大鼠脂肪间充质干细胞及其外泌体的蛋白组学对比分析

背景:从蛋白组学方面分析脂肪间充质干细胞及其来源外泌体促进组织修复的研究较多,但缺少二者之间的蛋白组学对比分析。目的:对脂肪间充质干细胞及其外泌体进行蛋白组学分析。方法:分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,从细胞上清液中提取外泌体并进行鉴定;运用DIA蛋白组学分析大鼠脂肪间充质干细胞及其外泌体差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行GO和KEGG分析。结果与结论:①脂肪间充质干细胞以长梭形为主,类似成纤维样;②经BCA法测定外泌体悬液的蛋白质量浓度为7.66 mg/mL;③外泌体呈典型的茶杯型,可见双层膜的囊泡结构,中央为低电子密度成分,外泌体粒径分布峰值为112.2 nm,浓度为7.5×10^(11)粒子/mL,平均直径在70-140 nm之间;④外泌体有表面标记蛋白CD9、TSG101高表达;⑤GO分析脂肪间充质干细胞及其外泌体的差异表达蛋白主要集中在细胞外基质和突触等位置,与离子结合和核糖体的结合能力相关,在细胞黏附和翻译过程中最为显著;⑥KEGG通路分析结果显示,差异表达蛋白主要参与细胞外基质受体交互、核糖体和细胞因子受体相互作用等,并且与胆固醇和甲状腺等多种代谢性疾病有关。

优化脂肪间充质干细胞外泌体提取方法的研究

目的本研究旨在探讨用外泌体提取试剂盒提取脂肪间充质干细胞源性外泌体的优化方法。方法采用组织块贴壁法分离提取和培养原代脂肪间充质干细胞。收集1000mL 3~6代脂肪间充质干细胞的细胞上清,用100KD超滤离心管进行浓缩,外泌体提取试剂盒提取外泌体,测定外泌体悬液蛋白浓度后进行鉴定。结果脂肪间充质干细胞的形态主要以长梭形为主;外泌体悬液的蛋白浓度,经BCA法测定为7.66 mg/mL;透射电镜、NTA、蛋白质印迹法结果均符合外泌体的典型特征。结论在使用外泌体提取试剂盒(invitrogen)之前,用100KD的超滤管对1000mL细胞上清进行浓缩的方法可以成功提取到外泌体,而且是一种有效节省外泌体提取试剂盒剂量的方法。

高压氧对老年大鼠脊髓损伤后巨噬细胞极化和神经保护的影响

目的探讨脊髓损伤(SCI)后高压氧治疗(HBOT)的效果,尤其对老年大鼠巨噬细胞活化和神经保护的影响。方法建立脊髓钳夹损伤动物模型。大鼠随机分为假手术组,常压空气治疗组〔NBA组,21%氧气、1个标准大气压(ATA)〕,HBOT组(100%氧气,2.8 TAT),90 min/次,2次/d,共3 d。分别检测三组模型的巨噬细胞活化、细胞凋亡、组织防护和功能恢复情况。结果 SCI环境下HBOT带来显著性变化,M2亚型的数量和水平显著提升,M1亚型的数量下降。这与同步发生的髓过氧化物酶(MPO)活性的衰减、致炎因素〔如白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-17〕的下调有关。坚牢蓝(LFB)和GAP-43染色结果显示,HBOT组的髓鞘形成和轴突再生的水平明显高于NBA组。结论 HOBT可以提升M2亚型巨噬细胞活性,有效地减少SCI相关炎症的发生,这可能促进神经保护并有助于老年大鼠SCI后的功能恢复。

微波加热制作股骨头坏死模型:最适宜的温度和时间筛选

背景:目前股骨头坏死模型还不能很好地模拟临床股骨头坏死情况,利用微波灭活提供了一种新的方法,但是其具体的标准尚未确定。目的:探讨微波灭活制作股骨头坏死模型的适宜温度和时间。方法:将48只大白兔按数字随机法分为4组,将微波天线插入兔股骨头,4组分别以不同的时间(10,20min)和温度(50,55,60℃)进行股骨头微波灭活,灭活后即刻、1,2,4,8和12周,观察兔行为、利用X射线、MRI检测股骨头影像,并观察股骨头切片的组织坏死及修复情况。结果与结论:50℃10min条件微波灭活1周后,部分兔股骨头骨髓组织凝固变性,8周时坏死骨小梁及骨髓组织完全吸收。55℃10min微波灭活1周后,兔股骨头骨髓组织凝固,2周时股骨头出现T1相信号减低、T2相信号增高区,4周时坏死与修复同时进行,12周时骨修复停止,骨坏死继续,股骨头开始塌陷。50℃20min和60℃10min微波灭活8周后,所有兔股骨头塌陷变形。由此认为,采用55℃10min微波灭活股骨头是制作兔股骨头坏死模型的适宜温度和时间,其股骨头变化符合临床病理变化过程。

中枢神经损伤与异位骨化

目的综述近阶段国内外有关中枢神经损伤后异位骨化研究的新进展。方法广泛查阅近期有关中枢神经损伤与异位骨化研究的文献,综述神经性异位骨化的危险因素、发病率、发病机制、临床症状和体征、诊断及预防治疗。结果神经性异位骨化可能的机制与骨形成蛋白和成纤维细胞生长因子有关。超声、肌酸磷酸激酶、C-反应蛋白已经在临床上用于检测异位骨化的发生。秋水仙碱和罗非考昔可以用来预防和治疗异位骨化。结论神经性异位骨化的研究取得了长足进展,但还需要进一步研究。

膝关节前交叉韧带陈旧性损伤的诊治

目的探讨及总结陈旧性膝关节前交叉韧带损伤的诊治经验。方法回顾性分析2008年3月至2013年1月我院32例陈旧性膝关节前交叉韧带损伤患者的诊治及随访结果,并以Lysholm评分方法评价诊疗效果。结果 32例陈旧性膝关节前交叉韧带损伤患者经术前、麻醉后再次体检及X线片、MRI检查均得到确诊,经关节镜下重建并处理半月板损伤及软骨缺损等,治疗前平均lysholm评分为(75±2)分,随访1年平均为(95±3)分。结论陈旧性膝关节前交叉韧带损伤较新鲜损伤具有较大诊治难度,根据患者具体情况选择适当治疗方案是治疗的关键。

应用器械复位手术治疗SandersⅢ型、Ⅳ型跟骨关节内骨折

目的 探讨跟骨关节内骨折手术时机的选择、手术复位方法及临床效果.方法 2007年3月至2013年3月,手术治疗并获随访的SandersⅢ型、Ⅳ型跟骨骨折68例76足,患者均采用切开复位跟骨锁定钢板内固定.术中应用骨盆复位钳和顶锥挤压移位的骨块复位,C型臂进行Br（o）den位及跟骨轴位和侧位透视,检查骨折复位情况.对比手术前后B（o）lder角、Gissane角、跟骨高度和宽度;根据Maryland足部评分系统评价术后功能.结果 本组随访时间6 ～72个月,平均34个月,跟骨高度、宽度、B（o）hler角和Gissane角均较术前明显改善（P＜0.05）,优38足,良30足,可8足,优良率89.4％.术后皮肤边缘坏死2足,经换药愈合,1例出现足背外侧感觉减退,3个月后恢复.结论 跟骨关节内骨折要掌握好手术时机的选择,选择合适的器械对影响关节的移位骨块进行精准复位,采用跟骨锁定钢板进行跟骨的前突、载距突及结节三点固定是获得满意疗效的关键.

恒古骨伤愈合剂治疗急性腰扭伤的疗效观察

生活和劳动中，人们常因抬重物、姿势不正确、或长时间一种姿势而发生急性腰扭伤致腰痛，症状重，多影响患者生活、工作质量。约60％-80％的成人有患病史，仅次于上呼吸道感染而居第2位㈣。而腰肌劳损、椎间盘病变、椎问关节病变等可使急性腰扭伤容易和反复发生。2011年10月～2012年6月，采用口服恒古骨伤愈合剂和休息的方法治疗急性腰扭伤，单纯休息作为对照观察，结果报道如下。

部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入形成软骨或骨的可能性实验(英文)

背景:采用理化技术制备的天然生物骨衍生材料具有天然网状孔隙系统,具有良好的细胞相容性,有利于成骨细胞的附着及生长,可用于成骨细胞的支架材料。目的:观察部分去蛋白脱钙骨作为成骨细胞支架材料体内植入的成骨作用。设计:随机对照实验。单位:昆明医学院第一附属医院中心实验室。材料:部分去蛋白脱钙骨;人胎骨膜成骨细胞;4周龄BALB/c裸小鼠20只,体质量25～28g,雌雄不限。方法:实验于2003-01/06在昆明医学院第一附属医院中心实验室完成。将部分去蛋白脱钙骨与人胎骨膜成骨细胞体外复合培养1周后植入裸鼠体内,每只裸鼠共植4块材料,脊柱左侧植入材料与细胞的复合物,作为实验侧,右侧单纯植入材料,作为空白对照侧。于术后4周及8周取出材料行碱性磷酸酶活性及常规组织学检查。主要观察指标:裸鼠植入材料取出后行一般观察、碱性磷酸酶活性及常规组织学检查。结果:20只裸鼠均进入结果分析。①裸鼠植入材料一般观察:植入材料的周围组织未见坏死、化脓、积液等迹象,材料内有软组织长入、包裹。②碱性磷酸酶活性测定结果:部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入8周时碱性磷酸酶活性比4周时强[(22.854±6.018),(11.286±4.268)nkat/g],并比单纯植入的材料强得多[(1.217±0.083),(2.717±0.583)nkat/g]。③常规组织学检查结果:实验侧4周见有软骨形成,8周时部分软骨形成骨组织,并见有髓腔,且软骨或新骨形成增多,而对照侧未见软骨或骨形成。结论:部分去蛋白脱钙骨复合成骨细胞体内植入后能形成软骨或骨,并随植入时间的延长,软骨或新骨形成增多;部分去蛋白脱钙骨可用于成骨细胞的支架材料。

慢性化脓性骨髓炎的造模方法及经验总结

目的探讨慢性化脓性骨髓炎的动物造模方法。方法日本大耳白兔60只,于右胫骨近端开骨窗注入金黄色葡萄球菌及鱼肝油酸钠,骨蜡封闭骨窗,4周后行X线检查,再次手术暴露骨窗,局部产物送细菌培养。结果造模过程中因麻醉致死12只。手术后2周内因发热、咳嗽死亡8只,死亡兔行尸体解剖后发现8只兔均出现双肺脓肿,无菌条件下取兔肺组织行细菌培养发现均有金黄色葡萄球菌生长,手术后3周内因腹泻死亡4只,其余36只兔均出现明显的慢性骨髓炎表现。结论骨骼开窗注入金黄色葡萄球菌及鱼肝油酸钠,并使用骨蜡封闭骨窗是建立慢性化脓性骨髓炎动物模型的有效方法。

微波灭活兔股骨头坏死模型建立的实验研究

目的探讨用微波灭活制备股骨头坏死动物模型的可行性及技术方法.方法成年新西兰大白兔84只,用微波天线插入兔股骨头内对股骨头灭活10min,根据微波灭活的不同温度随机分为3组.各组分别于术后6个时间点采用X线摄片、MRI扫描和组织学观察股骨头组织的坏死和修复情况,确定最佳灭活温度.结果术后2周所有兔股骨头的MRI扫描都有信号改变;55℃灭活组于4周、8周时X线摄片可见低密度改变和囊性变,组织学检查表明此时坏死与修复同时进行,于术后12周X线摄片有69%兔股骨头塌陷变形.结论采用微波灭活建立股骨头坏死模型是可行的,该造模方法具有动物死亡率低,坏死成功率高,灭活温度和时间容易精确控制,可重复性大,操作简便等优点.55℃为微波灭活制备兔股骨头坏死模型的适宜温度.

免疫增强疗法用于慢性化脓性骨髓炎治疗的动物实验研究

目的研究自体淋巴细胞体外培养激活后对慢性化脓性骨髓炎的治疗效果。方法采用兔右胫骨近端慢性化脓性骨髓炎模型30例,于右胫骨近端开骨窗注入金黄色葡萄球菌4周,并经X线检查及细菌培养证实为慢性化脓性骨髓炎后,再次行病灶清除术。手术前自兔耳正中动脉抽血10 m l,对治疗组(15例)分离出淋巴细胞在体外培养并用白介素2(IL-2)及细菌菌体抗原激活,并于清创后注入骨髓炎局部。对照组(15例)仅行清创、采血及局部注入等量生理盐水。治疗术后8周取材,通过病理解剖学、放射学、组织学及细菌学检查,比较上述两种方法对慢性化脓性骨髓炎的治疗作用。结果治疗组细菌计数及改良X线Norden骨髓炎分值极低,明显低于对照组,其解剖学和组织学观察均无明显的骨髓炎表现。对照组的细菌计数、改良X线Norden骨髓炎分值均较高,其解剖学和组织学均显示出严重的骨髓炎表现。结论将兔外周血分离出的淋巴细胞体外培养激活,配合彻底清创对兔慢性化脓性骨髓炎有一定的治疗效果。

桥接外固定架结合负压封闭引流技术治疗胫腓骨Gustilo Ⅲ型骨折

目的研究桥接外固定架结合负压封闭引流技术在胫腓骨GustiloⅢ型骨折治疗中的应用效果。方法选择2015年12月-2016年12月我院收治的58例GustiloⅢ型骨折患者进行研究。按随机数表法,随机分为观察组和对照组,每组各29例患者。对照组患者采用桥接外固定支架结合传统创面换药的治疗方式;观察组患者则采用桥接外固定架结合负压封闭引流技术治疗方式。观察并记录患者术后并发症情况、首次进行功能锻炼时间、骨折愈合时间、创面愈合时间;对出院患者进行康复随访,观察患者康复情况并进行综合评价。结果术后,观察组患者首次进行功能锻炼时间、骨折愈合时间、创面愈合时间明显短于对照组(P<0.05);骨髓炎、伤口感染、关节肿痛等并发症总发生率明显低于对照组(P<0.05);观察组患者术后康复情况综合评分明显高于对照组(P<0.05)。结论采用桥接外固定架结合负压封闭引流技术治疗,一方面能有效降低并发症发生率,减轻患者身体负担;另一方面增强患者的康复效果,加快患者的康复速度,值得广泛推广应用。

57例经全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎的临床研究

目的探讨全髋关节置换术(THA)治疗强直性脊柱炎(AS)累及髋关节病变的临床效果。方法选择2006年2月—2010年3月来该院就诊的57例(90髋)AS髋关节强直患者,采用THA术治疗。术后,对患者进行随访,观察患者术后有无出现假体移位、松动以及并发症等情况出现。结果 57例患者全部没有出现髋关节脱位、假体移位等情况,也没有出现深静脉血栓等并发症。经SPSS统计分析,患者术后Harris评分以及髋关节活动度都显著优于术前(P<0.05)。2髋THA术后出现异位骨化,后通过非甾体抗炎药物治疗,症状明显减轻。结论 AS患者采用THA治疗,能够很大程度上改善患者关节功能,显著缓解疼痛,极大改善患者的生活质量。

门型钢板后路固定治疗C3型骨盆骨折疗效分析

目的探讨后路重建门型钢板内固定治疗C3型骨盆骨折的疗效及优势。方法我院自2007年3月至2009年9月起对31例C3型骨盆骨折患者,行门型钢板后路固定治疗。结果本组病例中有4例伤后3～4个月陈旧性骨折病例,复位困难,仅行后路门型钢板原位固定;1例患者过早负重,发生螺钉断裂;其余病例复位、固定均满意,骨盆环稳定,随访1～2年,负重行走功能良好,疗效满意。结论门型钢板后路固定手术是治疗C3型骨盆骨折、恢复骨盆环稳定及后方结构连续性的简单、有效、可靠的方法。

不同类型外翻截骨矫形术式的选择

目的 分析不同手术方法治疗不同类型（足母）外翻的疗效.方法自2009年4月至2013年3月昆明市第一人民医院手术治疗足母外翻86 例（110足）.根据（足母）外翻畸形程度不同分为3组.A组（中度）：共36 例（48足）,男2 例,女34 例;年龄22～70 岁,平均46 岁;（足母）外翻角（hallux valgus angle,HVA）24°～36°,平均30°,第1、2跖骨夹角（intermetatarsal angle,IMA）12°～16°,平均14°;手术方法采用McBride加第1跖骨头颈部楔形截骨术.B组（重度）：共40 例（51足）,男3 例,女37 例;年龄38～62 岁,平均50 岁;HVA 28°～44°,平均36°,IMA 14°～18°,平均16°;手术方法采用McBride加第1跖骨基底部楔形截骨术.C组（极重度）：共10 例（11足）,男1 例,女9 例;年龄64～82 岁,平均73 岁;HVA 45°～75°,平均60°,IMA 18°～20°,平均19°;手术方法采用B组（重度）术式＋Akin手术.结果 随访6～36个月,平均21个月.参照美国足踝外科学会Marylland评分系统评分,A组优30足,良16足,可2足,优良率95.8%;HVA平均矫正18°,IMA平均矫正7°.B组优36足,良12足,可1足,优良率94.1%;HVA平均矫正21°,IMA平均矫正8°.C组优7足,良3足,可1足,优良率90.9%;HVA平均矫正42°,IMA平均矫正8°.结论 （足母）外翻的病理基础主要为第1跖骨内翻的骨性畸形与（足母）收肌高度紧张挛缩的软组织畸形,手术应针对有明显临床症状的患者.手术设计应重点解除骨与软组织的畸形.

骨组织工程支架材料特性比较

骨组织工程支架材料的研究甚多,进展较快,但尚未找到一种理想的材料.对用于组织工程支架材料的陶瓷材料、聚合物类材料、天然生物衍生材料及其复合材料等研究现状进行综述.

3D打印技术在骨盆手术中的应用

在骨盆手术中,骨盆结构复杂、术区暴露困难、可视性差一直是骨科医师面临的难题。随着材料科学和3D打印技术的发展,3D打印在骨科中的应用越来越广泛。骨盆手术中3D打印技术的应用包括:(1)构建三维解剖模型,进行术前规划,制定最佳手术方案;(2)3D打印导板促进骨盆手术微创化、简单化;(3)骨盆肿瘤治疗中,3D打印定制多孔结构的假体解决骨盆肿瘤等复杂不规则骨缺损的有效方法。本文将对以上内容作一综述。