葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺组织PERK/ATF4/CHOP信号通路的影响

目的观察葛根芩连汤对2型糖尿病(T2DM)小鼠胰腺内质网应激的影响,探讨其治疗T2DM的作用机制。方法75只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组15只,15只db/m小鼠作为空白组,给药组分别予相应药物灌胃12周。检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c),HE染色观察胰腺组织病理变化,TUNEL染色检测胰岛细胞凋亡情况,Western blot检测胰腺组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、p-PERK、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测胰腺组织PERK、ATF4、CHOP mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、FBG和HbA1c含量显著增加(P<0.01);胰腺组织结构不完整,边界模糊,内有空泡,胰岛细胞凋亡明显增加(P<0.01);胰腺组织GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达显著升高(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠体质量、FBG和HbA1c含量显著减少(P<0.05,P<0.01);胰腺组织病理改变有所减轻,胰岛细胞凋亡不同程度减少(P<0.05,P<0.01);葛根芩连汤高、中剂量组和二甲双胍组胰腺组织GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论葛根芩连汤可能通过抑制内质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通路,下调相关基因和蛋白表达,减少胰岛细胞凋亡,保护胰岛细胞功能,延缓T2DM进展。

基于AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路探讨葛根芩连汤对db/db糖尿病小鼠肝脏氧化应激的影响

目的观察葛根芩连汤对db/db小鼠肝脏氧化应激的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法将75只自发性2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组15只,另取15只db/m小鼠作为空白组,分别予相应药物灌胃12周。检测小鼠体质量、空腹血糖(FPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)含量,HE染色观察肝脏组织病理改变,化学发光免疫分析法检测肝组织丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,Western blot检测肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、沉默信息调节因子1(SIRT1)、叉头框蛋白1(FoxO1)、p-FoxO1蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肝组织AMPK、SIRT1、FoxO1 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、FPG及HbA1c含量显著增加(P<0.01);肝细胞脂肪变性、点状坏死,肝窦淤血;肝组织MDA含量显著增加,GSH-Px、CAT活性显著降低(P<0.01),AMPK、p-AMPK和SIRT1蛋白表达显著降低,FoxO1和p-FoxO1蛋白表达显著升高(P<0.01),AMPK和SIRT1 mRNA表达显著降低,FoxO1 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠体质量、FPG及HbA1c含量显著减少(P<0.05,P<0.01);肝组织病理改变有所减轻;肝组织MDA含量显著减少,GSH-Px、CAT活性显著升高(P<0.05,P<0.01),p-AMPK、AMPK和SIRT1蛋白表达显著升高,FoxO1和p-FoxO1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),AMPK和SIRT1 mRNA表达显著升高,FoxO1 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与二甲双胍组比较,葛根芩连汤高剂量组各指标变化更显著(P<0.05)。结论葛根芩连汤可能通过调节AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路降低db/db小鼠肝脏氧化应激水平,改善2型糖尿病。

葛根芩连汤治疗2型糖尿病研究进展

葛根芩连汤治疗2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM),可降低血糖水平、改善糖脂代谢及胰岛功能等。实验研究也表明,葛根芩连汤可通过改善胰岛素抵抗、调节糖脂代谢、调节肠道菌群、抑制炎症因子表达等控制血糖水平,缓解T2DM病情。目前的研究仍存在不足之处:葛根芩连汤在治疗T2DM的应用中,缺乏统一规范的疗效判定标准及大量的临床样本,其具体的分子生物学机制尚不明确。此外,葛根芩连汤原方中“两”的剂量历来没有统一的规范,以往的临床应用与研究中,各医家对其具体剂量的使用均有不同,主要从临床经验入手来确定其具体用量,缺乏严谨性,不便于临床规范应用。今后,应结合现代分子生物学技术探讨葛根芩连汤治疗T2DM的具体机制,并建立统一规范的疗效判定标准和剂量使用标准,充分发挥中医药治疗T2DM的优势,为提高疗效及扩大临床应用补充有利依据。

痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中gp130、SOCS3表达的影响

目的观察痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织中糖蛋白130(gp130)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)基因和蛋白表达的影响。方法将60只大鼠随机分为A、B、C、D组各15只,B、C、D组均采用三硝基苯磺酸/乙醇溶液+束缚应激、饮食失节法行肝郁脾虚型UC造模,A组采用同样方法用等量的生理盐水灌肠。C、D组分别予以痛泻要方(生药5.5 g/kg)、美沙拉秦(0.5 g/kg)灌胃10 m L/kg,A、B组灌服等体积生理盐水。各组造模成功后第1天开始灌胃,1次/d,连续21 d。取出距肛门以上7~8 cm处结肠段,肉眼行结肠黏膜损伤评分,分别采用Real-time荧光定量PCR法及免疫组化、免疫印迹法检测结肠组织中的gp130、SOCS3基因和蛋白。结果 B组结肠黏膜损伤评分为(2.67±0.62)分,高于A组的(0.6±0.63)分(P<0.01);C、D组分别为(1.73±0.70)、(1.27±0.46)分,均高于B组(P均<0.01);C、D组间比较无统计学差异。B组较A组结肠组织中gp130基因和蛋白表达升高、SOCS3基因和蛋白表达降低(P均<0.05),C、D组较B组结肠组织中gp130基因和蛋白表达降低、SOCS3基因和蛋白表达升高(P均<0.05),C、D组结肠组织gp130、SOCS3基因和蛋白比较无统计学差异。结论痛泻要方可下调gp130表达、上调SOCS3表达,从而有效降低肝郁脾虚型UC大鼠结肠黏膜损伤程度。

北沙参的临床应用及其用量探究

通过搜集古医籍及现代医家临床经验,总结出北沙参具有以下特点:1)临床汤剂用量为7.5~100 g(100 g时浓煎顿服,仅服1剂,未说明配伍注意事项),常用剂量为10~30 g。2)根据疾病、证型、症状寻求最佳用量,如清咽润喉治疗慢性咽炎,为10 g;益胃生津治疗胃痛、胃炎,为10~15 g;清肺润燥治疗肺系疾病(咳嗽、间质性肺疾病、支气管扩张病、百日咳痉咳期、非典型性肺炎),为7.5~50 g;滋阴清热润燥治疗消化系统疾病(胆道疾病、慢性乙型肝炎、便秘、肝炎),内分泌疾病(甲状腺功能亢进症、甲状腺癌)、传染病(霍乱),用量多为10~40 g,治疗皮肤病(湿疹、斑秃)、妇科疾病(产后恶露不尽),用量为15~40 g,治疗免疫系统疾病(银屑病)用量为65 g;养阴清热治疗瘟疫重症,其用量为100 g(浓煎顿服,仅服1剂,未说明配伍注意事项)。3)根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如清咽润喉常配伍麦冬、桔梗;益胃生津常配伍麦冬、石斛、白芍;清肺润燥常配伍麦冬、知母、百合、银柴胡、白薇等;滋阴清热润燥常配伍黄芪、党参、生地黄、天花粉、地骨皮等;养阴清热常配伍赤芍、红花。

地肤子的临床应用及其用量探究

通过搜集古医籍及综合现代医家临床经验,总结出地肤子具有以下特点:1)临床汤剂用量为9~30 g,常用剂量为15~30 g,散剂中地肤子剂量为0.46~1.38 g。2)根据疾病、证型、症状寻求最佳用量,如清热利湿,疏风止痒治疗皮肤病(荨麻疹、变应性血管炎、特应性皮炎、糖尿病皮肤瘙痒症、湿疹、酒皶鼻)、凉燥证、五官科(慢性咳嗽、喉咳、喉源性咳嗽)、妇科病(多囊卵巢综合征、黄带),用量多为9~30 g;治疗远视者,散剂用量为1.38 g;利尿通淋治疗小儿急性肾炎,用量多为30 g,治疗小儿积热、小便不通,散剂用量为0.46 g。3)根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如清热利湿常配伍大黄、茯苓等;疏风止痒常配伍羌活、荆芥、蝉蜕、徐长卿、白鲜皮等;利尿通淋常配伍冬葵子、车前子等。

中医药文化的核心价值观探讨

中国传统文化是中华民族的灵魂,决定着中国人的人生观、生命观和价值取向。中医药文化是中国传统文化的杰出范例,体现了中国传统文化最主要的思想基因和核心理念。中医药从天人合一、整体观念、人命至重等独特的思维视角关注生命和健康,蕴含着丰富的科技文化和人文精神。历代中医名家在运用中医药救治病患、普渡苍生的过程中,早已将中医学的核心价值观上升到"上医医国,毕生奉献"的高度。关于中医药文化的核心价值观的提法较多,但目前尚未有十分明确的核心观点。从历代著名医家的认识及实践出发,提炼出医乃仁术、大医精诚、致中求和、早治未病、天人合一、以人文本、使命担当等7个核心理念或可代表中医药文化核心价值观的精髓部分,对此7个核心观念逐一分析其精神内涵,借以弘扬中医药文化优秀人文精神,激励中医人传承和发展中医学,并扩大这些核心观念的民众认知和影响力。

白芷的临床应用及其用量探究

通过搜集古医籍及现代医家临床经验,总结出白芷具有以下特点:临床汤剂用量为3.75~50 g,常用剂量为3~10 g,散剂常用量为0.53~4.6 g。根据疾病、证型、症状寻求最佳用量,如祛风止痛治疗神经系统疾病(耳鸣、脑外伤后遗症、偏头痛、三叉神经痛、头痛、面瘫),为3.75~50 g(汤剂),0.53 g(散剂);通窍排脓治疗五官科疾病(鼻渊、角膜炎、口舌生疮、慢性鼻窦炎、变应性鼻炎、腺样体肥大、颈部淋巴结炎),为5~12 g(汤剂)、4.6 g(散剂);消肿排脓治疗骨科疾病(放射性颌骨骨髓炎)、皮肤科疾病(痤疮、白癜风等),为6~15 g。根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如祛风止痛常配伍桂枝、羌活、川芎、细辛等;燥湿止带、固涩常配伍当归、苦参、泽泻、土茯苓等;通窍排脓常配伍鱼腥草、生黄芪、辛夷等;消肿排脓常配伍党参、白术、皂角刺等。

葛根芩连汤对db/db糖尿病小鼠SIRT1/FoxO1自噬通路的影响

目的:探究葛根芩连汤是否通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FoxO1)自噬通路减轻db/db糖尿病小鼠胰岛素抵抗。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型db/db小鼠75只及对照db/m小鼠15只予维持饲料喂养1周后检测血糖,随机分为6组,每组15只。正常组(生理盐水0.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.9 g·kg^(-1))及模型组(生理盐水0.2 g·kg^(-1)),连续灌胃给药8周,1次/d,使用罗氏血糖仪检测空腹血糖(FBG),全自动生化分析仪检测血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清空腹胰岛素(INS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及SIRT1/FoxO1自噬通路相关蛋白的表达;免疫组化检测肝脏组织中SIRT1、FoxO1、Beclin-1、LC3B蛋白的表达;透射电镜观察肝脏自噬小体形成。结果:与正常组比较,模型组FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平显著升高(P<0.01),肝脏组织SIRT1、Beclin-1、LC3蛋白表达显著升高(P<0.01),FoxO1显著升高(P<0.01),透射电镜显示模型组自噬小体最多;与模型组比较,二甲双胍组、葛根芩连汤低、中、高剂量组血清FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝脏组织SIRT1、Beclin-1、LC3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),FoxO1显著降低(P<0.01),透射电镜显示用药组自噬程度有所减轻;与二甲双胍组比较,葛根芩连汤中、高剂量组FBG、FINS、TG水平显著降低(P<0.01),肝脏组织SIRT1、Beclin-1、LC3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),FoxO1显著降低(P<0.01),葛根芩连汤高剂量HOMA-IR、TC、LDL-C、HDL-C水平明显降低(P<0.05,P<0.01),透射电镜显示葛根芩连汤中、高剂量组自噬小体明显减少。结论:葛根芩连汤可显著改善糖脂代谢紊乱,通过激活SIRT1/FoxO1自噬通路减轻db/db小鼠胰岛素抵抗从而防治2型糖尿病。

葛根芩连汤对2型糖尿病模型小鼠肝组织NLRP3炎症小体信号通路的影响

目的观察不同剂量葛根芩连汤对T2DM db/db小鼠肝组织核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/Caspase-1/IL1β炎症信号通路的影响。方法将75只SPF级雄性db/db小鼠按随机数字表法分为模型组、二甲双胍组(0.2 g/kg)及葛根芩连汤高、中、低剂量组(61.80、30.90、15.45 g/kg),每组15只,另取15只db/m雄性小鼠作为空白组。各组灌胃相应药物,空白组、模型组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续灌胃12周。测定各组小鼠体重、空腹血糖及HbA1c水平;采用实时荧光定量PCR检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA水平;Western Blot法检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达;HE染色观察肝组织形态。结果与模型组比较,葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组小鼠体重、空腹血糖及HbA1c水平降低(P<0.05),葛根芩连汤低剂量组小鼠体重、空腹血糖水平降低(P<0.05);各给药组肝组织NLRP3、IL-1βmRNA水平降低(P<0.05),葛根芩连汤高、中剂量组肝组织Caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05);各给药组肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-18表达降低(P<0.05),葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组IL-1β表达降低(P<0.05);与二甲双胍组比较,葛根芩连汤高剂量组小鼠体重、空腹血糖降低(P<0.05),葛根芩连汤高、中剂量组HbA1c水平降低(P<0.05);葛根芩连汤高剂量组肝组织NLRP3、IL-1βmRNA水平降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色显示,各给药组小鼠肝组织病理改变减轻。结论葛根芩连汤可能通过抑制db/db小鼠肝组织NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症信号通路的激活降低血糖,从而改善T2DM炎症损伤。

痛泻要方对溃疡性结肠炎大鼠下丘脑中IL-6,IL-6R表达的影响

目的:观察痛泻要方对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠下丘脑中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-6受体(IL-6R)基因和蛋白表达的影响。方法:将SPF级Wistar大鼠运用复合方法进行溃疡性结肠炎造模后,随机分为5组:模型组,痛泻要方低、中、高剂量(2.75,5.5,11 g·kg^(-1))组,美沙拉嗪(5-ASA)组。药物处理大鼠21 d后麻醉处死,肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分。分离各组大鼠血清,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IL-6含量,分离大鼠下丘脑组织并提取总RNA后,实时荧光定量PCR(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法检测IL-6和IL-6R基因表达,免疫组织化学染色法检测下丘脑组织IL-6和IL-6R的分布及蛋白表达量。结果:ELISA结果显示,与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-6含量明显升高,经过药物处理后,药物组血清中IL-6含量均有所下降,其中以痛泻要方高剂量组效果最为明显(P<0.05)。Real-time PCR结果表明,模型组大鼠下丘脑组织中IL-6和IL-6R基因表达量明显高于空白组(P<0.05),经药物治疗后,药物组IL-6和IL-6R基因表达均有所降低,其中以5-ASA组和痛泻要方高剂量组降低最为明显(P<0.05)。免疫组织化学染色结果表明,与空白组比较,溃疡性结肠炎大鼠IL-6和IL-6R蛋白表达量明显增加(P<0.05),药物处理可以降低大鼠下丘脑IL-6和IL-6R蛋白表达量,其中以5-ASA组和痛泻要方高剂量组降低最为明显(P<0.05)。结论:痛泻要方对2,4,6三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法UC大鼠下丘脑组织中IL-6和IL-6R基因和蛋白的表达具有明显抑制作用,提示痛泻要方治疗溃疡性结肠炎的机制可能与抑制下丘脑中IL-6/IL-6R信号通路的异常活化有关。

痛泻要方对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜STAT3基因和蛋白表达的影响

目的:观察痛泻要方对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清白介素-6(IL-6)、结肠黏膜STAT3蛋白和基因表达的影响,探讨其作用机制。方法:受试动物随机分为空白组,模型组,痛泻要方高、中、低剂量组及美沙拉秦(5-ASA)组,每组15只,痛泻要方低、中、高剂量组分别按生药1.4、2.8、5.6g/kg剂量灌胃,美沙拉秦组给药剂量为0.5g/kg,通过测定各组大鼠血清IL-6浓度、结肠组织STAT3蛋白和基因水平,探索痛泻要方对UC的干预机制。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清IL-6含量、结肠组织STAT3基因和蛋白的表达量均明显升高(P<0.01);治疗后,痛泻要方高剂量组与美沙拉秦组血清IL-6含量、STAT3基因和蛋白的表达量较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:痛泻要方对肝郁脾虚型UC大鼠模型血清IL-6含量、结肠黏膜STAT3基因和蛋白的表达有下调作用,提示痛泻要方治疗UC的作用可能与抑制或阻断IL-6/JAK/STAT3信号转导途径有关。

痛泻要方对溃疡性结肠炎模型大鼠血清NPY、VIP表达以及结肠组织病理的影响

目的:探讨痛泻要方对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠血清中神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)表达的影响及作用机制。方法:实验动物采用2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法+束缚应激+饮食失节方法造模,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组,美沙拉嗪组,痛泻要方高剂量组、中剂量组、低剂量组。肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分。采用ELISA法检测大鼠血清中NPY和VIP的表达水平。结果:经肉眼观察发现模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和溃疡形成,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05),结合病理、蔗糖水测试实验等证实模型成功。模型组大鼠血清组织中VIP水平低于空白组,NPY水平高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.05);治疗后,痛泻要方组VIP含量较模型组均增加,NPY含量较模型组均降低(P<0.05)。结论:痛泻要方对UC模型大鼠脑肠轴的异常有调节作用,其作用机制可能与调节血清中VIP、NPY的含量有关。

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠血清相关炎性因子表达及结肠组织病理形态的影响

目的研究四神丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)表达及结肠组织病理形态的影响。方法将SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组及四神丸组4组,采用复合方法复制脾肾阳虚型UC大鼠模型。各组大鼠以相关药物及生理盐水灌胃21 d后处死,取大鼠结肠,肉眼观察结肠黏膜大体形态损伤并进行评分;分离各组大鼠血清,采用ELISA法检测血清IL-2,TNF-α,SOCS3的表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜大体形态损伤评分及血清IL-2,TNF-α水平显著升高,血清SOCS3水平显著降低,差异均有统计意义(P<0.05);与模型组比较,美沙拉嗪组与四神丸组大鼠结肠黏膜大体形态损伤评分及血清TNF-α水平显著降低,血清SOCS3水平显著升高,差异均有统计意义(P<0.05)。结论四神丸可能通过调节血清TNF-α,S OCS3的水平来调控肠上皮免疫系统,从而达到治疗UC的目的。