葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物的制备及其理化特性观察

目的制备葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物(SPA-PEI交联物),并观察其理化性状。方法采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)化学偶联法将葡萄球菌A蛋白(SPA)与聚乙烯亚胺(PEI)化学交联,用Sephadex G75柱层析法纯化SPA-PEI交联物。采用SDS-PAGE法鉴定交联物的纯度;紫外分光光度法测定交联物的吸收峰;采用粒度及Zeta电位分析仪测定交联物的粒径及表面Zeta电位、酸碱滴定法测定交联物的质子缓冲能力。结果 SPA与PEI共价结合形成SPA-PEI交联物,且交联物的纯度较高。SPA-PEI交联物在280 nm处有一吸收峰,其吸收曲线与SPA类似。SPA-PEI交联物粒径为(185.0±28.5)nm,表明Zeta电位为(38.0±6.6)m V,提示其粒径范围合理,带有较强的正电荷,可结合带负电荷的核酸片段。SPA-PEI交联物的酸碱滴定曲线与PEI类似,均有一个明显的缓冲平台,提示该交联物具有较强的质子缓冲能力。结论成功地制备出纯度良好的SPA-PEI交联物。SPA-PEI交联物粒度分布较合理、表面带较强正电荷、并且具有较强的质子缓冲能力。

新型抗体靶向性核酸转移系统关键组分SPA-PEI交联物的生物学功能研究

目的考察新型抗体靶向性核酸转移系统的关键组分葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物(SPA-PEI)的生物学功能,即结合IgG与压缩、复合DNA的能力。方法采用酶联免疫吸附试验和中和抑制实验测定SPA-PEI交联物与多种来源IgG的结合能力;采用DNA凝胶阻滞实验测定SPA-PEI交联物与DNA片段的结合;采用溴化乙啶拒掺实验测定SPA-PEI交联物压缩DNA的能力。结果 SPA-PEI交联物可与多种种属来源的IgG良好结合;SPA-PEI交联过程对SPA的结合特性无明显影响,SPA活性保持较好;SPA-PEI交联物能较好地中和质粒DNA或脱氧核酶(DzTi)的负电荷,压缩DNA片段能力接近游离PEI。结论制备的SPA-PEI交联物保持了SPA和PEI的生物学活性;SPA-PEI交联物可用于抗体靶向性核酸转移系统的构建。