系统性红斑狼疮患者外周血中γδT细胞及其主要功能亚群的变化及临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中γδT细胞及其主要功能亚群γδT1、γδT17细胞的变化及其临床意义。方法采用流式细胞术检测21例SLE患者(SLE组)、16例健康对照患者(HC组)外周血γδT细胞、γδT1细胞、γδT17细胞的比例及绝对数。采用Pearson相关性分析法分析外周血γδT细胞、γδT1细胞、γδT17细胞与临床指标的相关性。结果SLE患者外周血γδT细胞占淋巴细胞百分率为(2.30±1.10)%,低于HC组的(3.30±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05);γδT1细胞占淋巴细胞百分率为(0.93±0.67)%,低于HC组的(2.09±1.21)%,差异有统计学意义(P<0.001);γδT17细胞占淋巴细胞比率为(1.53±2.82)‰,与HC组的(0.18±0.12)‰比较有增多的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。SLE患者外周血γδT细胞绝对数为(2.88±2.18)×10^(4)/mL,低于HC组的(7.96±3.96)×10^(4)/mL,差异有统计学意义(P<0.0001);SLE患者外周血γδT1细胞绝对数为(1.20±1.17)×10^(4)/mL,低于HC组的(5.05±3.04)×10^(4)/mL,差异有统计学意义(P<0.0001);SLE患者外周血γδT17细胞绝对数为(1.03±1.08)×103/mL,高于HC组的(0.40±0.24)×103/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。SLE患者外周血中γδT17细胞比例与系统性红斑狼疮疾病活动度评分(SLEDAI)(r=0.59,P<0.01)、红细胞沉降率(r=0.65,P<0.01)呈正相关,γδT17细胞绝对数与SLEDAI(r=0.59,P<0.01)呈正相关,与补体C3水平(r=-0.53,P<0.05)呈负相关。结论SLE患者外周血中γδT细胞数量显著下降主要由其γδT1细胞亚群减少所致,γδT17细胞在SLE发病及活动中发挥了重要作用。

Toll样受体激活对间充质干细胞免疫调节功能的影响

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)激活对骨髓和脐带两种不同来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)免疫调节功能的影响,同时比较骨髓MSC与脐带MSC中TLR的表达情况。方法从关节置换术患者废弃的关节中取得骨髓,分离培养骨髓MSC。从健康产妇废弃的脐带中分离培养脐带MSC。采用TLR4激动剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、TLR3激动剂聚肌胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,Poly(I:C)]分别预处理骨髓MSC或脐带MSC,然后与健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)共培养,共培养结束后流式细胞术检测PBMC增殖情况。以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测骨髓MSC和脐带MSC中TLR4、TLR3的基因表达水平。流式细胞术检测骨髓MSC和脐带MSC中TLR4、TLR3的蛋白表达水平。结果骨髓MSC与PBMC共培养实验结果显示,LPS预处理可以明显降低骨髓MSC对PBMC增殖的抑制效应,Poly(I:C)预处理对骨髓MSC免疫调节功能无显著影响。脐带MSC与PBMC共培养实验结果显示,LPS或Poly(I:C)预处理对脐带MSC抑制PBMC增殖的影响均不显著。与骨髓MSC比较,脐带MSC中TLR4、TLR3的基因和蛋白表达水平均明显更低。结论TLR4激活可以干扰骨髓MSC的免疫调节功能,但是TLR4或TLR3激活对脐带MSC免疫调节功能的影响并不显著,可能与脐带MSC中TLR4、TLR3的基础表达量低有关。

系统性红斑狼疮合并动脉粥样硬化的小鼠模型建立和评价

目的动脉粥样硬化(AS)相关心血管病变是系统性红斑狼疮(SLE)患者最主要的致病和死亡因素,但是其具体机制不明。本研究旨在建立SLE合并AS的小鼠模型并进行评估,为研究SLE合并AS的机制和治疗奠定基础。方法将SLE模型(Fasl^(-/-))和动脉粥样硬化模型(apoE^(-/-))小鼠进行杂交纯化;采用PCR方法鉴定小鼠的基因型;检测小鼠血清中肾功能和血脂等生化指标;分析肾脏和心脏等病理改变。结果 PCR结果显示SLE和AS杂合小鼠为Fasl和apo E基因纯合突变;小鼠血清肌酐增高,血清中出现抗ds-DNA抗体。血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白增加,高密度脂蛋白降低;小鼠肾脏出现狼疮性肾炎病理改变,心脏有明显动脉粥样斑块沉积。结论 SLE和AS模型小鼠杂合纯化的小鼠,同时表现出SLE和AS样病变,成功建立了SLE合并AS的小鼠模型,为后续研究奠定了基础。

甲襞微循环检测对系统性红斑狼疮患者肺动脉高压的预测价值

目的:评价甲襞毛细血管镜检查(NVC)指标与系统性红斑狼疮(SLE)患者肺动脉高压(PAH)及心血管损害的相关性,分析NVC对预测SLE伴发PAH的价值。方法:经胸超声心动图检测46例SLE患者(SLE组)的肺动脉压(PAP),其中合并PAH患者17例(SLE-PAH组),无PAH患者29例(SLE-non-PAH组);依据是否伴发心血管并发症,将46例SLE患者分为SLE-无心血管损害组(n=30)和SLE-有心血管损害组(n=16)。另选10例健康人作为正常对照组。以毛细血管镜检测各组手指甲襞毛细血管的管袢数、管径、形态、血流、出血、红细胞聚集、血色等指标。免疫比浊法检测各组外周血血清补体C3、C4和免疫球蛋白IgG浓度,免疫荧光法检测血浆B型脑钠肽(BNP)水平。比较各指标组间差异,并分析NVC检查指标与患者免疫指标的相关性。结果:(1)SLE-PAH组患者毛细血管管袢数显著减少(P<0.05);(2)SLE-PAH组患者的毛细血管管径、形态、流速、红细胞聚集等异常评分显著升高;(3)SLE组患者各NVC异常与心血管并发症和血浆BNP浓度相关。结论:SLE患者甲襞微循环异常与其PAH及心血管损害包括心功能不全相关,可用来预测PAH的发生及预后。

基于全基因组测序及平均核苷酸一致性分析鉴定1株哥伦比亚分枝杆菌

目的通过全基因组测序技术结合平均核苷酸一致性分析鉴定1株哥伦比亚分枝杆菌。方法1株分离自系统性红斑狼疮患者皮肤溃疡处的分枝杆菌,经抗酸染色初步鉴定、常规细菌培养获得菌株,采用质谱技术进行菌种鉴定,对分离菌株进行DNA提取和全基因组测序及生物信息分析。结果皮肤溃疡分泌物标本直接涂片抗酸染色呈阳性;分泌物经7 d培养可见细小菌落(编号MC230),抗酸染色阳性;质谱鉴定未获得菌种信息;MC230基因组大小为5671138 bp,GC含量为67.93%;MC230与哥伦比亚分枝杆菌模式菌株CECT 3035的平均核苷酸一致性分析(OrthoANI)值为98.05%。结论全基因组测序技术结合平均核苷酸一致性分析可准确实现哥伦比亚分枝杆菌鉴定。

中性粒细胞胞外陷阱对类风湿关节炎成纤维化样滑膜细胞mRNA表达谱的影响

目的中性粒细胞胞外陷阱(NETs)与RA疾病的发生发展密切相关。文章旨在研究NETs对RA成纤维化样滑膜细胞(FLS)基因表达谱的影响。方法收集RA患者8例以及8例健康志愿者外周血5 mL分别作为RA组和对照组。分离RA患者与健康对照者的外周血中性粒细胞,免疫荧光法检测NETs的生成。同时ELISA检测RA组与对照组血清中游离核小体的水平。体外分离健康供者的中性粒细胞,以PMA诱导NETs生成。将FLS以1×10~6的数量接种在6孔板中,以含10%FBS的DMEM培养基培养,加或不加所分离的NETs刺激,分为未刺激的FLS组和NETs刺激后的FLS组。全基因组分析NETs对RA FLS基因表达谱的影响。结果与对照组外周血中NETs形成数量(6.67±1.45)相比,RA组(18.67±2.33)显著增多(P<0.05);与对照组(0.11±0.02)相比,RA组血清中NETs组分游离核小体的水平(0.20±0.02)也显著升高(P<0.05)。基因芯片结果进一步提示与未刺激的FLS对比,NETs刺激培养后的FLS共有差异表达mRNA469个,其中mRNA上调257个,下调212个。全基因组学分析显示NETs可以作用于RA FLS,上调炎性反应、细胞增殖、细胞迁移、蛋白酶等相关基因的表达,下调细胞程序性死亡、细胞生长阻滞、DNA损伤相关基因的表达。结论NETs诱导RA FLS的侵袭表型和炎症反应,NETs可通过影响FLS的生物学功能参与RA滑膜炎。

基于非对称交互多模型算法的上升段弹道估计

弹道导弹上升段涵盖助推段和自由段,动力特征复杂,传统跟踪算法难以获得其全程稳定高精度的弹道估计。对此提出一种用于上升段弹道估计的自适应非对称交互多模型算法,模型集由三维当前统计模型和精确动力学模型构建,并对模型状态矢量进行统一。仿真结果表明,算法实现了对导弹上升段稳定高精度跟踪以及关机点的有效检测,与传统CS算法相比较,自由段弹道估计精度提高68.9%,且可有效检测导弹的运动模式切换,检测延迟小于2s,滑行段暂态误差降低79.5%。

gld．apoE-/-C57BL／6小鼠内皮祖细胞数量及功能变化的研究

目的分析gld．apoE-/-鼠外周血及骨髓内皮祖细胞（EPCs）数量及功能的变化。方法杂交繁殖gld．apoE-/- C57BL／6雌性小鼠，采用流式细胞术分析gldu＋apoE＋/＋，gld，apoE-/-，gld．apoE-/--C57BL／6雌性小鼠外周血及骨髓中CD11b-SCA-1＋CD309＋的EPCs的百分率；密度梯度离心和贴壁培养法分离培养小鼠骨髓EPCs，用1，1’-双十八烷基-3，3，3’，3＇-四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐（DiI）标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI）-ac-LDL）和异硫氰酸荧光素（FTTC）标记的荆豆凝集素（FITC-UEA-1）双染色标记贴壁细胞，分析EPCs吞噬功能；计数再贴壁EPCs数量以检测其黏附功能；计数血管腔样结构数量以检测其成血管功能。采用SPSS11．5软件行t检验进行数据统计分析，GraphPadPrism5软件作图。结果与sld＋/＋ apoEu-/-组[（0．039i4）．005）％，P〈0．01]、gld组[（0．025±0．001）％，P〈0．05]及apoE小组[（0．028±0．002）％，P〈0．01]相比，sld．apoE-/- 组外周血EPCs的百分率[（0．012±0．002）％]显著下降；与gld＋/＋ apoE＋/＋[（0．42±0．05）％，P〈0．05]相比，gld．apoE-/-骨髓EPCs的百分率[（0．12±0．01）％]显著下降；gId．apoE-/- DiI-LDL和FITC-UEA-1双阳性细胞百分率[（59．2±2．1）％]显著低于gld＋/- apoE＋/＋组[（87．5±3．0）％，P〈0．01]及gld组[（84．2±6．0）％，P〈0．01]；与gldu＋-＋ apoE-/-[（86．0±7．3）％，P〈0．01]、gld组[（73．0±1．0）％，P〈0．01]及apoE-/-[（65．0±4．0）％，P〈0．05]相比，gld．apoE-/-组EPCs黏附数量[（50．0±5．3）％]亦显著减少；与gld冉apoE＋/＋（12．0±1．4）相比，gld．apoE-/-（4．0±0．3，P〈0．01）、gl组（8．0±0．5，P〈0．05）和apoE-/-组（6．5±1．2，P〈0．01）小鼠EPCs形成血管闭合环数量明显减少，其中gld．qpoE-/-组小鼠EPCs形成闭合环数量最少。结论gld．apoE-/- C57BL／6小鼠体内EPCs数量减少，且骨髓EPCs黏附、吞噬及促血管生成功能受损，可能是狼疮伴动脉粥样硬化发生的原因之一。

人脐带间充质干细胞与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞共培养上调可溶性血管内皮生长因子受体1表达

目的探讨人脐带间充质干细胞（HUCMSC）在炎性细胞因子刺激及与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLSs）共培养条件下表达可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt1）水平。方法①单独培养HUCMSC，或分别以TNF-α、IFN-γ、TNF-α＋IFN-γ刺激HUCMSC，24 h、48 h和72 h后收集上清，ELISA检测各组sFlt1水平。②将RA-FLSs与HUCMSC通过Transwell体系共培养72 h，以RA FLSs和HUCMSC单独培养为对照，ELISA检测各组sFlt1水平。2组间比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析。结果① 24 h和48 h时间点，TNF-α＋IFN-γ组sFlt1浓度较对照组显著升高[24 h（5.4±0.4）ng/ml和（2.8±1.7）ng/ml，t=0.942，P=0.026；48 h（7.2±0.8）ng/ml和（4.3±1.0）ng/ml，t=4.285，P=0.005]。72 h时间点，TNF-α＋IFN-γ组sFlt1浓度高于对照组（9.1±1.7）ng/ml和（7.0±1.4）ng/ml，t=0.683，P=0.52），但差异无统计学意义。TNF-α组和IFN-γ组sFlt1浓度较对照组差异无统计学意义。② HUCMSC表达sFlt1水平高于RA-FLSs（8.19±3.64）ng/ml和（0.19±0.08）ng/ml，t=7.280，P〈0.01）。RA FLSs与HUCMSC共培养后，共培养组sFlt1浓度显著高于HUCMSC组[（17.26±6.92）ng/ml和（8.19±3.64）ng/ml，t=3.985，P=0.000 7]。结论HUCMSC在炎性细胞因子TNF-α联合IFN-γ刺激下表达sFlt1升高。RA FLSs可能通过分泌炎症因子促进共培养HUCMSC上调sFlt1表达。

异体间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮专家共识

多项临床研究已证实间充质干细胞治疗SLE患者安全且有效。为了规范间充质干细胞的临床应用,专家组对间充质干细胞治疗SLE的适应证、用法、输注次数及细胞数、输注前用药以及输注后合并用药,以及在合并妊娠、感染和肿瘤等情况时的应用制定了推荐意见。

类风湿关节炎小鼠模型骨髓间充质干细胞体外的免疫调节功能

目的 探索类风湿关节炎(RA)模型小鼠自体骨髓间充质干细胞(MSC)体外的免疫调节功能。方法 构建胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型,分离其骨髓MSC体外培养,鉴定细胞表型;同时分离培养正常小鼠的骨髓MSC作为对照。建立小鼠骨髓MSC与小鼠脾细胞共培养体系,流式细胞术检测脾细胞增殖情况。建立小鼠骨髓MSC与小鼠Na6ve CD4^(+)T细胞共培养体系,分别诱导Na6ve CD4^(+)T细胞向Th17细胞或调节性T细胞(Treg细胞)分化,流式细胞术检测Th17细胞或Treg细胞比例,ELISA法检测细胞上清液IL-17A的水平。结果 体外分离培养的骨髓MSC表达干细胞抗原1(Sca-1)、CD105、CD44和CD73,不表达CD11b、CD34、CD45和CD31。共培养实验结果显示正常小鼠与CIA小鼠骨髓MSC在抑制脾细胞增殖方面无统计学差异(P>0.05)。与正常小鼠骨髓MSC相比,CIA小鼠骨髓MSC同样可以抑制Th17细胞分化,减少IL-17A的分泌(P>0.05)。体外实验进一步表明,正常小鼠与CIA小鼠骨髓MSC在促进Treg细胞分化方面无统计学差异(P>0.05)。结论 RA动物模型自体骨髓MSC在体外抑制淋巴细胞增殖、调节Th17细胞或Treg细胞分化等方面无明显异常,骨髓MSC的免疫调节功能可能与RA体内的炎症环境密切相关。