硒-谷胱甘肽过氧化物酶在脑抗氧化损伤中的研究进展

硒是人体必需的微量元素之一,硒半胱氨酸是谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心,脑内的谷胱甘肽过氧化物酶通过多种途径,不同机制清除脑内的氧代谢产物,谷胱甘肽过氧化物酶减少和活性降低可能与脑智力发育障碍、大脑缺血缺氧损伤、神经变性疾病及重金属中毒的发生有关,因此提高脑内谷胱甘肽过氧化物酶的浓度可能能够防止脑细胞受到氧化损伤,保护大脑功能。

低硒饮食对发育期大鼠脑氧化代谢及CREB表达的影响

目的:探讨低硒饮食对发育期大鼠大脑皮层和海马的脂质过氧化物和转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法:生化分析方法测定低硒喂养的第三代21日龄大鼠不同脑区丙二醛(MalondialdehydeMDA)含量的变化,用免疫组织化学和Westernblot免疫印迹的方法测定CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的含量。结果:低硒饮食组较对照组大鼠大脑皮层和海马MDA含量增加,CREB和p-CREB含量下降。结论:低硒膳食能够引起发育期大鼠大脑皮层和海马的氧化代谢产物堆积。CREB表达减少,提示低硒能够引起大脑皮层和海马神经元功能下降,低硒可能是导致学习记忆能力降低的潜在因素之一。

发育期低硒大鼠大脑皮层核基质蛋白的毛细管电泳分析

目的:利用高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis,HPCE)观察低硒对发育期大鼠脑核基质蛋白(Nuclear Matrix Proteins,NMPs)的影响。方法:利用人工配制的低硒饲料喂养的SD大鼠,分为对照组和低硒组。取第三代出生后21天的大鼠,处死后迅速取脑,分离大脑皮层。提取NMPs,经初步鉴定后,用HPCE的毛细管区带电泳(CZE)模式进行NMPs的分离,观察其组成成分的改变。结果:NMPs经HPCE分离出3～4个蛋白峰,波形较稳定,在进样9min左右有一个蛋白峰低硒组明显低于对照组。结论:经HPCE分析能够观察到低硒脑NMPs的变化。

大鼠Sirt1基因原核表达质粒的构建及融合蛋白表达

目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。

白藜芦醇对PC12细胞衰老相关信号的调节作用研究

目的:利用白藜芦醇(Resteratrol,RSV)模拟热量限制研究对PC12细胞衰老相关信号的影响。方法:分别利用5μmol,10μmol,20μmol和50μmol的RSV观察对PC12形态学的影响,利用RT-PCR法观察SirT1,FoxO3a和p27KIP1的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SirT1在RSV10μmol/L组明显升高(p=0.02),p27KIP1在20μmol/L和50μmol/L RSV组明显升高(p<0.001),FoxO3a差别无显著统计学意义(p=0.09)。结论:一定浓度的白藜芦醇能够抑制PC12生长,可能与衰老相关信号的改变有关。

一种改良的脑核基质蛋白的提取方法

目的:探索一种高效的重复性好的提取脑核基质蛋白的方法。方法:选用出生后21天的SD大鼠,处死后,分离大脑皮层。用改良的方法提取NMPs,从形态学和SDS电泳验证提取NMPs的完整性和方法的可重复性。结果:用该方法能有效防止脑组织中脂质的污染,细胞涂片能观察到细胞核内核基质的网状结构,多次重复提取的NMPs经SDS-PAGE分离,蛋白条带基本一致。结论:这种提取核基质蛋白的方法比较可靠,重复性好。

D-半乳糖致亚急性衰老大鼠的海马衰老信号的改变

目的:研究D-半乳糖(D-Galactose,D-gal)对大鼠海马细胞衰老相关信号的影响。方法:取6月龄雄性SD大鼠30只,平均分成两组,每组15只,D-gal组利用进行D-gal连续腹腔注射(120mg/kg.day),对照组注射同体积的PBS共10周。利用Western blot和免疫组织化学观察SirT1和FoxO3a的表达变化。结果:Western blot和免疫组化结果显示,SirT1在D-gal组表达明显降低(分别为p=0.02,p=0.018);FoxO3a的免疫组化检测发现,D-gal组的海马锥体细胞FoxO3a在胞核的分布明显高于对照组(p=0.002);而相对胞浆的分布却显著降低(p=0.005)。结论:短期给予D-gal能够导致大鼠海马衰老信号的改变。

脑核基质蛋白功能的研究进展

脑的核基质 (NM)蛋白参与了神经元的生长分化及大脑特异性蛋白的表达与调节 ,对脑的特异性NM蛋白功能的研究 。

热量限制大鼠血清对培养海马神经元延缓衰老的研究

目的:研究利用热量限制(Calorie restriction,CR)大鼠血清培养海马神经元细胞观察细胞衰老的变化。方法:18月龄SD大鼠进行60%热量限制,对照组不限饮食,喂养6个月后,取血清,取SD新生鼠的海马,进行海马神经元原代培养,加入CR大鼠血清和对照组血清,利用衰老相关的β半乳糖苷酶(Senescence associatedβ-galactosidase,SA-β-GAL)的细胞化学法检测培养6天、12天和20天海马神经元的衰老状况。结果:SA-β-GAL阳性染色在CR组和对照组都随着培养时间延长,阳性表达率明显升高,CR组的SA-β-GAL的阳性表达较对照组明显降低。结论:通过SA-β-GAL检测提示,热量限制大鼠血清对培养的海马神经元有延缓衰老作用。

成年大鼠海马神经元培养衰老细胞的鉴定

目的:鉴定不同年龄大鼠培养海马神经元的衰老细胞鉴定。方法:取6月龄和18月龄雄性SD大鼠海马进行原代海马神经元培养,分别在培养6d、10d和14d利用衰老相关的β半乳糖苷酶(Senescence associated β-gal-actosidase,SA-β-GAL)进行细胞化学染色。结果:18月龄培养10d和14d的海马神经元SA-β-GAL染色较6月龄培养6d的海马神经元明显增多(p<0.001)。结论:老年大鼠海马神经元体外培养进入衰老状态的时间较青年大鼠早。

衰老海马神经元的体外鉴定

目的:鉴定培养的海马神经元衰老状况。方法:利用SD新生鼠进行海马神经元原代培养,分别取培养6、12和20d的神经元进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)的细胞化学染色。结果:随着培养时间的延长,SA-β-GAL阳性率增加(P<0.01)。结论:海马神经元可能随着培养时间的延长而衰老细胞增加。

LASS1基因克隆及其在大鼠脑皮层的表达与神经元衰老的相关性初步研究(英文)

长寿保障基因 LAG1 是从酵母中克隆的与酵母寿命相关的基因,随酵母生命衰老而表达发生变化. 对大鼠中同源基因LASS1 进行克隆、测序和序列分析,发现其 mRNA 序列不同于 GenBank 中的预测序列,开放阅读框包含 1 053 碱基对,编码蛋白由 350 个氨基酸组成,内含 Lag1 蛋白家族保守的 Lag1p motif 和 TLC 结构域. 从新生、1 月龄、6 月龄、12 月龄和 24月龄大鼠脑顶叶皮质提取总 RNA,用半定量 RT-PCR 及 RNA 印迹方法对 LASS1 在大鼠脑皮质中的表达随年龄变化情况进行分析. 结果表明,出生后 LASS1 表达量随年龄增加而增高,至 6 月龄达高峰,然后随年龄增加而逐渐下降,至 24 月老龄鼠达最低. 衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)对鼠脑皮层染色发现,神经元阳性染色随年龄增长明显增加. 大鼠 LASS1 基因表达在正常衰老过程中发生变化,为进一步研究该基因的作用奠定了基础.

64层螺旋CT冠状动脉血管造影应用技术的初探

目的初步探讨64层螺旋CT冠状动脉血管造影技术。方法120例受检者行64层螺旋CT冠状动脉血管成像检查,使用美国GE公司64层螺旋CT,进行回顾性心电门控平扫及增强,原始采集的图像从心动周期的相位窗35%～85%,每间隔5%进行重建,采用平面重建(MPR)、最大密度投影法重建(MIP)、曲面重建(CPR)和容积再现技术(VR)进行图像后处理重建,显示冠状动脉主干及主要分支。结果心率平稳,心率少于80次/分,64层CT对冠状动脉冠节段图像质量可以用于评价,可较准确地显示冠状动脉通畅情况及管壁病变。心率大于90次/分时,冠状动脉的主要分支显示欠规整。结论心率平稳且小于80次/分,合理运用重建时相和三维重建技术,64层CT冠状动脉成像可显示较细节段的冠状动脉,可以比较准确诊断冠状动脉病变,具有较高的临床应用价值。

心率变化对64层CT冠状动脉造影图像质量的影响

目的探讨心率变化对64层CT冠状动脉成像的图像质量的影响。方法100例受检者按心率≤75次/min,75次/min<心率≤115次/min,心率>115次/min分为3组,分别行64层螺旋CT心电门控条件下冠状动脉造影,选择心动周期的相位窗5%～95%,每间隔5%进行相位窗和重建算法重建。3组图像质量均分为能用于冠状动脉评价和不能用于冠状动脉评价2类。结果心率≤75次/min组,有94.8%(835/1104节段)的图像可用于诊断;75次/min<心率≤115次/min组,有62.7%(84/134节段)的图像可用于诊断;心率>115次/min组,有47.2%(42/89节段)的图像可用于诊断。结论适当控制心率,稳定心律,可以明显改善64层冠状动脉冠状动脉的成像质量。

1.5T磁共振STIR序列在外伤性视神经损伤的应用

目的评价1.5T磁共振STIR序列对外伤性视神经损伤诊断的应用价值。方法 2002年3月至2011年12月对69例外伤性视神经损伤患者行1.5T磁共振检查(MRI),磁共振检查序列包括快速自旋回波序列(FSE)T1WI、快速自旋回波序列(FSE)T2WI、脂肪抑制序列短T1反转恢复成像(Short T1 Inversion-Recovery,STIR)等,回顾性分析外伤性视神经损伤的MRI表现。结果 MRI检查在常规(FSE)T1WI序列中显示病灶31例(44.9%),(FSE)T2WI序列中能显示56例(81.2%)外伤性视神经损伤病灶,STIR序列能检出病灶69例(100.0%),病变以STIR序列上表现最明显。结论 MRI能有效显示外伤性视神经损伤的病变部位及范围,其STIR序列可以准确诊断外伤性视神经损伤。

不同月龄大鼠胰岛细胞衰老及胰岛素表达的研究

目的:探讨不同月龄大鼠胰岛细胞衰老的情况及胰岛素的表达。方法:40只大鼠分为4组:新生大鼠组、1个月大鼠组、6个月大鼠组、24个月大鼠组,取大鼠胰腺,行β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色并检测胰岛内p16的表达以反映胰岛细胞衰老,检测胰岛内胰岛素的表达。结果:随年龄增长,胰岛内p16表达增加,分别为:新生组0;1月组0.00267±0.01534;6月组0.05290±0.01787;24月组0.24526±0.03191(P<0.01)。β-Gal染色阳性(阳性率、着色面积、着色深浅程度)增加也与增龄相关,新生组大鼠胰岛β-Gal染色均为阴性,其它各组阳性率1月组为2%,6月组为15%,24月组为100%(P<0.01)。着色面积1月组为0.040,6月组为0.218,24月组为2.118。着色程度1月组为0.04,6月组为0.18,24月组为2.41。结论:随年龄增长,胰岛细胞衰老增加,胰岛素表达减少。

64排CT在外伤性视神经损伤的诊断价值

目的探讨视神经损伤64排CT检查及多平面重建的影像特征及其临床应用价值。方法对187例视神经损伤患者行层厚0.625mm,间距0.625mm的视神经横轴位64排CT扫描,并利用多平面重建技术重建层厚1mm,间距1mm的轴位、准矢状位及冠状位,对视神经损伤的CT表现进行联合分析。结果 64排CT轴位显示视神经损伤125例,准矢状面显示视神经损伤123例,冠状面显示视神经损伤121例。合并眼眶壁骨折169例,视神经管骨折97例,眼外肌损伤157例,眼球破裂87例,异物残留74例,球后积血36例。结论 64排CT检查可清楚的显示视神经损伤的部位及影像特征,进行准矢状位及冠状位重建可提高视神经损伤的检出率,为临床治疗提供可靠的影像学依据。

^1HMRS检测脑桥代谢物浓度研究

目的运用氢质子磁共振波谱(ProtonMagneticResonanceSpectroscopic,1HMRS)检测,探讨健康成人脑桥的代谢物浓度变化规律。方法 80个健康中国成人,年龄21到60岁,分成四组,每组包含20人,男10人,女10人。运用1HMRSPRESS序列进行扫描。结果从21到60岁总的NAA/Cr,NAA/Cr+Cho,Cho/Cr比值分别是2.13±0.07,1.23±0.09,0.81±0.06,和1.81±0.09。脑桥最高代谢物浓度是在41-50岁年龄组。脑桥代谢物浓度和年龄、性别没有相关性。结论健康成人脑桥的NAA/Cr,NAA/Cr+Cho,Cho/Cr比值和年龄、性别没有相关性。

幼儿恶性组织细胞增生症死亡1例

恶性组织细胞增生症(malignant histiocytosis,MH)也称恶性组织细胞病,是原发于单核-巨噬细胞系统的组织细胞恶性肿瘤性增生性疾病,具有全身性,进行性和侵袭性的特征[1].受累器官主要有脾、肝、淋巴结、骨髓、中枢神经系统;此外还可见于胸腺、肺、心、肠、肾和胰腺等.因幼儿恶性组织细胞增生症死亡尸体检验案例国内尚未见报道,作现者报道1例如下.