菠萝AcWRKY71-like基因的分离与克隆分析

WRKY转录因子在植物应对胁迫和生长发育过程中都具有重要的调节功能。乙烯诱导菠萝开花为生产常规栽培技术,然而其分子机制尚未揭晓。为了探索菠萝AcWRKY71-like基因的生物学功能,本研究克隆了该基因,并对AcWRKY71-like蛋白进行生物信息学分析,最后检测了AcWRKY71-like基因对外源乙烯的响应特性。结果显示:该基因全长为1 221 bp,开放阅读框(ORF)为909 bp;AcWRKY71-like蛋白属于亲水性蛋白,包含28个磷酸化位点且不包含跨膜结构域和信号肽;而且外源乙烯能够较快并稳定地诱导AcWRKY71-like基因的表达。基于此,我们最终构建了35S::AcWRKY71-like表达载体。本研究为探索菠萝AcWRKY71-like基因的功能以及乙烯诱导菠萝开花分子机制提供了参考依据。

芒果MinSPS1基因的克隆及表达载体的构建

蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase, SPS)既是调控蔗糖合成的关键酶又是限速酶,为了研究其在芒果果实中蔗糖合成的作用机理,本研究从芒果果肉中克隆得到一个与蔗糖合成相关的基因,将其命名为MinSPS1,其cDNA全长序列为3 344 bp,开放阅读框为3 168 bp,编码1 055个氨基酸,蛋白质分子量为118.13 k D,等电点为6.08,对MinSPS1基因编码的蛋白进行系统发育分析,发现其与柑橘具有较近的亲缘关系。采用qRT-PCR对该基因在后熟处理的贵妃芒果肉中的表达量进行分析,结果显示在完熟期贵妃芒果肉中表达量较高,而在青熟期表达量较低。本研究为深入了解芒果蔗糖合成的分子机理,进一步构建了p CAMBIA1301-MiSPS1过表达载体,为MinSPS1的功能鉴定提供理论依据。

菠萝叶刺形成相关基因AcSPL14克隆与载体构建

本研究以菠萝叶片为材料,从中克隆到一个可能与菠萝叶刺形成相关的基因AcSPL14 (Ananas comosus squamosa promoter-binding-like protein 14)。该基因cDNA全长为1 330 bp,开放阅读框为1 086 bp,编码362个氨基酸。结构域分析结果显示AcSPL14蛋白序列具有SPL蛋白家族共有的功能结构域——SBP(SQUAMOSA promoter binding protein-like)结构域,且与石刁柏(Asparagus officinalis)、铁皮石斛(Dendrobium catenatum)、月季(Rosa chinensis)和麻风树(Jatropha curcas)的SBP序列相似性分别为53%、51%、47%和46%。在此基础上,本研究进一步构建了p BI121-AcSPL14过表达载体,获得了工程菌。本研究为AcSPL14在菠萝中的生物学功能鉴定提供了理论依据,对深入研究菠萝叶刺发生的分子机理具有重要意义。