RT-PCR定量检测汉坦病毒RNA及在临床诊断中的价值

目的 建立敏感特异的检测肾综合征出血热（HFRS）病人血清中汉坦病毒RNA的定量RT-PCR方法。探讨HFRS患者血清中病毒RNA持续时间，水平及其病情严重程度的关系。方法应用套式RT-PCR扩增引物，自行设计和制备标准品获得标准曲线，使用实时荧光定量PCR技术检测了HFRS（SEO型）血清中的汉坦病毒的载量。结果14例HFRS病人血清中，SEO RNA阳性11例，SEO型病人的病毒载量一般可达10^2～10^4 copies／ml。其中2例发病第8天，2例第9天的病人血清PCR结果仍为阳性。结论：我们采用的实时荧光定量PCR方法可很好的反映HFRS病人血清中汉坦病毒RNA含量。HFRS病人病毒血症持续时间可超过1周，血清中RNA水平与病情严重程度有关。

手足口病545例临床研究

手足口病是由病毒引起的一种急性传染病。以发热、口腔炎及手、足部疱疹为临床表现。我院2008年5-9月共收治手足口病545例。现报道如下：

新流行期汉城型汉坦病毒全S及部分L与M基因核苷酸序列测定及研究

目的 :为获得 SEO型病毒基因组更为详尽的资料 ,也为局部爆发的原因提供科学的资料。方法 :病毒分离、Mc Abs分型 RT- PCR扩增及核苷酸序列测定。结果 :首次测出我国 SEO型病毒较为完整的全 S片段及部分 L 片段和 M片段并与 76 - 118、Seoul、SR1 1 (在全 S片段 ) ;76 - 118、C4、L99、Seoul(在 L 片段 ) ;10 A、A9、C1 - 1 、JB3、L99、SD2 2 7、SD70 、SEO(M片段 )株核苷酸同源性进行比较 ,分别为 6 4.2 %、 91.89%、 96 .8%及 70 .8%、 72 .0 %、 95 .3%、 95 .9%及 97.3%、6 3.0 %、 6 6 .0 %、 93.0 %、 94.3%、 96 .3%、 97.3%、 94.7推导出的氨基酸同源性分别为 :80 .5 %、 95 .4%、 97.36 %及 75 .6 %、75 .1%、 97.7%、 97.36 %及 96 .0 %、 78.8%、 79.8%、 94.9%、 98.0 %、 97.0 %、 98.0、 97.0 %。结论 :1不存在病毒基因组间的重排 ,即基因重排不是造成此次 HFRS流行的原因。 2 SEO型病毒表现出明显的地理聚集现象。

SEO型汉坦病毒全NP蛋白及NP蛋白型特异区编码基因的克隆、表达

目的 :开发简单、可靠的 HTN、SEO型汉坦病毒血清学分型检测方法。方法 :应用 RT- PCR法对全 NP蛋白基因及其型特异区基因进行扩增 ,经 TA克隆及 Cui- SS、Cui- 15 5杆状病毒载体的构件、转获重组杆状病毒 ,再感染 Sf9细胞进行表达。结果 :克隆与表达了 SEO病毒 NP蛋白的全蛋白编码区及型特异编码区 (15 5到 4 2 9氨基酸处的编码基因 ) ,全 NP蛋白表达产物与病毒株感染 Vero E6细胞的反应谱完全一致 ,型特异区表达产物与相应的型特异 Mc Ab结合。结论 :建立了 SEO型病毒全 NP蛋白及 NP蛋白型特异区编码基因的克隆和表达方法 ,为开发简便、可靠的

我国SEO型汉坦病毒全S基因核苷酸序列测定

为获得SEO型病毒基因组更为详尽的资料 ,也为局部暴发的原因提供科学的资料 ,我们采用病毒分离、McAbs分型 .RT PCR扩增及核苷酸序列测定的方法 ,在国内首次测出我国SEO型病毒较为完整的全S片段 ,并与 76 118、Seoul、SRll株的核苷酸及氨基酸同源性进行比较 ,分别为 :6 4.2 %、91.8%、96 .8%及 80 .5 %、95 .4%、97.3%。表明病毒基因组间的重排不是造成发病高峰的原因。

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序列测定

为明确保定肾综合征出血热 (HFRS)疫区的型别 ,采用RT PCR方法 ,检测急性期HFRS病人血清的汉坦病毒(HV)RNA ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定 ,并与国内外HV的代表株进行比较。结果 31份急性期病人血清经RT PCR分型 ,2 4份为汉城型 (SEO型 ) ,2份为汉滩型 (HTN型 ) ,并测得SEO型C3株M基因 (位于 1985— 2 314位 ) ,HTN型LBY株M基因 (位于 1996— 2 314位 )核苷酸序列与国内外代表株的核苷酸和氨基酸序列相比较 :C3与 76 118、A9、LBY核苷酸同源性分别为 :6 8 79%、6 7 5 8%、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :77 2 7%、77 2 7%、78 3%。C3与Seoul、R2 2相比 ,核苷酸同源性分别为 :95 15 %、93 94% ;氨基酸均为 97 2 7%。LBY与 76 118、A9、Seoul、R2 2核苷酸同源性分别为 :98 75 %、87 15 %、6 8 34 %、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :10 0 %、96 2 3%、78 3%、78 3%。首次发现与韩国 76 118株同型(HTN型 )HV在保定的存在 。

保定地区HFRS流行高峰年中1株家鼠型病毒株的分离鉴定及其核苷酸序列分析

目的 探讨保定地区 HFRS流行高峰的原因。方法 对 HFRS病人急性期血清用 RT- PCR方法进行病毒基因分型 ,从 1例家鼠型 (SEO型 )汉坦病毒感染的病人血清中分离病毒 ,并进行核苷酸序列测定。结果 31例病人中 ,2例为姬鼠型(HTN型 ) ,2 4例为家鼠型 (SEO型 ) ,1例 SEO型病毒经分离鉴定测序后与 SEOU L、R2 2 株进行比较 ,M基因核苷酸同源性分别为 :95 .15 %、93.94% ;氨基酸同源性均为 97.2 7%。结论 所分离 SEO型汉坦病毒为 1996年流行高峰年的主要流行株 ,未发现病毒基因片段的重排 ,流行不是由病毒基因重排引起。不同地区 SEO型病毒分子结构差异较小 。

从保定地区病人血清中扩增出与76-118株同亚型的汉坦病毒核苷酸序列分析

通过对1996年我院收治的肾综合征出血热(HFRS)病人应用 RT-PCR方法进行分型研究发现2例为野鼠型(HTN)汉坦病毒感染。经过对其中一例的病毒部分核苷酸序列的扩增、克隆、序列测定与分析,结果其核苷酸序列与已知HTN型病毒具有较高的同源性,特别是与韩国的76-118株的核苷酸序列极为相似,同源序列占 98.7％,故为同一亚型。

生长激素治疗肝硬化低蛋白血症34例疗效观察

目的观察重组人生长激素(r-hGH)对肝硬化患者蛋白质代谢的影响。方法对68例肝硬化患者在保证热量的综合治疗前提下,随机分为r-hGH组及对照组。观察两组患者治疗前后的临床症状,检测治疗前、治疗后、停药2周后血清白蛋白、肝肾功能等指标的变化,检测治疗前内源性生长激素水平。结果肝硬化患者血清内源性生长激素水平升高[(15.8±3.2)ng/L],治疗10d后,患者食欲不振、腹胀、乏力、恶心等症状改善率高于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05);治疗后及停药2周后血清白蛋白明显升高[分别为(31.9±4.2)g/L、(32.4±2.8)g/L],肝肾功能等指标无明显变化。结论在综合治疗基础上,使用r-hGH能迅速改善肝硬化患者的症状,改善低蛋白血症和营养状况,无明显不良反应。

西咪替丁治疗肾综合征出血热的临床研究

目的观察西咪替丁治疗肾综合征出血热患者的临床疗效及细胞免疫功能变化。方法120例患者随机分为四组,西咪替丁治疗组30例,在常规治疗的基础上,应用西咪替丁静脉滴注。应用流式细胞仪检测各组治疗前后T细胞亚群及NK细胞。结果西咪替丁治疗肾综合征出血热能显著缩短退热时间[(2.33±1.19)d]、尿蛋白消失时间[4.21±1.52)d]、血小板[3.62±1.31)d]及尿素氮复常时间[5.36±2.18)d],减少并发症,提高越期率;西咪替丁能使CD4+显著提高,CD8+明显降低,CD4+/CD8+比值升高,增加NK细胞活性(P<0.01),但与干扰素、病毒唑+胸腺肽治疗无明显差异(P>0.05)。结论西咪替丁、α-干扰素、病毒唑+胸腺肽三种治疗方法对肾综合征出血热均有显著疗效,治疗疗效相当。

逆转录聚合酶链反应法定量检测汉坦病毒RNA在临床诊断中的价值

我国是肾综合征出血热（HFRS）危害最为严重的国家之一，对HFRS患者进行汉坦病毒定量研究，对疾病的诊断和治疗及流行病学调查等防治实践有极为重要的意义。

从保定地区病人血清扩增出与76-118株同亚型的汉坦病毒的核苷酸及其序列分析

近年肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）在保定地区流行，从１９９５年的５４例增至１９９６年２４２例，为此我们对１９９６年保定市传染病医院收治的ＨＦＲＳ住院病人进行了列题研究，发现有两例为野鼠型（ＨＴＮ）汉坦病毒感染，其中一例经扩增克隆及核苷酸序列测定其结果与韩...