食源性致病菌RPA检测技术研究进展

食源性致病菌是食品安全的重要隐患,开发针对食源性致病菌快速、有效的检测技术迫在眉睫。在诸多食源性致病菌检测手段中,重组酶聚合酶扩增技术(RPA),因具有比传统分子及免疫学检测技术如聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附技术(ELISA)等更快速、灵敏、特异、简便以及实用性强等方面优势,现已在一定程度上得到应用。本文将对RPA技术原理及其衍生技术包括直接重组酶聚合酶扩增技术(Direct-RPA)、重组酶聚合酶扩增侧流层析技术(RPA-LFD)、重组酶聚合酶扩增酶联免疫吸附技术(RPA-ELISA)、实时重组酶聚合酶扩增技术(Real-time RPA)、RPA微流体等技术进行简要综述。

食品中金黄色葡萄球菌PCR-ELISA检测技术建立

针对食品中金黄色葡萄球菌检测,选取金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因作为靶标,利用地高辛标记引物扩增的PCR产物与生物素标记的探针杂交,然后与ELISA平板上的链霉素杂交,通过抗地高辛抗体显色建立PCR-ELISA检测技术。应用该方法检测人工污染牛奶中金黄色葡萄球菌,同时将大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单增李斯特菌等常见食源性致病菌作为阴性对照。结果显示,金黄色葡萄球菌的纯培养物以及人工污染金黄色葡萄球菌牛奶,金黄色葡萄球菌为阳性,其他对照菌为阴性,两者PCR-ELISA检测敏感性均为10-1CFU/m L,比普通PCR检测的敏感性（10-3CFU/m L）高100倍。因此,该研究建立的PCR-ELISA方法具有良好的特异性与敏感性,能够特异、敏感、准确地检测牛奶中的金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄菌的快速鉴定、风险评估与有效监测提供重要技术手段。

植物源性转基因食品PCR衍生技术研究进展

转基因食品尤以植物源性转基因食品的安全性已成为公众关注的焦点。针对植物源性转基因食品甄别与安全性评估,已有多种检测手段得到广泛应用。PCR衍生技术因为具有高特异性、高敏感性等技术优势,为植物源性转基因食品的快速、准确检测提供了有效方法。PCR衍生技术包括多重PCR技术、实时荧光定量PCR技术、多重实时荧光定量PCR技术、多重巢式PCR技术以及多重PCR-DHPLC技术。本文就植物源性转基因食品检测的PCR衍生技术的研究进展作简要综述。

核酸适配体在食源性致病菌检测中应用的研究进展

核酸适配体(aptamer)是经体外筛选可特异性识别并结合靶分子的寡核苷酸片段(单链DNA/RNA序列),具有高特异性、高灵敏度、高亲和力及易于修饰等优点,已在食源性致病菌检测领域得到应用。本文主要对核酸适配体筛选技术分类以及纳米金适配体技术、荧光适配体技术、电化学适配体技术、流式细胞适配体技术和表面增强拉曼适配体技术在食源性致病菌检测中的应用作简要综述。

食源性致病菌PCR检测技术研究进展

食源性致病菌是诱发食品安全问题的重要隐患,在众多食源性致病菌检测技术中,PCR检测技术因具有特异、敏感、简便、快速等优点而得以广泛应用.然而现有的包括多重PCR技术、实时荧光定量PCR技术、多重实时荧光定量PCR技术、IMS-多重实时荧光定量PCR技术、PCR-ELISA技术、EMA/PMA-PCR技术和DPO-PCR技术等在内的食源性致病菌PCR检测技术及其衍生技术仍存在成本高、效率低、质控差等缺陷,未来应向高灵敏度、高特异性、高通量、高重复性、简易、经济方向发展,以适应食源性致病菌对检测技术的要求.

分子筛对丙烷和丙烯的吸附脱附性能

碳氢化合物(HC)捕获器是解决汽车冷启动问题的有效途径,分子筛作为碳氢化合物捕获剂的应用越来越受到重视。以丙烷和丙烯混合气为探针分子,利用瞬态应答(TSR)和程序升温脱附(TPD)技术,对4种类型分子筛的HC吸附脱附能力进行研究。结果表明,β-2分子筛的丙烷和丙烯脱附温度较高,分别为422℃和450℃,吸附量3.24 mL·g^(-1),ZSM-5-3分子筛的丙烷和丙烯脱附温度为130℃和127℃,碳氢化合物吸附量为7.87 mL·g^(-1)。

食源性致病菌分子生物学检测技术研究进展

随着分子生物学的不断进步,对食源性致病菌的检测已经发展到了研究生物大分子的阶段.综观目前出现的一些检测食源性致病菌的新型技术,发现DNA探针技术、PCR技术等检测技术,具有敏感、特异和快速的特点,已经成为食源性致病菌检测的重要工具.未来食源性致病菌的检测将向着高敏感性、高特异性、操作便捷的方向发展,这就依赖于目前已有技术的改进创新、多种检测技术的联合使用及一些新技术和新方法的出现.

胶州湾潮滩整治工程对潮流泥沙影响及冲淤预测分析

潮滩开挖后回淤问题一直是困扰航道建设和港口发展的突出问题,为探究胶州湾北部海湾整治工程在不同开挖方案下潮流场分布情况,通过对胶州湾北部海域进行潮流数值模拟,基于二维平面不可压缩雷诺平均纳维埃-斯托克斯(Navier-Stokes)浅水方程,对比分析两种潮滩开挖方案对航道水动力条件及冲淤变形影响。研究结果表明,工程疏浚后,开挖区及附近海域涨潮流作用明显增强,落潮流深槽流速降低,产生进水加速、出水缓慢的效应,方案二涨潮流作用增强而落潮流减小效应大于方案一。工程完成以后,开挖区有所淤积,方案一潮滩开挖区年平均淤强约15.6 cm/a,方案二约为19.0 cm/a,淤积强度由深水区向浅水区逐渐增加,工程疏浚产生的涨潮流增强、落潮流减弱的效应将使淤积加速。

苯丙氨酸羟化酶基因突变家系PCR-SSCP分析

目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)检测方法对确定苯丙酮尿症(PKU)患者基因突变来源的应用价值,以便更好地应用于PKU基因诊断和产前诊断。方法对15例确诊的经典型PKU患者及其双亲的PAH基因的第3、5、6、7和11外显子及部分内含子行PCR扩增和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析;无PKU家族史的正常人作为正常对照。PCR-SSCP检测出异常外显子行PCR正、反向测序确定突变类型并分析患者的基因突变来源。结果5例患者的30个等位基因共检出16个突变,共14个突变等位基因来源均得到确定,1例患者(基因型为G247V/R243X)的突变来源未能确定。结论(1)PCR-SSCP检测方法可以确定PKU患者的基因突变来源(包括纯合突变和杂合突变),但对于2个基因突变位于同一外显子的杂合子患者,该方法不能很好地确定基因突变来源。(2)PCR-SSCP方法能够区分基因突变纯合子与基因突变杂合子。

胶南市小型水库除险加固工程建设管理实践

胶南市地处低山丘陵区,现有小型水库179座。由于建成时间早,建设标准低,加之老化失修严重,险情几乎年年发生,为彻底根除隐患,胶南市采取政府投入为主、社会化融资为辅、受益单位和群众投资投劳相结合的多渠道资金投入机制,创新施工模式,建立水库安全运行长效机制,既有效解决了工程建设资金不足和重建轻管问题,又使除险加固后的小型水库发挥了巨大的经济效益和社会效益。

胶南市洪水资源化的实践与探讨

视洪水为宝贵资源,科学迎汛防洪,通过工程、调度、综合规划、水土保持等措施,在实现防洪安全的前提下,确保以水资源的可持续利用支持国民经济的可持续健康发展。

食源性致病菌多重PCR检测技术建立及其应用

针对6种食源性致病菌特异性基因(金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌tdh基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、阪崎克罗诺杆菌ompA基因、鼠伤寒沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157:H7 rfbE基因)建立了多重PCR检测技术,分析了其特异性和敏感性,并评估了其在人工染菌牛奶中的应用可行性。结果表明:该检测技术可扩增预期的345 bp、307 bp、269 bp、237 bp、188 bp和142 bp细菌特异性PCR产物,无非特异性扩增,且不与非靶细菌产生交叉反应;对细菌纯培养物基因组DNA的检测限为10 pg,对人工染菌牛奶样品中致病菌的检测限为10^(3) CFU/mL,可实现6种食源性致病菌特异性强、灵敏度高、简便高效的同时检测。

青岛市环胶州湾各河流输沙特征分析

通过对青岛市环胶州湾各河流上的水文站历年含沙量、输沙量资料分析计算,推求出各河流的入海输沙量,并对输沙特征进行分析评价,最后得出以下以下结论:(1)从空间分布来看,胶州湾河流输沙主要来自胶州湾西北部和东北部。(2)河流属中沙河流。河道上游多年平均含沙量和输沙模数均大于河道中下游。(3)输沙量年际变化较大,最大年输沙量是最小年输沙量的518.7倍,且年降水量较大时,年入海水量也较大,年输沙量也较大。(4)河流悬移质颗粒特征为河流从源头到河口,泥沙粒径是不断减小。

噬菌体裂解酶在食品安全领域的研究进展

食源性疾病引发的食品安全问题可对人类健康造成严重危害,其中微生物致病菌是引起食源性疾病的最主要因素,近年来国内外由微生物致病菌引起的食品安全事件频发,受到世界各国的高度关注。食品工业中传统防治食源性致病微生物的方法虽可保证微生物方面的安全,但是存在化学防腐剂具有副作用、天然防腐剂抗微生物活性较弱以及大规模抗生素使用带来耐药性等问题,使寻求新的杀菌技术迫在眉睫。噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体复制后期表达,能够裂解细菌细胞壁释放子代噬菌体的一种蛋白水解酶。随着近些年针对噬菌体及其产物展开的研究不断深入,噬菌体裂解酶凭借高度特异性、不影响正常菌群等特性,从治疗人类耐药感染发展到应用于控制污水处理、水产养殖、动物饲料等多个领域中的细菌污染,成为了包括食品安全在内多种应用中有效的抗微生物制剂。

深层搅拌桩在土坝坝体防渗中的应用

深层搅拌桩(以下简称搅拌桩),目前普遍应用于建筑工程中的基坑开挖及挡土墙的施工、水利工程中的土坝坝体防渗,它的防渗效果及工艺方法已日益为建筑界所接受、认可。笔者结合施工经验,详细介绍了深层搅拌桩在土坝坝体防渗的施工工艺流程,分析了施工效果,为类似土坝坝体防渗方案提供了参考。

孙家屯水库渔业综合养殖技术

孙家屯水库总库容1 025万立方米,兴利库容691万立方米,宜渔水面80～100hm2,自2004年以来,通过调整渔业养殖结构、加强渔政治安管理力度、科学施肥等一系列措施,渔业产量稳步上升,年均渔业纯收入在29万元左右,取得了较好的经济效益。2008年鲢、鳙产量68t,团头鲂、鲤、鲫、青鱼、草鱼产量17.5t,实现渔业纯收入32万元。总结了5年来水库渔业综合养殖技术,为水库渔业的可持续发展提供参考。

乳腺癌组织中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6、Ki67表达的相关分析及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67的表达与年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的关系以及它们相互之间的线性关系,同时分析其在乳腺癌的发生、发展中所表现出的临床作用和意义。方法:采用免疫组化S-P法检测103例乳腺癌标本中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果:103例患者中ER阳性的有57例(55.34%),PR阳性的有49例(47.57%),C-erbB-2阳性的有39例(37.86%),CD44V6阳性的有68例(66.02%),Ki67阳性的有例(90.29%),其中以Ki67的表达率最高,C-erbB-2的表达率最低;不同年龄、淋巴结是否转移对ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67表达量的差异,无统计学意义(P>0.05);PR的表达与乳腺癌临床分期相关(P<0.05),临床分期越高,PR的表达量越低;C-erbB-2的表达与肿瘤大小相关(P<0.05),肿瘤组织越小,C-erbB-2的表达量越低;ER的表达量和CD44V6的表达量的差异,有统计学意义(P<0.05)。结论:在乳腺癌发病率越来越高的中国以至世界,免疫组化检测ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67的阴阳性表达,可以作为乳腺癌发生、发展的评价指标,联合检测更加有助于早期乳腺癌患者的临床治疗和预后判断,减轻乳腺癌患者的身体和心理的痛苦,为临床医生选择和评估乳腺癌患者的治疗方案提供一些参考,更为下一步的个体化治疗和基因治疗做了一些前序工作。

苯丙氨酸羟化酶基因突变及其与表型的关系研究进展

苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种可以造成儿童不同程度智力损害的常见的先天代谢性疾病,属于常染色体隐性遗传,OMIM编号为261600。PKU是由苯丙氨酸羟化酶(Phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变导致的肝脏PAH酶活性降低或丧失所致,1934年由Folling首先报道了此病。1983年该基因被定位在12q22-24.2。近些年,随着分子遗传学及生物学等科学的发展,对PKU研究也在不断深入。目前在国际PAH数据库(http//www.pahdb.mcgill.ca)中总共收录546种突变等位基因,659种基因型。PKU表型与基因突变类型有关,但是有些带有相同pah基因突变的不同PKU患者存在表型差异。全面了解pah基因结构、pah基因表达特点、酶结构和功能以及基因突变对酶结构和功能的影响的分子机制是对PKU表型认识的基础。本文根据近年来的研究成果,对pah基因结构,PAH酶结构,基因突变及其与表型的关系等进行详细阐述。

荧光定量PCR检测稽留流产患者沙眼衣原体和解脲支原体结果分析

目的探讨沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)感染与孕妇稽留流产的相关性,以及荧光定量PCR在稽留流产病因检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR检测稽留流产患者宫颈分泌物标本中的CT-DNA和UU-DNA的含量。结果 138例稽留流产患者中72例感染CT或UU,总检出率53.62%,其中CT阳性率21.74%,UU阳性率42.03%,混合感染10.14%。与正常人群对照差异均有统计学意义(P<0.05)。结论泌尿生殖系统CT和UU的感染与稽留流产有密切相关性,荧光定量PCR对稽留流产患者CT和UU的检测简单、快速、准确。