-80的凋亡率。结果EPIC1在HCC组织的表达量(8.77±0.36)显著高于其癌旁组织(2.39±0.45),差异有统计学意义(P<0.01)。EPIC1在5株肝癌细胞株(HepG2、SK-HEP-1、HuH-7-80、SMMC-7721、SNU-387)的表达量(7.24±0.81、3.11±0.35、5.17±1.12、4.38±0.48、2.69±0.65)均较人正常肝细胞株HL-7702的表达量(1.29±0.13)明显增高,其中,在HepG2、HuH-7-80中表达量最高,约为HL-7702的(5.61±0.12)、(4.01±0.16)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。低表达EPIC1组的HepG2在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.43±0.02、0.72±0.02、1.31±0.01,P<0.05;LV-siRNA2:0.42±0.02、0.76±0.04、1.03±0.02,P<0.05)比对照组的Hep G2(0.59±0.02、0.98±0.02、1.63±0.02)显著下降;低表达EPIC1组的HuH-7-80在24、48、72 h细胞增殖能力(LV-siRNA1:0.59±0.01、0.73±0.02、1.31±0.05,P<0.05;LV-siRNA2:0.43±0.04、0.74±0.04、1.26±0.04,P<0.05)比对照组的HuH-7-80(0.64±0.02、0.82±0.02、1.78±0.02)显著下降。低表达EPIC1组的HepG2、HuH-7-80穿过基底膜的细胞数量[(43.35±6.16)、(55.40±8.18)个]比对照组相对细胞数量[(80.67±5.14)、(74.73±6.13)个]明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达EPIC1组HepG2、HuH-7-80细胞凋亡率[(23.20±0.37)%、(18.60±0.46)%]较对照组细胞凋亡率[(2.60±0.96)%、(3.60±0.33)%]明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论lncRNA EPIC1在HCC组织和细胞中高表达,低表达EPIC1会降低肝癌细胞的增殖和侵袭能力,促进肝癌细胞凋亡。

G蛋白偶联受体30激动剂调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体的研究

目的观察G蛋白偶联受体30(GPR30)激动剂G-1抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的活化白细胞介素-1β(IL-1β)成熟的作用。方法提取C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,使用10、30、50 μmol/L G-1预处理巨噬细胞,经50 ng/ml脂多糖(LPS)诱导后,收集巨噬细胞,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)和IL-1β mRNA的表达量,Western blot法检测NLRP3、ASC、pro-Caspase-1蛋白的表达。使用1、5、15、30、50 μmol/L浓度梯度G-1预处理巨噬细胞,50 ng/ml LPS和5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)诱导细胞后,收集培养基上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果G-1预处理巨噬细胞,LPS诱导后NLRP3、ASC和IL-1β mRNA表达量与LPS组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NLRP3、ASC和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶前体(pro-Caspase-1)蛋白表达量与LPS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA结果显示,随着G-1浓度升高,与LPS+ATP组(2 714.73±107.05)比较,IL-1β含量(3 062.42±12.10、1 709.29±25.31、653.27±35.66、144.23±4.18、98.40±2.02)呈梯度性降低,G-1浓度≥5 μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNF-α含量(361.93±10.66、394.62±20.46、444.17±14.80、444.73±19.21、366.41±27.04)与LPS+ATP组(412.38±1.59)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论GPR30激动剂G-1可特异性抑制NLRP3炎性小体的活化和IL-1β的成熟。