NF-κB对A549细胞上皮间质转化进程的影响

目的:探讨NF-κB对A549细胞上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:选择处于对数生长期的A549细胞,分为空白组、TGF-β组、TGF-β+BAY11-7082(NF-κB抑制剂)组、BAY11-7082组和溶剂(二甲基亚砜)对照组。24 h后,采用Western blot法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、Vimentin和Snail)以及NF-κB(p65)、NOX4蛋白的表达,采用DCFH-DA探针法检测ROS的水平,利用划痕实验检测A549细胞的迁移能力。结果:与空白组比较,TGF-β组细胞中Vimentin、Snail蛋白的表达水平升高,E-cadherin蛋白的表达水平降低,划痕宽度变窄,同时活化NF-κB(p65)并提高NOX4蛋白表达水平以及ROS的水平(P均<0.05);与TGF-β组比较,TGF-β+BAY11-7082组细胞中Vimentin、Snail蛋白的表达水平降低,E-cadherin蛋白的表达水平升高,划痕宽度变宽,同时NOX4蛋白表达水平以及ROS的水平降低(P均<0.05)。结论:抑制NF-κB可能通过降低NOX4的表达以及ROS的产生抑制TGF-β诱导的A549细胞的EMT进程,降低细胞的迁移能力。

热休克蛋白70对人肺腺癌A549细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)对A549细胞上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:筛选替普瑞酮诱导HSP70表达的最佳作用条件。利用TGF-β刺激A549细胞建立EMT模型。将细胞分为对照组、TGF-β组、替普瑞酮组、TGF-β+替普瑞酮组,TGF-β的作用浓度为5μg/L。应用Western blot、划痕实验检测各组A549细胞中EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达和细胞迁移能力。结果:选择50μmol/L的替普瑞酮用于实验;TGF-β促使A549细胞E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达升高,迁移能力增强;替普瑞酮促使A549细胞E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达降低,迁移能力下降;替普瑞酮可拮抗TGF-β促A549细胞EMT的作用(P<0.05)。结论:HSP70高表达可抑制A549细胞EMT进程和细胞的迁移。

新冠肺炎疫情冲击下对职业卫生与职业医学课程教学模式的思考

新冠肺炎疫情期间,教育部要求“停课不停学、停课不停教”,在此形势下,《职业卫生与职业医学》首次开展了线上教学。对比以往的线下教学经验,此次线上教学的开展将会促进《职业卫生与职业医学》的课程建设。

NOX1与NF-κB对TNF-α诱导A549细胞氧化损伤的影响

目的探讨酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)和核转录因子-κB(NF-κB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞发生氧化损伤中的关系。方法①以质量浓度为0.0、10.0、25.0和50.0μg/L的TNF-α刺激A549细胞,采用CCK-8实验检测各组细胞抑制率,选择合适的TNF-α刺激浓度。②取对数生长期A549细胞分为空白对照组、溶剂对照组、TNF-α组、二亚苯基碘(DPI)组和TNF-α+DPI组进行NOX1抑制实验。取对数生长期A549细胞分为空白对照组、TNF-α组、BAY11-7082组和TNF-α+BAY11-7082组进行NF-κB抑制实验。以蛋白印迹法检测各组细胞NOX1和p65相对表达水平,以流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)相对表达水平。结果①随着TNF-α剂量的增加,A549细胞的抑制率增加(P<0.05),选择25.0μg/L作为后续实验TNF-α刺激剂量。②TNF-α组细胞NOX1、p65蛋白及ROS相对表达水平分别高于空白对照组、溶剂对照组和DPI组(P<0.05);TNF-α+DPI组细胞上述指标均低于TNF-α组(P<0.05),但高于DPI组(P<0.05)。TNF-α组细胞NOX1、p65蛋白及ROS相对表达水平分别高于空白对照组和BAY11-7082组(P<0.05),TNF-α+BAY11-7082组细胞上述指标均低于TNF-α组(P<0.05)。结论抑制NOX1或NF-κB均可减轻TNF-α诱导的A549细胞氧化损伤。

转化生长因子-β1致肺成纤维细胞转分化过程中差异表达基因的筛选和验证

[背景]肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化是矽肺由炎症期进入纤维化期的标志性细胞事件,转化生长因子-β1(TGF-β1)是此环节中最重要的细胞因子。近年来,随着高通量测序和芯片技术的发展,越来越多TGF-β1刺激成纤维细胞转分化的数据被人们所关注。[目的]利用生物信息学相关方法探索TGF-β1刺激的人肺成纤维细胞转分化过程中差异共表达基因,筛选与肺成纤维细胞转分化密切相关的转录因子。[方法]从基因表达综合数据库GEO检索并下载TGF-β1与肺成纤维细胞相关的高通量数据集GSE17518、GSE97829和GSE119007,对数据集进行差异分析,筛选三组数据集共同上调和共同下调的差异表达基因;对筛选出的差异基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析;通过HumanTFDB数据库,下载所有人转录因子基因名称和序列,并与上述获得的共表达差异基因进行比对,得到共表达差异转录因子;随后用TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞MRC-5构建转分化模型,对筛选出的差异转录因子进行初步验证。[结果]基于这三个数据集,共得到145个上调差异表达基因,88个下调差异表达基因。GO分析结果显示:上述共表达差异基因主要参与细胞外基质、肌动蛋白细胞骨架、内质网腔等组分的构成;并且与肌动蛋白结合、生长因子活性、细胞外基质结构性成分、胶原结合、TGF-β1受体结合等生物学过程相关;此外还与细胞外基质组织、细胞迁移和凋亡,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路活化、MAPK激活、肽基酪氨酸磷酸化的正调节等有关。通过KEGG信号通路富集分析,筛选出的主要相关信号通路包括TGF-β1信号通路、细胞外基质-受体相互作用、黏着斑和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路等。将上述得到的差异基因与人转录因子序列进行比对,得到了7个上调的转录因子和11个下调的转录因子,从中挑选的上调转录因子早期生长应答因子2(EGR2)、SNAIL家族转录抑制因子1(SNAIL1)和下调转录因子胸腺选择相关高迁移转录因子(TOX)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)在TGF-β1刺激MRC-5细胞中的qRT-PCR验证结果显示,EGR2和SNAIL1均高表达,而TOX和PPARG均低表达。[结论]筛选出18个与肺成纤维细胞转分化相关的转录因子基因,其中在TGF-β1刺激MRC-5细胞中EGR2和SNAIL1表达升高,TOX和PPARG表达降低。

TGF-β1致MRC-5细胞转分化的差异microRNAs表达分析

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞株MRC-5细胞基因表达微阵列芯片的差异表达微小RNA(miRNA),筛选成纤维细胞转分化的关键基因和信号通路。方法从美国国立信息中心的高通量基因表达数据库下载TGF-β1刺激MRC-5细胞的miRNA表达芯片数据集GSE43992,采用R语言Limma包进行差异表达miRNAs的筛选,通过miRWalk数据库预测其对应的靶基因,对差异表达的miRNAs和靶基因进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析,构建蛋白质相互作用(PPI)网络。结果共筛选出5条差异表达的miRNAs,包括4个上调的miRNAs和1个下调的miRNA,并预测出42个对应的差异表达靶基因。GO富集分析结果显示,靶基因主要参与胶原蛋白分解代谢、胞外基质组织、膜组织、胶原纤维组织和细胞对氨基酸刺激的反应等生物学过程;KEGG信号通路分析结果显示,miRNAs和相应靶基因所对应的信号通路主要集中在18条信号通路上,主要与miRNAs在肿瘤方面、糖尿病并发症中的年龄-种族信号通路和蛋白质消化与吸收有关。PPI网络筛选出的3个成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化核心基因分别为苏氨酸激酶1、雌激素受体1和β-连环蛋白。结论共筛选出与TGF-β1致MRC-5细胞转分化相关的5个差异表达的miRNAs、42个靶基因、18条信号通路和3个核心基因,可为包括尘肺病及肺纤维化在内的多种疾病的治疗和研究提供新的参考。

NF-κB/NOX1信号通路在TNF-α诱导A549细胞凋亡中的作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的A549细胞凋亡中核转录因子-κB(NF-κB)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)信号通路的作用。方法 (1)以浓度为0.00、0.25、0.50和1.00 nmol/L的TNF-α刺激A549细胞,采用CCK-8实验检测细胞存活率,筛选TNF-α的最优刺激剂量。(2)取对数生长期A549细胞随机分为4组,对照组、TNF-α组、BAY11-7082(NF-κB抑制剂)组和TNF-α+BAY11-7082组。对照组细胞不予任何处理;TNF-α组和BAY11-7082组分别予浓度为0.50 nmol/L的TNF-α和浓度为5μmol/L的BAY11-7082刺激;TNF-α+BAY11-7082组细胞先后加入上述浓度的TNF-α和BAY11-7082刺激。培养24 h后,采用CCK-8实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测NF-κB(p65)和NOX1蛋白的相对表达水平。结果 (1)以浓度为0.50 nmol/L的TNF-α刺激A549细胞时,可降低其增殖活性并促进细胞的凋亡,选择该浓度作为后续实验的TNF-α刺激剂量。(2)与对照组比较,TNF-α组A549细胞存活率下降(P<0.05),细胞凋亡率和NF-κB(p65)、NOX1蛋白的表达均升高(P值均<0.05)。与对照组比较,BAY11-7082组A549细胞存活率和NF-κB(p65)、NOX1相对表达水平均下降(P值均<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05)。与TNF-α组比较,TNF-α+BAY11-7082组A549细胞由长梭形变为不规则形,细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率和NF-κB(p65)、NOX1相对表达水平均下降(P值均<0.05)。结论 NF-κB/NOX1信号通路参与了TNF-α诱导的A549细胞凋亡。