内蒙古自治区蜱种类及分布研究概况

总结内蒙古自治区各盟市区域蜱种类及分布情况,为蜱及蜱传疾病的防控提供科学依据。通过文献查阅及收集报道资料对内蒙古地区蜱种类及分布区域进行综述性概括。内蒙古地区9市3盟已知蜱类2科5亚科8属31种。蜱是哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类的体表寄生虫,也是多种人畜共患疾病病原体的传播媒介和贮存宿主。内蒙古地形地貌复杂多样且物种资源丰富,形成了多种蜱类生息之地。蜱类的分布与地理环境、植被分布紧密相关。本文通过检索文献资料,总结了中国内蒙古自治区蜱类在不同区域的分布特点情况,以期促进蜱传自然疫源性疾病研究的快速发展,提高蜱传人畜共患病的防范意识。

CRISPR/Cas12a系统:核酸检测的多功能工具

规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)是原核生物的适应性免疫系统,对抗外来遗传物质(如质粒和噬菌体)的攻击。近年来,科学家们发现了一种新型基因编辑工具,一种强大的分子剪刀CRISPR/Cas12a系统,该系统在对靶标DNA进行切割的同时还具有对体系内单链DNA进行任意切割的活性,并将其转移到体外检测系统。本文对CRISPR/Cas12a系统组成、结构、Cas12a与Cas9的对比和CRISPR/Cas12a系统在核酸检测中的应用进行了综述。

RNA传感器蛋白催化酶PKR研究新进展

PKR(Protein Kinase Double-Stranded RNA-Dependent)是丝氨酸-苏氨酸催化酶,细胞浆中重要的RNA传感器(RNA sensor),能自身磷酸化,也可使真核细胞初始化因子2亚单位(subunit of eukaryotic initiation factor 2,e IF-2α)磷酸化。PKR结合病毒dsRNA通过激活PKR/e IF-2α信号通路,抑制病毒基因的翻译,降低病毒蛋白合成,有效减少病毒复制。PKR还可通过激活IκB(inhibitor of NF-κB)/转导核因子(NF-κB,nuclear factorκB)信号通路抑制病毒的转录。PKR与肿瘤的发生具有相关性,能作为治疗癌症的靶点。本文主要综述PKR的分子生物学性质、PKR分子的活化、PKR对IFN转录和转录后的调节、PKR的信号转导、PKR对非病毒病原体感染的调节、PKR对肿瘤细胞的调节等方面的最新进展。

焦磷酸显色法检测PCR产物及酶活性（英文）

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学领域的一项具有划时代意义的技术,但定量PCR产物或测定能生成焦磷酸的酶活性仍需要新技术的发展。本文提供了一种PCR产物定性及定量检测方法(Color PCR kit)及其用途;该方法通过焦磷酸(pyrophosphate,PPi)显色测定PCR的副产物PPi。利用试剂盒中的试剂与PPi反应,最终生成物为甲暨(formazan),呈红色。根据显色现象(红色)判断PCR的阳性结果,由目测实现PCR的定性检测;或通过测定490 nm处的吸光度值定量检测PCR过程中生成的副产物PPi的含量,定量检测PCR产物的生成量;目测情况下Color PCR kit可检测到2.5 ng水平的PCR产物,用紫外分光光度计可检测到低限为1 pg;Color PCR kit法比琼脂糖凝胶电泳检测法(低限为4 ng)灵敏。Color PCR kit还可用于连接酶和转移酶活性的测定。

RLRs家族中RIG-I和MDA-5的研究进展

非特异性固有免疫是预防病毒感染的第一道防线,Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)和维甲酸诱导基因I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)是感知病毒RNA的两个主要受体家族。RLRs为存在于胞浆中的RNA解旋酶家族,可识别在病毒感染或复制期间进入到胞浆内的单链或双链RNA。目前研究RLRs家族比较多的成员有维甲酸诱导型基因I(retinoic acid-inducible gene I,RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene-5,MDA-5)及遗传学和生理学实验室蛋白2(laboratory of genetics and physiology 2,LGP2)。本文分别就RLRs家族中RIG-I和MDA-5结构、生物学作用及其信号传导中关键分子的研究进展作一概述。

布鲁氏菌病核酸检测技术研究新进展

人类布鲁氏菌病的临床表现不一,具有多样性和非特异性,因此,实验室检测对患者的早期诊断、治疗有着非常重要的意义。血清学检测方法虽简单、方便、快捷,但缺乏特异性;而分离培养耗时耗力、阳性率低、危险性高。与其他细菌感染一样,其可靠的检测方法是核酸扩增检测技术。现就布鲁氏菌属的基因组学、靶基因的选择、常用引物序列、血液样本在核酸扩增试验中的应用、核酸提取方法、核酸扩增试验等方面对布鲁氏菌病的核酸检测技术进行综述,以便读者对布鲁氏菌病的核酸检测新技术、新进展进行了解、掌握和应用。

高产蛹虫草菌株发酵培养基的研究

在单因素试验初步确定高产蛹虫草菌株发酵培养基的基础上,以蛹虫草菌丝体中腺苷含量为指标,进行11因素2水平Plackett-Burman试验设计试验,结合多元一次回归模型和F检验方法,筛选出发酵培养基中影响显著的组分酵母浸粉、蔗糖和维生素B_1,采用旋转中心组合设计方法对这三个组分进行进一步优化,结合多元二次回归模型和响应面分析,获得高产蛹虫草菌株的最佳培养基(g/L):蔗糖18.85、蛋白胨10、酵母浸粉18.97、KH_2PO_4 3、MgSO_4 3、维生素B_1 0.235、ZnCl_2 0.011、(NH_4)_2SO_4 10。验证试验结果表明蛹虫草腺苷得率较单因素优化获得的发酵培养基提高了26.91%。

提高药理学课堂教学效果初探

药理学课堂教学效果直接关系到医学生临床课程的学习和临床实践的水平,提高课堂教学效果的关键在于合理安排教学时间、科学规划教学内容、恰当选择教学方式和巧妙运用教学手段.

双控表达载体系统的构建及其在基因表达方面的应用（英文）

可严格调控性是体现原核表达载体优越性的重要指标。构建了一种双控双调节原核表达载体系统,用双载体控制调节目的基因的表达,即SP6启动子(promoter)+乳糖(lac)调节基因表达系统和araB启动子(promoter)+ara C调节基因表达系统,分别由乳糖类似物IPTG和阿拉伯糖(L-arabinose)诱导目的基因的表达。该系统由2个表达载体共同完成目的基因的表达。pE SP-1为主表达载体,即目的基因克隆到此表达载体上,由SP6启动子(promoter)+乳糖(lac)调节基因调控;pA RA-SP6为辅助表达载体,该载体通过SP6 RNA聚合酶的表达来控制调节主表达载体的启动子(SP6),由araB启动子(promoter)+ara C调节基因调控。实验结果显示该双控双调节表达载体系统控制严格,并且表达蛋白的量具有可调控性。

高产蛹虫草诱变菌株发酵条件优化及放大

考察高产蛹虫草诱变菌株放大发酵条件,为产业化奠定实验基础。以蛹虫草菌丝体干重、多糖、腺苷和虫草酸质量浓度为指标,采用单因素试验的方法优化5 L发酵罐发酵条件:搅拌转速、发酵培养基初始pH值和接种量,并在此条件下重复4次实验,以考察发酵条件的稳定性;进一步考察15 L和100 L发酵罐发酵条件。5 L发酵罐发酵条件为:转速250 r/min、起始pH值7、接种体积分数6%,发酵温度26℃,通气量250 L/h,菌丝体干重、多糖、腺苷和虫草酸质量浓度分别达到23.29 g/L、0.94 g/L、162.84 mg/L和2.06 g/L,4次重复实验发酵条件稳定(P<0.01)。15 L发酵罐的最佳发酵时间为72 h,菌丝体干重、多糖、腺苷和虫草酸质量浓度分别达到30.84g/L、1.10 g/L、233.22 mg/L和1.89 g/L;100 L发酵罐的最佳发酵时间为47 h,菌丝体干重、多糖、腺苷和虫草酸质量浓度分别达到32.05 g/L、1.33 g/L、187.20 mg/L和3.51 g/L。5 L发酵罐发酵条件稳定,以菌丝体干重、多糖、腺苷和虫草酸质量浓度为综合考察指标,分别绘制了高产蛹虫草诱变菌株15 L、100 L发酵罐发酵生长曲线,为生产提供了数据依据。

蒙药嘎日迪-13味丸对脑缺血大鼠海马组织白介素-1β、肿瘤坏死因子-α蛋白及神经细胞凋亡的影响

目的探讨蒙药嘎日迪-13味丸对脑缺血大鼠海马组织炎性细胞因子白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及神经细胞凋亡的影响。方法采用枕大池二次注血法至大鼠脑组织缺血损伤模型,在各时间段断头取脑,用ELISA法和流式细胞仪分别检测脑缺血海马组织中IL-1β和TNF-α的含量及细胞凋亡数量的百分比。结果与正常组比较,模型组海马组织中IL-1β和TNF-α升高,细胞凋亡百分比增多(P<0.05);与模型组比较,嘎日迪-13味丸组大鼠海马组织中IL-1β和TNF-α含量降低,细胞凋亡百分比数减少(P<0.05)。结论嘎日迪-13味丸能降低大鼠脑缺血组织神经细胞凋亡数量,减轻缺血损伤程度,其机制可能与降低脑组织内IL-1β和TNF-α含量有关。

蒙成药扎冲十三味丸对大鼠脑缺血组织细胞凋亡的影响

目的探讨扎冲十三味丸对缺血性脑组织损伤的保护机制。方法利用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,采用Elisa法和流式细胞技术Annexin V fitc/pi细胞双染法,检测凋亡细胞相关蛋白和神经细胞凋亡百分率,观察扎冲十三味丸对脑缺血组织bcl-2和bax蛋白表达水平以及缺血组织细胞凋亡程度的影响。结果扎冲十三味丸能减低缺血脑组织Bax蛋白含量和上调Bcl-2蛋白含量以及降低缺血脑组织细胞凋亡百分率。结论扎冲十三味丸通过降低缺血脑组织细胞凋亡百分率,对脑组织缺血损伤有保护作用。

蒙药珍珠丸对大鼠脑缺血缺氧损伤后白介素-1β、肿瘤坏死因子-α及神经细胞凋亡的影响

目的探讨珍珠丸对大鼠脑缺血缺氧损伤后炎性因子白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及神经细胞凋亡的影响。方法采用枕大池二次注血法至大鼠脑组织缺血缺氧损伤模型,在各时间段断头取脑,用ELISA法和流式细胞仪分别检测缺血缺氧脑组织中IL-1β和TNF-α的含量及细胞凋亡数量。结果缺血缺氧损伤脑组织中IL-1β和TNF-α显著升高,凋亡细胞数增多,模型组与正常组差异显著(P<0.05)。蒙药珍珠丸能明显降低脑组织中IL-1β和TNF-α含量,降低细胞凋亡数量,与模型组及正常组比较(P<0.05)。结论蒙药珍珠丸能减轻大鼠脑组织缺血缺氧损伤程度,降低神经细胞凋亡的作用,其机制可能与降低脑组织内IL-1β和TNF-α含量有关。

小鼠白细胞介素33真核表达质粒的构建及表达

克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染COS-7细胞,RT-PCR和免疫印迹法(western blotting)检测目的基因表达。结果显示,pc DNA3.1-IL-33中插入的片段序列测定结果与小鼠IL-33c DNA序列一致,重组质粒转染COS-7细胞后检测到相应mRNA及蛋白表达。成功克隆了小鼠IL-33基因c DNA,并构建其真核表达质粒。

重组小鼠IL-33成熟蛋白的原核表达、纯化及活性检测

目的为了在大肠埃希菌中表达具有生物学活性的小鼠IL-33成熟蛋白。方法利用PCR技术从pc DNA3.1-IL-33质粒中扩增小鼠IL-33成熟蛋白的基因,将其插入原核表达载体p ET21a(+),构建成p ET21a-m IL-33质粒,转化至大肠埃希菌BL21,筛选出可表达m IL-33的大肠埃希菌工程菌株。经IPTG诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化。结果经SDS-PAGE分析获得纯度高达95%的m IL-33蛋白,相对分子质量18 000。ELISA试验显示m IL-33可以有效的促进肠系膜淋巴细胞产生Th2型细胞因子(IL-5),与未处理组的差异具有显著的统计学意义。结论利用大肠埃希菌表达系统表达了具有生物活性的m IL-33蛋白,为继续开展IL-33在炎症性肠病的免疫治疗研究奠定了基础。

正常人血清β-淀粉样肽及血小板β淀粉样前蛋白水平与年龄的相关性探讨

目的:探讨正常人血清β-淀粉样肽及血小板β淀粉样前蛋白水平与年龄的相关性.方法:应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定正常中青年人血清APP和Aβ40、Aβ42含量.结果:血清Aβ40和Aβ42水平在39岁以下组最低,40~49岁年龄组最高,而到了50岁以上,反而比40~49岁组降低;APP在40~49岁年龄组最低,比39岁以下组低,50岁以上组最高.结论:在40~49岁年龄组,血清APP分解为Aβ40和Aβ42增加.

通辽市家畜感染无形体属病原体的调查

目的调查内蒙古通辽地区绵羊和牛的无形体感染情况。方法采用PCR方法检测内蒙古通辽市扎鲁特旗及科左中旗散放76只绵羊和20头牛的血样本,扩增嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、中央无形体(A.centrale)和牛无形体(A.bovis)的16 S rRNA基因和羊无形体(A.capra)的gltA基因。结果76只绵羊血样本中37份扩增到嗜吞噬细胞无形体目的基因,阳性率为48.7%;76只绵羊血样本中16份扩增到中央无形体目的基因,阳性率为21.1%。所有绵羊的血样本均未扩增到羊无形体和牛无形体的目的基因,20头牛的血样本均未扩增到4种无形体的目的基因。结论通辽地区羊存在嗜吞噬细胞无形体和中央无形体感染,提示该地区存在无形体病的自然疫源地和可能存在人无形体病。

近十年布鲁氏菌研究论文发表情况定量分析

基于中国知网(CNKI)学术期刊数据库平台,采用统计学定量分析的方法,查询近十年有关布鲁氏菌研究论文的发表时间分布、主题、作者、院校等几个维度进行统计分析,确定布鲁氏菌研究的核心作者、研究内容、研究方法、研究主题等,以期分析十年数据,对今后在布鲁氏菌的研究提供重要参考.结论:文献量符合龚帕兹生产曲线模型;研究'布鲁氏菌'还没有达到成熟学科信息作者的最佳分布状态;60%的文献论文集中在八个主要的期刊中发表.

布鲁氏菌病新型疫苗研究进展

布鲁氏菌病(简称布病)是一种严重危害人类及动物健康的人兽共患传染性疾病,接种疫苗是控制布病流行的有效手段之一,而目前还没有获得许可的疫苗来预防人类布病,兽用疫苗存在毒力恢复及不能区分疫苗接种与野菌株感染的不足。随着基因工程、分子克隆等技术的日益发展,重组蛋白疫苗、DNA疫苗、纳米颗粒疫苗、载体疫苗等新型疫苗相关研究逐渐成为布病疫苗领域的研究热点。本文就近十年出现的新型布病疫苗研究进展情况作一综述,以期为开发更为有效、安全的布鲁氏菌病新型疫苗提供新的思路。

黑大蒜水提物对高脂血症大鼠血脂的作用、抗氧化活性及对免疫功能的影响

目的:研究黑大蒜水提物对高脂血症大鼠的血脂调节作用、抗氧化活性及对免疫功能的影响.方法:采用36只Wistar大鼠随机分为3组,分别接受正常饲料、高脂饲料、高脂饲料加入黑大蒜水提物灌胃处理.3周后取血和肝组织,测定血液中总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平以及血、肝的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)值.测定脾细胞分泌NO水平.结果:与高脂饲料组相比,黑大蒜提取物组TC、TG和LDL-C含量显著降低(P<0.05),HDL-C含量显著升高(P<0.05);黑大蒜提取物组SOD值显著升高(P<0.05),MDA值显著降低(P<0.05);黑大蒜提取物组脾细胞NO分泌水平显著升高(P<0.05).结论:黑大蒜水提物可明显调节血脂,提高抗氧化能力,促进脾细胞分泌NO.