变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的表达、纯化与鉴定

目的在大肠杆菌中高效表达变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A(ribose 5-phosphate isomerase A,rpiA),并对表达产物进行纯化和鉴定。方法根据GenBank中变异链球菌UA159株基因组rpiA的DNA编码序列,设计PCR引物,扩增变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A的DNA编码序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达;对培养温度、IPTG用量、诱导时间等条件进行了优化;用亲和层析、离子交换层析纯化目标蛋白;用SDS-PAGE和质谱对目标蛋白进行鉴定。结果变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白。经过纯化,得到纯度高达95%的变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了变异链球菌核糖-5-磷酸异构酶A蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究变异链球菌属核糖-5-磷酸异构酶蛋白的生物学活性及功能奠定了基础。

γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

目的对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化。方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。结果γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白。结论成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础。

我国部分中心血站从业人员离职率调查与分析

目的调查中心血站从业人员离职率现状,探讨影响中心血站员工队伍稳定的相关因素,为合理规划中心血站人力资源提供参考。方法收集我国22家中心血站2017年-2020年从业人员离职率数据,采用Excel 2007、SPSS 22.0软件进行统计分析。结果22家中心血站2017年-2020年员工离职率平均为(2.70±1.38)%,各岗位员工离职率从(3.28±3.12)%到(6.55±7.42)%不等,不同岗位平均离职率从高至低依次为成分制备>供血>血液采集>其他>血液检验。员工离职率按区域分布为南部地区>西部地区>北部地区>中部地区>东部地区,按供血服务人口分布为小城市>中等城市>大城市。员工因病缺席率平均为(1.58±1.19)%。结论我国中心血站发展不均衡,从业人员离职率受供血服务人口、从事工作岗位及个人健康状况等因素影响。中心血站应针对存在问题采取措施,如增加人员编制、合理安排岗位、优化激励机制等。

新冠肺炎疫情期间青岛地区临床用血分析及对策

目的了解本地区新型冠状病毒肺炎期间临床用血特点,为制定疫情下的用血管理政策提供数据支持。方法设计《临床用血分析报告模板》,发放至各医疗机构,汇总2020年第一季度主要相关用血指标并进行同期比较,形成分析报告,相关数据进行统计学分析。结果1)2020年第一季度,我市临床血液制品用量血小板类小幅下降,红细胞类、血浆类、冷沉淀类呈较大幅度下降。2)2020年一季度同期比,三级医疗机构出院总人次(χ2=38.12,P<0.01)、手术台次(χ2=240.5,P<0.01)、输血总人次(χ2=648.7,P<0.01)、手术患者输血人次(χ2=139.2,P<0.01)与二级医疗机构比较,差异均有显著统计学意义,二级医院下降幅度更大。3)主要用血科室红细胞类用量分析:三级医疗机构疫情期间的手术患者、血液科、内科、外科、门急诊、ICU患者及妇产科红细胞用量与去年同期比较,差异均有显著统计学意义(P<0.01);二级医疗机构内科及外科(P<0.05)同期比,差异有统计学意义。结论新冠疫情期间,地区用血量较非疫情期间呈较大幅度下降;疫情对规模较小的医疗机构的总体用血量影响要大于三级医院;三级医院手术患者红细胞用量、血液科红细胞用量、ICU红细胞用量均呈增长趋势;疫情期间管理部门应加强门急诊输血策略的指导和监督。

2018-2021年度山东省采供血机构血液检验不合格趋势分析

目的了解近4年山东地区献血者检验不合格的变化趋势,为血液安全策略的制定提供指导和支持。方法收集2018-2021年省内18家采供血机构血液检验不合格数据,对不同不合格原因进行趋势分析。结果全省年均检验不合格献血者15148人,年均检验不合格率1.35%,总体检验不合格率呈逐年下降趋势,χ^(2)=209.26,P<0.001。谷丙转氨酶(ALT)高、抗丙型肝炎病毒(HCV)阳性、抗梅毒螺旋体(TP)阳性的不合格献血者人数均呈显著下降趋势,χ^(2)值分别为135.13、37.31、218.78,均P<0.01,乙肝表面抗原(HBsAg)阳性导致的不合格献血者人数呈下降趋势,χ^(2)=4.25,P<0.05,人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性、核酸阳性导致的不合格人数呈上升趋势,χ^(2)值分别为36.72、32.13,均P<0.01,人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)阳性导致的不合格人数变化差异无统计学意义,χ^(2)=0.06,P>0.05。不同年龄段献血者检验不合格占当年不合格献血者的百分比年变化速度各不同,其中21~30岁呈逐年下降趋势,χ^(2)=4.36,P<0.05。男、女献血者的血液检验不合格率均呈逐年显著下降趋势,χ^(2)值分别为146.19、63.53,均P<0.01,但男性显著高于女性,χ^(2)=893.30,P<0.01。结论山东地区血液检测不合格率呈显著下降趋势,但不合格项目的变化趋势有所不同,今后的献血者宣教与招募需区别对待、有的放矢。