不同新型冠状病毒核酸检测试剂的临床性能评价

目的评价同一厂家新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测扩增时间长的试剂(试剂A)与扩增时间短的试剂(试剂B)的临床性能,分析试剂更换的可行性。方法用2019-nCoV阴性混合样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17300 copies/mL)梯度稀释成1730、865、567.7、432.5、216.3、108.2 copies/mL 6个浓度,在连续3 d内每个浓度每天做7~8个复孔,共计23个复孔,进行磁珠法提取核酸和实时荧光RT-PCR扩增,以评价试剂A和B的分析灵敏度。用试剂A和B分别检测来自华中科技大学同济医学院附属协和医院2020年2月9日发热门诊的130例患者咽拭子样本核酸,进行临床检测性能评价,并将其中5例2019-nCoV强阳性核酸连续10倍梯度稀释作2种试剂的相对灵敏度评价。结果试剂A和B检测1730、865、567.7、432.5、216.3和108.2 copies/mL的质控品稀释液中ORF1ab基因的阳性率分别为100%和100%、95.65%和82.61%、95.65%和78.26%、91.30%和78.26%、65.22%和43.48%、34.78%和17.39%;试剂A和B的最低检测限分别为615.9(95%CI:446.0~1098.5)copies/mL和1249.1(95%CI:863.4~2378.8)copies/mL。5例2019-nCoV强阳性的临床样本核酸在1∶10和1∶100稀释时,试剂A和B对ORF1ab和N基因检出率均为100%;而1∶1000稀释时,对于ORF1ab和N基因,试剂A的检出率均为100%,试剂B的检出率分别为73.3%和80.0%。130例咽拭子样本中,试剂A 2019-nCoV RNA检测阳性率为43.85%,试剂B为33.08%,差异有统计学意义(P<0.05);2种试剂的检测结果一致性较好(kappa=0.7753),阳性符合率为75.44%(43/57),阴性符合率为100%(73/73),阳性预测值为100%(43/43),阴性预测值为83.91%(73/87),总符合率为89.23%(116/130)。结论2种2019-nCoV核酸检测试剂的临床性能之间存在差异。为保证2019-nCoV核酸的检测质量,不宜将该厂家扩增时间长的试剂更换为扩增时间短的试剂。

6种不同实时荧光定量PCR仪对新型冠状病毒核酸检测性能的影响探讨

目的:探讨6种不同型号的实时荧光定量PCR仪(分别为CFX96 DeepWell、GENTIER 96E、Cobas z480、LightCycler 480Ⅱ、ABI 7500、QuantStudio 5,依次标为A、B、C、D、E、F)对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测性能的影响,以便选择分析性能佳的检测系统用于临床检测。方法:应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(假病毒)先10倍稀释接着2.5倍梯度稀释至1∶10、1∶25、1∶62.5、1∶156.25、1∶390.63、1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52八个不同浓度,连续3 d内每天每个浓度做5个复孔,共计15个复孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价其检出限;将1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本,连续5 d内每天每个浓度做5个复孔,共计25孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价靶基因循环阈值(Ct)的重复性和实验室内精密度。结果:(1)6种实时荧光定量PCR仪对1∶10、1∶25和1∶62.5三个稀释度的质控品样本中ORF1ab和N基因的检出率均为100.0%;而对1∶156.25稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为100.0%和100.0%,B为66.7%和86.7%,C为100.0%和100.0%,D为93.3%和93.3%,E为93.3%和93.3%,F为100.0%和100.0%;对1∶390.63稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为60.0%和86.7%,B为60.0%和80.0%,C为66.7%和73.3%,D为73.3%和93.3%,E为66.7%和53.3%,F为73.3%和93.3%;1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52三个稀释度的质控品样本中靶基因的检出率分别为4.00%~60.00%、6.67%~20.00%和0~20.00%。(2)6种不同实时荧光定量PCR仪对1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本中Ct的重复性和实验室内不精密度均<5.00%。结论:不同的实时荧光定量PCR仪对2019-nCoV核酸检测性能存在影响,该2019-nCoV扩增试剂在仪器C、F上的分析灵敏度优于另外4种实时荧光定量PCR仪。

临床用血服务质量安全管理标准研究

本研究针对临床用血服务中输血管理、输血前、输血中、输血后的质量安全问题,制定相应的约束标准。应用文献分析、输血不良事件分析、制度标准解读等方法梳理国内外临床用血服务中的质量安全问题,按问题的普遍性、高发性、关键性、影响度4个方面筛选出问题要素内容。搭建了以临床用血服务流程为主线,以事项要素为节点的标准框架,形成了包括4个环节、20个关键要素的临床用血服务标准文本。

《临床分子生物学检验》课程教学探讨

华中科技大学同济医学院医学检验系成立于2004年,培养目标为"基于岗位胜任力培养高层次、宽口径的4年制创新型卓越医学检验人才",强调学生的理论素养与临床综合技能并重,使其未来能从事医学检验和实验室诊断工作,为临床提供高水平服务;培养学生的终身自主学习能力和科研发展潜能,使其未来能在学科理论和新技术发展方面有所建树。

两款荧光定量PCR仪检测HLA-B27基因结果比对分析

目的:探讨试剂与仪器匹配因素对PCR荧光法检测HLA-B27等位基因的影响。方法:首先采用自建荧光定量PCR法对85例样本中HLA-B27等位基因进行检测,随后采用商品化试剂盒PCR荧光法同时在两款荧光定量PCR仪Stratagene Mx3000P~?和Roche cobas~? Z480上对HLA-B27进行再次检测。结果:商品化试剂盒方法在cobas~? Z480上检出HLA-B27等位基因的结果为65例阳性、20例阴性,与自建方法所检出的结果完全一致;而其在Mx3000P~?上检出的结果为30例阳性、55例阴性,与自建方法的检测结果之间存在显著性差异(χ~2=33.03,P<0.005)。该商品化试剂盒方法在Mx3000P~?上的漏检率为53.85%。结论:该商品化试剂与Mx3000P~?荧光PCR仪的匹配性不佳,严重影响了检测结果的准确性。在临床实际工作中,评价PCR试剂的检测性能需要结合仪器,综合考虑以保证检测结果的准确性。

4种全自动核酸提取系统对新型冠状病毒假病毒提取效果的比较

目的:应用4种全自动核酸提取仪及其配套试剂提取新型冠状病毒(2019-nCoV)假病毒核酸,并用同1种商品化RT-PCR扩增试剂盒进行检测,探讨检测结果的差异以评估其提取效果,有助于选择合适的核酸提取平台。方法:将2019-nCoV假病毒连续梯度稀释成不同浓度,用4种不同厂家的核酸提取系统(包括全自动核酸提取仪及其配套提取试剂)A、B、C和D提取核酸,再用同1种2019-nCoV核酸检测试剂盒进行检测,比较其检出率和循环阈值(Ct)的差异。结果:在2019-nCoV假病毒原浓度、1:5、1:10和1:100稀释度时,A、B和D提取的核酸中均能100%检测到ORF1ab和N基因,进一步分析发现这3种平台提取的核酸中检测所得的ORF1ab(F=0.061,P=0.941)和N基因(F=0.038,P=0.963) Ct值差异均无统计学意义;但C在2019-nCoV假病毒1:100稀释时所提取的核酸中ORF1ab和N基因的阳性检出率分别为95%和80%。结论:平台C与其他3种平台A、B、D的核酸提取效果间存在差异。核酸提取平台的不同可能影响2019-nCoV核酸检测的灵敏度,并且可能对病毒载量低的样本产生假阴性结果。

不同商品化试剂对临床血清样本HBV DNA定量检测结果的影响

目的:评价不同商品化试剂定量检测临床血清样本乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)性能的差异。方法:(1)应用5种商品化HBV DNA定量试剂(2种进口试剂A和B,3种国产试剂C、D和E)分别对6例混合血清样本进行检测,并对结果进行比较;3种国产试剂对6例混合血清样本以及103和106两个水平的HBV DNA国家标准物质GBW(E)090137和GBW(E)090139分3个批次检测,分析其精密度和正确度。(2)采用3种国产试剂定量检测43例慢性乙型肝炎患者血清样本HBV DNA,并分析其相关性和一致性。结果:(1)定量检测6例混合血清样本中HBV DNA,试剂B、C与A的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05),而试剂D、E的检测结果均显著低于试剂A(P<0.05)。(2)定量检测6例混合血清样本以及103和106两个水平的HBV DNA国家标准物质,3种国产试剂的CV均小于5%,国家标准物质的实际检测值与靶值的差值绝对值均小于0.4 log10 IU/mL,精密度和正确度满足行业标准。(3)对于43例临床血清样本,试剂C、D和E的阳性检出率分别为95.35%(41/43)、95.35%(41/43)、86.05%(37/43);对于检测结果均在3种试剂定量范围内的24例临床血清样本,HBV DNA定量检测结果为C>D>E(P<0.05),3种试剂的检测结果两两间均呈线性相关(C vs D:R^(2)=0.93,Y=0.973X-0.164;C vs E:R2=0.61,Y=0.770X+0.210;D vs E:R2=0.69,Y=0.809X+0.270),试剂C和D、C和E、D和E的Bland-Altman分析发现其检测结果差值平均值分别为0.28、0.80和0.51 log10 IU/mL,相应的95%一致性界限分别为(-0.30,0.86)、(-0.62,2.21)、(-0.74,1.77),相应的95%一致性界限以内的点分别占95.83%(23/24)、95.83%(23/24)和91.67%(22/24),其一致性界限范围内检测值的最大差异分别为0.85、1.96和1.25 log10IU/mL。试剂C和D、C和E、D和E的检测结果差值>1.0 log10 IU/mL的血清样本分别占0(0/24)、33.33%(8/24)和25.00%(6/24)。结论:满足行业标准的不同商品化国产试剂定量检测临床血清样本HBV DNA的性能存在显著差异,在常规临床实践中互换用于临床决策时务必慎重。

不同实时荧光定量PCR仪对外周血中EB病毒DNA检测结果的影响

目的:应用同一种商品化EB病毒核酸定量检测试剂盒在2款实时荧光定量PCR仪同时检测外周血标本中EB病毒载量,探讨不同类型的实时荧光PCR仪对EBV DNA定性和定量检测结果的影响。方法:提取179例外周血标本(包括102例全血和77例血浆)的DNA后,应用EB病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)分别在2款实时荧光PCR仪Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ上同时检测EBV DNA,定性结果采用配对χ^(2)检验和Kappa一致性检验,定量结果采用配对t检验、Spearman相关分析和线性回归分析以及Bland-Altman图分析。结果:(1)应用Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ检测179例血标本中EBV DNA的阳性检出率分别为49.72%(89/179)、48.60%(87/179),Kappa值为0.955 3,一致性较好;两者的阳性符合率为98.85%、阴性符合率为96.74%,总符合率为97.77%。(2)在定量范围内的56例EBV阳性血样本,Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ的检测值分别为3.943±0.913、3.726±0.980 log_(10)copies/mL,差异有统计学意义(P<0.05);进一步进行Spearman相关性以及线性回归分析,相关系数r=0.962 6,回归方程为Y=1.065 6X-0.475 4(r^(2)=0.985 3);2款实时荧光PCR仪检测的差值平均值为0.216 log_(10)copies/mL,差值标准差为0.133 log_(10)copies/mL,95%一致性界限为(-0.045,0.478) log_(10)copies/mL,96.43%(54/56)的点在95%一致性界限以内,界外点数为2(3.57%)。结论:2款实时荧光定量PCR仪Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ检测外周血样本中EBV DNA,结果具有可比性,但Cobas z480上的检测结果平均比LightCycler 480Ⅱ上的高,可能是由于2款PCR仪所使用的光源和滤光片组合不同所致。

基于PANA 9600E全自动核酸工作站的超敏HBV DNA定量检测性能评价

目的:对全自动核酸工作站PANA 9600E的超敏HBV DNA定量检测性能进行评价,评估其是否满足临床应用要求。方法:参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)和中国合格评定国家认可委员会(CNAS)等相关文件,采用天隆PANA 9600E全自动核酸工作站及其配套HBV DNA超敏定量检测试剂和GENTIER 96E实时荧光定量PCR仪,应用HBV DNA血清标准物质、临床混合血清样本和乙型肝炎病毒核酸国家标准品,对该检测系统的正确度、精密度、线性范围、定量限、检出限、防交叉污染、抗干扰能力等性能进行评价;同时与NP968-C半自动系统检测56例临床血清样本进行方法学比对。结果:①PANA 9600E系统检测HBV DNA血清标准物3个浓度4.60×10^(6)、1.41×10^(3)和2.00×10^(2)IU/mL的均值与靶值的差值绝对值均小于0.40log_(10)IU/mL,正确度满足行业标准;检测2.0×10^(2)、2.0×10^(3)、2.0×10^(4)和2.0×10^(6)IU/mL 4个浓度的临床混合血清样本,重复性精密度CV分别为3.93%、1.50%、0.89%和0.54%,中间精密度CV分别为5.00%、1.95%、1.36%和1.35%,精密度验证通过;②PANA 9600E系统在3.0×10^(1)IU/mL~3.0×10^(8)IU/mL内呈线性,线性回归方程为Y=1.0285X-0.0758,R^(2)=0.9994;定量限为30IU/mL,检出限为10IU/mL;防交叉污染验证通过,阴性样本检测结果均为阴性;当胆红素≤512μmol/L、血红蛋白≤100mg/mL、甘油三酯≤18mmol/L时对该系统的检测结果无明显影响,抗干扰能力验证通过;③对于56例临床血清样本,PANA 9600E和NP968-C系统检出的阳性率分别为60.71%(34/56)和57.14%(32/56),差异无统计学意义(P>0.05),Kappa值为0.8526(95%CI:0.7139~0.9914),一致性较好;对于定量范围内的19例临床血清样本,PANA 9600E和NP968-C系统的检测值分别为3.954±1.850、3.828±1.916log_(10)IU/mL,差异有统计学意义(P<0.05);进一步进行Pearson相关和Bland-Altman图分析,回归方程为Y=1.0309X-0.2495,R^(2)=0.9905;2种方法检测结果差值为(0.1258±0.1953)log_(10)IU/mL,95%一致性界限为-0.2569~0.5085log_(10)IU/mL,94.74%(18/19)的点在95%一致性界限以内,界外点数为1(5.26%)。结论:基于PANA 9600E全自动核酸工作站的超敏HBV DNA定量检测系统的正确度、精密度、线性范围、定量限、检出限、抗交叉污染、抗干扰能力等性能良好;定量限为30IU/mL,检出限为10IU/mL,达到超敏检测的要求;与现用的NP968-C半自动系统的检测结果具有可比性,相关性和一致性好,可满足临床应用要求。

HBV DNA超敏定量检测试剂盒的性能验证

目的:验证天隆HBV DNA超敏定量检测试剂盒在cobas?Z480全自动荧光定量PCR分析仪上的检测性能,以评估其是否满足临床应用要求。方法:参考CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》和CNAS-CL02-A009《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》等相关文件,应用临床血清样本和HBV DNA国家标准物质以及WHO国际标准物质,对精密度、正确度、线性范围、定量限、检出限、抗干扰能力、交叉污染、试剂批间差异、核酸室温放置时间等性能进行验证。结果:该系统检测102、103、106 IU/mL混合血清样本的重复性精密度分别为2.60%、2.43%、0.91%,中间精密度分别为4.41%、3.36%、2.48%;HBV DNA国家标准物质GBW(E)090586(200 IU/mL)、GBW(E)090137(1.41×10^(3) IU/mL)和GBW(E)090139(4.60×10^(6) IU/mL)的实测值与靶值差异均在±0.4 Log10IU/mL范围内;该系统在2.32×10^(1)~2.32×10^(9)IU/mL范围内呈线性(线性回归方程为Y=0.993 2X+0.161 2,R2=0.998 9);该系统的定量限为30 IU/mL,检出限为10 IU/mL;干扰物质总胆红素(Tb)浓度≤512μmol/L、血红蛋白(Hb)浓度≤10 g/L、甘油三酯(TG)浓度≤18 mmol/L时,均对检测结果没有明显影响(偏倚<±7.5%);交叉防污染实验中阳性标本检出率为100%,阴性标本检出率为0,全部阴性样本未受污染;不同批次试剂间检测结果差异符合要求(偏倚<±7.5%);磁珠法提取的核酸室温放置2 h,再进行加样扩增,对检测结果没有明显影响(偏倚<±7.5%)。结论:天隆HBV DNA超敏定量检测试剂盒在全自动荧光定量PCR仪cobas?Z480上的检测性能基本符合临床应用要求。

4种新型冠状病毒核酸检测试剂的分析性能评价

目的评估A、B、C、D 4种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的分析性能,以便选择性能佳、性价比高的试剂用于临床检测。方法①将国家卫生健康委临床检验中心和湖北省临床检验中心2021年2019-nCoV(含变异株)核酸检测室间质量评价样本36例(27例阳性和9例阴性),磁珠法提取核酸后分别应用4种试剂扩增以评价其符合率;②应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17300 copies/mL)稀释12倍到1441.7 copies/mL,连续5 d每天做5个复孔,共计25孔,磁珠法提取核酸后分别应用4种试剂扩增以评价其重复性和实验室内精密度;③应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将2019-nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17300 copies/mL)梯度稀释成567.7、216.3和108.2 copies/mL 3种浓度,连续3 d每种浓度每天做7~8个复孔,共计23个复孔,磁珠法提取核酸后分别应用4种试剂扩增以评价其分析灵敏度。结果①对36例2019-nCoV核酸检测室间质量评价(EQA)样本,试剂A、B和D的符合率均为100%(36/36),试剂C的符合率为97.2%(35/36),但试剂A、B和C分别有2、6和10个样本需要复查后才能判定结果。②4种试剂检测1441.7 copies/mL 2019-nCoV RNA质控品稀释液的靶基因循环阈值(Ct)重复性和实验室内精密度均小于5%。③4种试剂A、B、C、D对576.7 copies/mL 2019-nCoV RNA质控品稀释液的检出率分别为95.7%、34.8%、8.7%和100%,对216.3 copies/mL稀释液的检出率则分别为95.7%、13.0%、17.4%和91.3%,A和D的分析灵敏度明显优于B和C。结论4种新型冠状病毒核酸检测试剂的分析性能存在差异,D最优,A次之,明显优于B和C。

1种检测下呼吸道标本中念珠菌核酸试剂的性能评价

目的:评估1种应用实时荧光PCR法检测念珠菌(包括白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌)核酸试剂的性能是否满足临床应用要求。方法:(1)应用含白色念珠菌10^(6)和10^(8)CFU/mL 2种浓度水平的临床混合下呼吸道样本,按照EP15-A3文件5×5精密度设计方案,5 d内每天每种浓度做5个复孔,共计25孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其重复性和实验室内精密度;(2)应用白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌3种念珠菌标准株及大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株菌液,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其特异性;(3)将白色念珠菌标准株用生理盐水10倍梯度稀释为1×10^(5)、1×10^(4)、1×10^(3)和1×10^(2)CFU/mL,5 d内每天每种浓度4个复孔,共计20个复孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其检出限;(4)收集101例来自呼吸系统疾病患者的下呼吸道标本,提取核酸后应用该试剂扩增检测,并与真菌培养法的结果进行比较,以评价其符合率。结果:(1)该试剂检测含白色念珠菌10^(8)CFU/mL和10^(6)CFU/mL的临床混合样本的重复性精密度分别为2.18%和1.32%,实验室内精密度分别为2.18%和1.36%;(2)该试剂检测白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌标准株的结果均为阳性,检测大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株的结果均为阴性,无交叉反应;(3)该试剂检测1×10^(5)、1×10^(4)、1×10^(3)和1×10^(2)CFU/mL的白色念珠菌标准株的检出率分别100.00%(20/20)、100.00%(20/20)、65.00%(13/20)和25.00%(5/20),检出限为5.8×10^(3)(95%CI 2.3×10^(3)~4.3×10^(4))CFU/mL;(4)101例下呼吸道标本,该试剂检出的阳性率为79.21%(80/101),真菌培养法的阳性率为58.42%(59/101),2者间差异有统计学意义(P<0.05);2种方法检测结果一致性中等(Κappa=0.5388),阳性符合率为100.00%(59/59),阴性符合率为50.00%(21/42)。结论:该试剂的精密度高、特异性好,与真菌培养的一致性中等,能基本满足临床应用要求。

妊娠期新冠患者的临床表现及其新生儿健康状况

2019年末,新型冠状病毒肺炎在全球开始蔓延,严重威胁孕产妇和新生儿生命安全,但目前对这类特殊人群的临床报道和研究还比较少.本文回顾性研究分析了武汉地区2020年1月21日~2月9日收治的五位新冠肺炎孕妇及其新生儿的临床表现和CT、血常规、病毒核酸等检查结果.结果显示,与普通新冠肺炎患者临床表现类似,患者均出现了发热、咳嗽、肺部CT磨玻璃状等新冠肺炎典型特征.在发病初期,患者均出现了淋巴细胞与嗜酸性粒细胞计数显著降低这一现象.五位患者均在住院期间通过顺产或剖腹产安全分娩,且新生儿在出生后10~33 d,核酸检测结果均为阴性.根据患者及其新生儿的临床表现与核酸检验结果,在这五例病例中未观察到新冠病毒的母婴垂直传播.此外,淋巴细胞减少、嗜酸性粒细胞减少,以及C反应蛋白升高这三项临床检验指标的变化特征,有可能帮助新冠肺炎孕产妇的早期诊断与筛查.