抗SARS-CoV-2卵黄抗体的制备与活性研究

目的:运用卵黄抗体(IgY)技术制备高效的抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgY并检测其免疫学活性。方法:使用SARS-CoV-2灭活疫苗免疫蛋鸡,运用冻融水稀释法、硫酸铵沉淀法和透析法从鸡蛋中提取IgY进行浓缩及纯化并优化IgY提取方法。采用SDS-PAGE对IgY的提取及纯化效果进行表征,BCA法检测纯化后蛋白的浓度、间接ELISA法检测抗体对重组SARS-CoV-2 S1蛋白、N蛋白的效价及其热稳定性。对Balb/c小鼠分别给予15 d常规剂量IgY及30 d大剂量IgY口服及滴鼻处理,采用ELISA法测定小鼠血清对IgY免疫反应性及小鼠体内部分炎症指标IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNF-α表达情况,明确IgY安全使用剂量。结果:纯化后IgY SDS-PAGE表征条带正确,IgY提取及纯化效果好。纯化后的IgY效价在免疫完成后第2周达到最高,在200μg/mL时重组SARS-CoV-2 S1蛋白和N蛋白的效价高达1∶256。IgY抗体经25~60℃的温度处理4 h后活性仍基本保持稳定。常规剂量IgY未引起小鼠明显免疫反应。长期大剂量口服及滴鼻IgY时,IgY浓度为20 mg/mL处理组小鼠血清IL-1β、IL-6、IFN-γ及TNF-α分泌显著增加。结论:IgY技术具有快速获得针对不同抗原的高效IgY的潜力,且经其制成的IgY具有良好的热稳定性及生物安全性,但长期使用时IgY剂量应避免超过50 mg/kg,以免加重肾脏处理负担。

基于微纳技术的循环肿瘤细胞免疫检测新方法

本研究旨在探索一种高灵敏度、高特异性检测循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的免疫检测新方法,以尽早地检出结直肠癌,提高该疾病的检出率。首先制备含有线性微柱结构的微芯片,通过在其表面孵育氧化石墨烯-链霉亲和素(graphite oxide-streptavidin,GO-SA)及偶联广谱一抗(antibody1,Ab1),即上皮特异性黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)单克隆抗体以捕获CTCs。运用羧基化多壁碳纳米管(carboxylated multi-walled carbon nanotubes,MWCNTs-COOH)与结直肠癌相关抗体,即特异性二抗(antibody 2,Ab_(2))偶联制备抗体复合物。在捕获CTCs的微芯片上孵育该抗体复合物,构建以Ab1-CTCs-Ab_(2)为主体的超级三明治结构,通过电化学工作站检测并验证其高灵敏度和高特异性。结果发现,在免疫传感器的构建中结合应用微纳技术,极大地提高了CTCs的检测灵敏度和特异性。本研究验证了该免疫传感器应用于临床血样检测的可行性,并通过该免疫传感器对结直肠癌患者外周血中CTCs进行检测和计数。结果表明,基于微纳技术的超级三明治式免疫传感器为CTCs的检测提供了新的途径,对临床工作中的疾病诊断及病情实时监控方面均具有潜在的应用价值。