基础状态血清高黄体生成素水平及黄体生成素/卵泡刺激素比值对多囊卵巢综合征患者体外受精妊娠结局的影响

目的探讨基础状态高血清黄体生成素(LH)、不同黄体生成素/卵泡刺激素比值(LH/FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法回顾性分析我中心接受IVF治疗的134个PCOS助孕周期,按照基础状态LH≤10 U/L分为A(1LH≤10 U/L)、A(2LH>10 U/L)组,按照LH/FSH<2分为B(1LH/FSH<2)、B(2LH/FSH≥2)组。分别比较A、B组患者一般情况、胚胎质量和临床妊娠结局。结果 A2组血清FSH、T、LH/FSH比值、获卵数均较A1组高,有统计学差异(P<0.05);但两组在窦卵泡计数(AFC)、降调时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH、胚胎质量及临床妊娠结局方面均无统计学差异。B2组的基础LH、HCG日E2、获卵数较B1组高,但Gn使用剂量较少,有统计学差异(P<0.05);而两组在降调节时间、Gn天数、启动日LH、LH/FSH比值、临床妊娠结局方面无统计学差异。结论 PCOS患者经口服避孕药物预处理后,基础状态高LH水平(LH>10 IU/L)及高LH/FSH比值(LH/FSH≥2)对其IVF妊娠结局无不良影响。

1-磷酸鞘氨醇在生殖系统中的作用

鞘脂类是细胞膜上普遍存在的一种成分,其代谢产物1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)既可通过胞外受体途径又可作为胞内第二信使发挥重要的生理学功能,如调控细胞存活、生长、增殖和凋亡。S1P不但抑制辐射、热刺激等诱发的卵巢、卵母细胞以及男性生殖细胞发生细胞凋亡,而且外源性S1P可减少早期胚胎细胞凋亡,从而改善胚胎发育潜能。因此,S1P在提高人类辅助生殖技术临床结局方面有潜在的应用价值。

IL-6在子宫内膜异位患者血清中的表达及其潜在作用机制研究

目的:探讨IL-6在子宫内膜异位患者血清中的表达及其高表达对子宫内膜异位症腺上皮细胞的作用及潜在机制。方法:ELISA实验检测子宫内膜异位患者血清中IL-6表达; MTT实验检测IL-6对子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖影响,Western blot、Transwell实验检测IL-6对子宫内膜异位症腺上皮细胞上皮间质转化的影响; Western blot检测IL-6对细胞中STAT3/BCL6通路蛋白表达的影响;免疫组化检测患者组织中BCL6表达。结果:IL-6在子宫内膜异位患者血清中高表达; IL-6可促进子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖和上皮间质转化; IL-6可促进细胞中p-STAT3、BCL6蛋白表达增加;子宫内膜异位患者组织中BCL6高表达。结论:IL-6、BCL6在子宫内膜异位患者血清和组织中普遍高表达,IL-6可能通过激活STAT3/BCL6促进子宫内膜异位症腺上皮细胞增殖及上皮间质转化过程,提示IL-6和BCL6可作为临床诊断治疗子宫内膜异位的新靶标。

多囊卵巢综合征个体化调整内分泌治疗疗效观察

目的:探讨个体化调整内分泌策略治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的临床疗效。方法:根据睾酮(T)、促黄体生成素(LH)水平将220例PCOS患者分为3组。A1组(基础状态血清T、LH水平同时升高)50例,给予炔雌醇环丙孕酮(达英-35)2个周期、去氧孕烯炔雌醇(妈富隆)1个周期口服;A2组(基础状态血清T水平升高)40例,给予达英-35 1个周期、屈螺酮炔雌醇(优思明)2个周期口服;A3组(基础状态血清LH水平升高)130例,行达英-35 1个周期、妈富隆2个周期口服;然后促排卵。结果:A1组调整内分泌后血清T、LH、FSH、LH/FSH较调整前下降(P<0.05),A2组调整后血清T、LH/FSH较调整前下降(P<0.05),A3组调整后血清T、LH、LH/FSH较调整前下降(P<0.05)。3组排卵率、有效率、不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。220例总体排卵率达60.0%,总体有效率达54.5%,总体不良反应发生率为5.5%。结论:个体化调整内分泌能明显改善PCOS患者体内内分泌紊乱状态,提高排卵率及临床妊娠率,安全性较高。

腹茧症合并原发性不孕二例

病例1患者33岁,因＂婚后5年未避孕未孕＂于我院就诊。患者平素月经规律,无腹痛、腹胀及其他不适。2007年10月在外院行子宫输卵管造影示：右侧输卵管起始部不通,左侧输卵管伞端不完全性梗阻。2009年12月行腹腔镜检查术,气腹针置入成功,充气时发现气体无法进入腹腔,按原脐下切口打开筋膜,

线粒体ND6基因变异和完全受精失败的相关性

目的:探讨线粒体ND6基因变异与完全受精失败的相关性。方法:2011年7月至2014年4月,共收集了232例新鲜IVF周期或者half-ICSI周期中的汉族人精子进行回顾性对照研究。研究组45例精子来源于IVF完全受精失败,对照组187例精子来源于正常受精夫妇的精子(受精率>50%)。精子线粒体的基因变异是通过巢式PCR和DNA测序来确定。结果:共发现21个纯合变异,其中7个纯合变异具有统计学意义(P<0.05),它们分别是:m.14182T>C(4.44%vs 0%)、m.14284C>T(4.44%vs 0%)、m.14362C>T(4.44%vs 0%)、m.14386T>C(4.44%vs 0%)、m.14457T>C(4.44%vs 0%)、m.14494T>C(6.67%vs 0%)和m.14659C>T(4.44%vs 0%),其中m.14457T>C变异为错义变异。另外,新发现1个纯合变异14170A>T。结论 :精子线粒体ND6基因m.14182T>C、m.14284C>T、m.14362C>T、m.14386T>C、m.14457T>C、m.14494T>C和m.14659C>T等7个位点变异可能是发生完全受精失败的危险因素。

上调miR-15a表达对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和NOB1蛋白表达的影响

目的:研究上调miR-15a表达对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和NOB1蛋白表达的影响。方法:将子宫内膜癌RL-952细胞分为3组,分别给予不转染(空白对照组)、转染miR-15a mimics(miR-15a组)或对照序列(miR-NC组)处理。转染48 h后,qRT-PCR法检测3组细胞中miR-15a表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot法检测细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达;平板克隆实验测定细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡。利用Targetscan预测NOB1的3′UTR端与miR-15a有结合位点,利用双荧光素酶报告实验鉴定两者的靶向关系。RL-952细胞共转染NOB1过表达载体和miR-15a mimics 48 h后,检测细胞增殖能力、克隆形成能力、凋亡率,以及细胞中Bax、Bcl-2、NOB1蛋白的表达。结果:与空白对照组、miR-NC组比较,miR-15a组细胞中miR-15a表达水平升高,细胞增殖能力和克隆形成率均降低,凋亡率升高,细胞中Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-15a靶向负调控NOB1的表达。与转染miR-15a mimics的细胞比较,共转染NOB1过表达载体和miR-15a mimics的RL-952细胞增殖能力、克隆形成率升高,Bcl-2、NOB1蛋白表达升高,凋亡率和Bax表达降低(P<0.05)。结论:上调miR-15a表达可能通过靶向下调NOB1,抑制子宫内膜癌细胞的增殖,诱导癌细胞凋亡。

194例多囊卵巢综合征不孕患者体外受精-胚胎移植临床结局及相关分析

目的探讨原发性不孕与继发性不孕的多囊卵巢综合征(PCOS)患者的临床内分泌特征及其对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)临床结局的影响。方法回顾性分析南方医科大学南方医院生殖中心2009年1月至2011年12月共194例接受IVF-ET的PCOS患者的临床资料,其中分为原发性不孕患者116例(A组)及继发性不孕患者78例(B组),分析比较两组患者临床基础内分泌情况、降调后内分泌情况及IVF-ET临床结局。结果 A组平均年龄小于B组(t=-2.236,P=0.026),基础LH、LH/FSH值高于B组(t=2.262,P=0.025;t=2.508,P=0.013),差异具有统计学意义,但在不孕年限、基础FSH、BMI、总睾酮、多毛、月经稀发等方面两组差异无显著统计学意义(P>0.05);A组的降调时间、降调后LH、FSH及LH/FSH与B组相比无明显差异(P>0.05);在Gn时间、Gn总量、HCG日E2、获卵数、成熟卵子数、正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率、活产率等方面,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PCOS患者中原发性不孕患者基础LH值与LH/FSH值高于继发性不孕患者,但经预处理和降调达标后对IVF的妊娠结局无影响。

不孕症合并甲状腺肿瘤的临床处理

临床在对不孕症患者的诊治过程中,常常发现合并甲状腺肿瘤或甲状腺功能异常。近年来甲状腺肿瘤的发病率呈上升趋势,以45岁以下女性为主。由于不孕症患者是特殊群体,妊娠与甲状腺肿瘤之间互相影响,且甲状腺肿瘤可能影响妊娠结局,故诊治过程中应首先确定肿瘤的良恶性,小的良性肿瘤可以先治疗不孕症并妊娠,有压迫症状的良性肿瘤可以先切除甲状腺肿瘤再妊娠;如果为恶性甲状腺肿瘤,建议先手术治疗,待甲状腺功能平稳后再考虑妊娠;高龄及卵巢功能低下者,可考虑先行助孕全胚冷冻保存生育力,之后再治疗甲状腺恶性肿瘤。

PBMCs源性外泌体经miR-1306改善子宫内膜容受性的机制研究

目的探讨外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)源性外泌体经miR-1306改善子宫内膜容受性的机制。方法运用皮下注射米非司酮制备着床障碍小鼠模型并分为着床障碍组、PBMCs干预组,同时设置正常组,每组12只。PBMCs干预组给予宫腔注射PBMCs源性外泌体干预,正常组和着床障碍组宫腔注射等体积缓冲液,比较各组小鼠的妊娠率和着床点数,RT-PCR法检测子宫内膜组织miR-1306表达,酶联免疫吸附试验检测子宫内膜组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、单核细胞趋化因子-1(monocyte chemcattractant protein-1,MCP-1)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,Western blotting法检测小鼠子宫内膜组织中妊娠相关蛋白表达。将子宫内膜上皮细胞分为对照组、实验组、阴性对照组、miR-1306 inhibitor组,除对照组外余下各组细胞均采取Transwell共培养PBMCs源性外泌体,使用MTT法、Edu法、Annexin-V/PI流式法分别检测细胞活性、增殖和凋亡情况,试剂盒检测细胞ROS水平,Western blotting检测相关蛋白表达。结果着床障碍组小鼠妊娠率[8.33%(1/12)]、着床点数[0(0,0)个]和子宫内膜组织miR-1306表达(0.24±0.05)、SOD水平[(5.66±0.72)U/mL]均显著低于正常组[100%(12/12)、16.50(14.00,19.00)个、1.03±0.05、(8.69±1.21)U/mL,均P<0.05];子宫内膜组织ROS水平[(4.87±0.39)U/mL]、IL-6水平[(116.51±5.78)ng/L]、MCP-1水平[(36.84±3.56)μg/L]和KIR2DL4(0.87±0.06)、核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2,0.76±0.06)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1,0.79±0.05)、受体相互作用蛋白酶1(receptor interacting protein 1,RIP1,0.94±0.04)和RIP3蛋白(0.86±0.05)表达水平均显著高于正常组[(2.41±0.19)U/mL、(83.79±6.68)ng/L、(12.32±2.09)μg/L、0.27±0.03、0.31±0.05、0.23±0.04、0.34±0.03、0.31±0.05,均P<0.05]。PBMCs干预组小鼠妊娠率[75.00%(9/12)]、着床点数[13.00(13.00,14.75)个]和子宫内膜组织miR-1306表达(0.82±0.05)、SOD水平[(7.24±0.84)U/mL]均显著高于着床障碍组(均P<0.05);子宫内膜组织ROS[(3.43±0.30)U/mL]、IL-6[(94.69±3.99)ng/L]、MCP-1水平[(27.03±3.48)μg/L]和KIR2DL4(0.54±0.08)、Nrf2(0.48±0.05)、Keap1(0.43±0.05)、RIP1(0.56±0.05)、RIP3蛋白表达(0.49±0.03)均显著低于着床障碍组(均P<0.05)。实验组细胞活性[(126.63±1.25)%]、增殖率[(53.54±2.82)%]和ROS水平[(3.12±0.31)U/mL]均显著高于对照组[100%、(23.18±3.07)%、(2.51±0.28)U/mL,均P<0.05],凋亡率[(5.69±0.47)%]、KIR2DL4(0.36±0.06)、Nrf2(0.30±0.06)、Keap1(0.26±0.04)、RIP1(0.27±0.05)和RIP3蛋白表达(0.26±0.06)均低于对照组[(27.13±2.97)%、0.84±0.06、0.75±0.05、0.68±0.05、0.80±0.06、0.80±0.07,均P<0.05]。miR-1306 inhibitor组细胞活性[(83.48±5.34)%]、增殖率[(38.42±4.28)%]均显著低于阴性对照组[(127.12±4.08)%、(53.57±2.09)%,均P<0.05],细胞凋亡率[(13.63±1.77)%]、ROS水平[(6.49±0.62)U/mL]、KIR2DL4(0.67±0.07)、Nrf2(0.57±0.05)、Keap1(0.50±0.05)、RIP1(0.64±0.06)和RIP3蛋白表达(0.61±0.08)均显著高于阴性对照组[(5.71±0.78)%、(3.23±0.31)U/mL、0.36±0.07、0.30±0.07、0.27±0.06、0.28±0.07、0.28±0.06,均P<0.05]。结论PBMCs源性外泌体可以提高着床障碍小鼠妊娠率,可能是通过促进miR-1306表达、抑制KIR2DL4表达以改善炎症反应,还与缓解子宫内膜过度氧化应激和细胞凋亡有关。

微小RNA-590-3p靶向叉头框蛋白A2对肿瘤细胞增殖和转移特性的影响

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-590-3p靶向叉头框蛋白A2(FOXA2)对肿瘤细胞增殖和转移特性的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析人卵巢上皮细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞skov3中miR-590-3p水平;将人浆液性卵巢癌细胞系skov3随机分为对照组和观察组,分别采用miRNA对照和miR-590-3p抑制剂转染skov3细胞,72 h后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和体外移植瘤实验分析两组细胞的增殖能力;采用Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮间质转化能力;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-590-3p的靶基因,Western blot分析两组细胞靶基因表达以及增殖和迁移相关蛋白表达水平。计量数据比较采用t检验。结果:人卵巢上皮细胞HOSEpiC miR-590-3p表达水平(0.77±0.14)明显低于卵巢癌细胞skov3 miR-590-3p表达水平(1.22±0.15),差异有统计学意义(t=5.450,P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(2.06±0.13)明显高于观察组(1.37±0.12),差异有统计学意义(t=9.279,P<0.05)。对照组细胞克隆形成数量[(125.83±12.19)个]明显高于观察组[(103.67±10.04)个],差异有统计学意义(t=3.169,P<0.05)。对照组细胞肿瘤体积[(976.68±79.77)mm 3]明显高于观察组[(718.60±52.52)mm 3],差异有统计学意义(t=6.619,P<0.05)。对照组细胞肿瘤肿瘤[(4.42±0.51)g]明显高于观察组[(2.74±0.33)g],差异有统计学意义(t=6.807,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(134.50±9.89)个]明显高于观察组[(108.17±7.63)个],差异有统计学意义(t=5.163,P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(93.83±5.31)个]明显高于观察组[(73.29±5.21)个],差异有统计学意义(t=6.414,P<0.05)。对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(0.67±0.13)明显低于观察组(1.25±0.12),差异有统计学意义(t=7.763,P<0.05)。对照组细胞间质细胞标志物β-连环蛋白(β-catenin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平(1.25±0.12、1.22±0.13)明显高于观察组(0.92±0.06、0.69±0.07),差异有统计学意义(t=6.091、8.993,P<0.05)。FOXA2是miR-590-3p的靶基因。对照组细胞FOXA2蛋白表达水平(1.21±0.13)明显低于观察组(2.16±0.14),差异有统计学意义(t=12.200,P<0.05)。结论:miR-590-3p沉默可显著促进靶蛋白FOXA2表达,抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力。

间苯三酚对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探究间苯三酚对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法回顾性分析2015年1月1日至2018年11月30日期间在郑州大学第二附属医院生殖医学部行IVF-ET治疗的4289例不孕患者的临床资料。根据妊娠结局分为妊娠组及非妊娠组,分析影响患者妊娠结局的危险因素。再根据移植前用药情况将患者分为未接受药物治疗组(A组)、术前静脉滴注阿托西班组(B组)、术前联合术中注射阿托西班组(C组)、术中静脉滴注间苯三酚组(D组),比较四组患者的一般情况、妊娠结局,以及治疗期间及治疗后不良反应发生情况。结果年龄、优质胚胎数及移植前用药方式是影响IVF-ET患者妊娠结局的独立因素(P=0.031、P=0.039、P=0.020)。D组患者胚胎种植率、生化妊娠率及临床妊娠率均明显高于A组(P均<0.001)、B组(P均<0.001)及C组(P<0.001,P<0.001,P=0.001);其异位妊娠率明显低于A组、B组及C组(P均<0.001);流产率低于A组(P<0.001)。治疗期间及治疗后,4组患者均未见不适主述及过敏反应,所有出生婴儿均无出生缺陷。结论用药方式是影响IVF-ET患者妊娠结局的独立因素,术中静脉注射间苯三酚可明显提升IVF-ET患者胚胎种植率及妊娠率,并降低其流产率。

移植胚胎数对冻融胚胎复苏移植周期临床结局的影响

目的探讨移植胚胎数对冻融胚胎复苏移植周期临床结局的影响。方法回顾性分析2015年1月1日至2017年12月31日在郑州大学第二附属医院生殖中心行冻融胚胎复苏移植的458个移植周期,按照移植胚胎不同分为A1组、A2组、B1组和B2组,A1(25个周期):移植1枚优质胚胎,A2组(104个周期):移植2枚优质胚胎,B1组(47个周期):移植1枚优质囊胚,B2组(282个周期):移植2枚优质囊胚。记录各组的临床结局。结果B1组和A2组的临床妊娠率和活产率明显高于A1组(P<0.05);B1组的临床妊娠率和活产率与A2组无明显差异(P>0.05),多胎妊娠率和早产率明显低于A2组(P<0.05);B2组的临床妊娠率和活产率与B1组无明显差异(P>0.05),多胎妊娠率、早产率和流产率均明显高于B1组(P<0.05)。结论移植1枚优质囊胚可提高临床妊娠率和活产率,降低多胎妊娠率、早产率和流产率,临床可优先选择移植1枚优质囊胚。

淋巴细胞免疫与非免疫治疗封闭抗体缺乏致胚胎停育效果观察

目的分析胚胎停育的原因,比较封闭抗体缺乏致胚胎停育的淋巴细胞免疫治疗与非免疫治疗的效果。方法102例早期胚胎停育患者,选择其中复发性流产2次以上、封闭抗体缺乏、无子宫发育异常和染色体异常、男方精液无异常患者58例,根据男方传染病检验结果和自愿选择治疗方案原则分为免疫治疗组30例和非免疫治疗组28例,非免疫治疗组给予促排卵、黄体支持及辅助生殖技术等治疗,免疫治疗组在非免疫治疗组治疗基础上,抽取患者丈夫(或健康第三方)静脉血提取淋巴细胞皮下注射,比较2组妊娠结局。结果 102例中胚胎染色体异常64例(62.74%),封闭抗体缺乏81例(79.41%),多囊卵巢综合征60例(58.82%);免疫治疗组封闭抗体转阳率为76.67%,妊娠率为80.00%;非免疫治疗组妊娠率为78.57%,2组妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胚胎染色体异常是胚胎停育的主要原因;淋巴细胞免疫治疗与非免疫方法治疗封闭抗体缺乏所致胚胎停育均可获得理想妊娠率。