食淀粉乳杆菌联合芦丁干预PoRV感染后肠道紧密连接蛋白及其相关因子变化

通过益生菌联合多酚共同对抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)感染,利用食淀粉乳杆菌和芦丁干预PoRV感染清洁级中国昆明鼠乳鼠,分为正常对照组(Control组)、病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌预防组(SR组)、芦丁1 mg·kg^(-1)预防组(LR组)、芦丁20 mg·kg^(-1)预防组(HR组)、食淀粉乳杆菌联合1 mg·kg^(-1)芦丁预防组(SLR组),应用实时荧光定量PCR和免疫组化检测Occludin和Claudin-4 mRNA相对表达量及蛋白分布,ELISA定量检测RV、胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β和MMP-9含量。结果表明,RV组病毒含量最高,RV组Occludin mRNA相对表达量显著低于其他组,Claudin-4 mRNA相对表达量显著高于其他预防组,Claudin-4蛋白在肠道组织中分布不均;其他组Claudin-4 mRNA相对表达量均降低,但蛋白分布无改变。RV组胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β和MMP-9含量均高于其他组;SLR组TGF-β含量低于SR组,MMP-9含量低于SR组。说明食淀粉乳杆菌和芦丁通过增加Occludin蛋白表达,抑制Claudin-4蛋白过表达及异常分布,下调胰蛋白酶、PAR-2、TGF-β及MMP-9含量,改善感染PoRV后肠道内相关因子异常分泌,减弱肠道损伤。

食淀粉乳杆菌干预PRV GDNF和GSNO的ZO-1调控

为探究食淀粉乳杆菌在猪轮状病毒(PRV)感染乳鼠空肠组织中GSNO及GDNF对紧密连接蛋白ZO-1的影响,选择2日龄清洁级中国昆明鼠乳鼠作为试验动物,分为5组,正常对照组、轮状病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌组(L.a组)、预防性干预组(BI组)、治疗性干预组(AI组)。空肠组织作为靶器官,分别应用实时荧光定量PCR检测GDNF和ZO-1 mRNA相对表达量,采用比色法检测抗氧化指标(NO、GSH、SOD、MDA、GSH-Px、CAT),通过ELISA定量检测GSNO和5-HT含量,Western blot检测ZO-1、GDNF、GFAP蛋白含量变化,免疫组化检测ZO-1蛋白分布表达变化。结果表明,食淀粉乳杆菌可显著上调ZO-1和GDNF mRNA相对表达量(P<0.05),RV组、BI组和AI组ZO-1和GDNF的mRNA相对表达量变化趋势相似,先升后降。攻毒后各时间点,L.a组5-HT含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组5-HT含量高于对照组,低于BI组和AI组;L.a组GSNO含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组、BI组和AI组GSNO含量整体变化趋势相似,均是先升后降;对于ZO-1、GFAP、GDNF蛋白表达,整体趋势相似,在攻毒后第2、3天表达量较显著,L.a组ZO-1和GFAP蛋白表达量比其他4组高,AI组GDNF蛋白表达量比其他4组高。免疫组化结果表明,L.a组ZO-1蛋白分布比对照组更连续均匀,BI组ZO-1蛋白分布较RV组更连续,AI组与RV组无明显差异。RV组NO含量和MDA含量显著高于其他组(P<0.05),L.a组NO和MDA含量保持不变,BI组和AI组NO和MDA含量高于L.a组,低于RV组;L.a组CAT、SOD、GSH、GSHPx含量均高于其他组,BI组和AI组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量整体变化趋势一致,先降后升,且高于RV组。可知,食淀粉乳杆菌通过上调GDNF和GSNO表达和增强乳鼠空肠抗氧化能力,共同促进ZO-1表达,使其在乳鼠空肠上更均匀连续,显著提高乳鼠空肠细胞屏障强度,干预轮状病毒感染。

食淀粉乳杆菌对猪轮状病毒感染中NSP1及IκB/NF-κB通路mRNA表达的影响

为探究食淀粉乳杆菌对轮状病毒感染中NSP1及NF-κB通路mRNA表达的影响,将食淀粉乳杆菌及其分泌上清分别作用于轮状病毒感染的乳鼠和IPEC-J2细胞,采用荧光定量PCR技术测定各组NSP1和IκB/NF-κB通路的mRNA水平变化。体内与体外试验结果显示,食淀粉乳杆菌及其分泌上清可显著下调NSP1 mRNA的表达(P<0.05)。体外试验中,预防性干预组(BI组)IκB、NF-κB整体趋势相似,与正常对照组相比NF-κB mRNA上调显著(P<0.05),与轮状病毒组(RV组)和治疗性干预组(AI组)相比表达相对平稳,IκB mRNA在第4到6小时上调显著(P<0.05);体内试验中,在乳鼠感染轮状病毒的3 d内BI组NF-κB mRNA显著上调且与RV组和AI组差异显著(P<0.05);第3天时BI组IκB mRNA水平上调高于RV组和AI组且差异显著(P<0.05),RV组和AI组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌及其分泌上清能够有效下调猪轮状病毒NSP1的mRNA表达,在激活IκB/NF-κB通路、提高机体先天性免疫方面具有积极作用,而且预防作用优于治疗作用。