木薯MeHsfB3b转录因子与MeFKBP20蛋白互作关系验证

热激转录因子MeHsfB3b是调控木薯抗细菌性枯萎病的重要节点,前期通过酵母双杂交技术获得MeHsfB3b的候选互作蛋白MeFKBP20,该蛋白属于FKBP型肽脯氨酰顺反异构酶基因家族。本研究克隆获得MeFKBP20基因全长为561 bp,编码186个氨基酸,蛋白质分子质量为19.99 kDa,具有FKPB_C结构域。表达模式分析发现:MeFKBP20基因在木薯成熟叶片及根部高表达,在幼叶和叶柄的表达量较低;并能够迅速响应病原菌XpmCHN11诱导,持续保持较高的表达丰度,推测其参与了木薯响应病原菌侵染的过程。利用酵母双杂交点对点、双分子荧光互补实验证明MeHsfB3b蛋白通过在201~241 aa区域与MeFKBP20蛋白作用。本研究结果有助于进一步解析MeHsfB3b基因调控木薯对细菌性枯萎病的抗病机理。

城市公园的改造与提升——沭阳南山公园

作品介绍:本设计以“开放、生态、多元”为原则,提升改造的目标是使更多的城市居民能像使用自家客厅一般使用这个公共场所,将原来的水泥地改为海绵草地,根据不同人群的需求设置运动场、休闲廊架、观景平台、阶梯广场等休憩娱乐场所,将场地变为一个可观可游的城市公园。

木薯MYB转录因子基因MeMYB60表达特征分析及其互作蛋白筛选

Myeloblastosis(MYB)类转录因子在植物对非生物胁迫的响应过程中起重要调控作用。本研究在分析栽培木薯MYB家族成员表达模式的基础上,筛选并克隆到了一个R2R3-MYB转录因子基因MeMYB60。基因表达特性分析表明,该基因在叶片特异表达,受干旱、低温负调控,同时对ABA处理也有响应。启动子活性分析发现,MeMYB60可以在保卫细胞表达,预示着该转录因子基因的表达可能与木薯气孔开闭调节有关。MeMYB60编码蛋白主要定位于细胞核中,具有转录激活活性,其转录激活结构域在蛋白C端第194~343氨基酸残基范围内。以MeMYB60蛋白N端第1~194氨基酸残基片段为诱饵,从干旱胁迫后木薯叶片的cDNA文库中筛选到18种可能与MeMYB60互作的蛋白,酵母双杂确定了MeCatlase1和MeCatalase2分别与MeMYB60存在互作关系。本研究为深入研究转录因子MeMYB60在木薯响应非生物胁迫过程中的功能并解析其调控网络奠定了基础。

木薯MeHsfB3a基因的克隆及其抗细菌性枯萎病功能鉴定

木薯是热带地区重要的粮食作物,菜豆黄单胞菌属木薯细菌性枯萎病致病种(Xanthomonas phoseoli pv.manihotis,Xpm)侵染引起的细菌性枯萎病是木薯的重要病害。挖掘、鉴定木薯抗Xpm病原菌侵染的基因,并解析其抗病机制有利于开发木薯抗病种质。植物热激转录因子(heat shock transcription factors,Hsfs)在植物抵御生物胁迫和非生物胁迫的过程中发挥重要作用。本研究利用RT-PCR技术从‘华南8号’(‘SC8’)木薯品种克隆热激蛋白转录因子基因MeHsfB3a的全长。生物信息学分析发现MeHsfB3a含有2个外显子和1个内含子,全长729 bp,编码242个氨基酸,蛋白理论相对分子质量27.9 kDa,理论等电点pI为7.59,理论不稳定系数为56.86,属于不稳定蛋白质,亲水性平均指数-0.880,表明该蛋白水溶性较好,脂溶指数为65.98。亚细胞定位预测该蛋白可定位于细胞核。利用qRT-PCR技术分析发现MeHsfB3a在嫩叶、成熟叶、顶芽、叶柄、块根、须根均有表达,在成熟叶中的表达量最高,在其他器官中的表达量较少。采用Xpm HN11病原菌侵染木薯‘SC8’叶片0、3、6 h和1、3、6 d后分析MeHsfB3a表达,发现1 d以后该基因的表达显著提高。说明MeHsfB3a参与‘SC8’木薯对Xpm HN11病原菌的响应过程。采用VIGS技术沉默木薯‘SC8’的MeHsfB3a基因,该基因沉默效率降低了68.26%~82.44%。接种Xpm HN11病原菌至沉默植株叶片,于接菌0、3、6 d进行发病情况分析,发现沉默植株的病斑面积显著高于对照。本研究鉴定了热击蛋白转录因子基因MeHsfB3a参与木薯抗Xpm HN11病原菌侵染的过程,有助于进一步解析木薯对细菌性枯萎病的抗病机理。

木薯MeCML24与MeSAUR1互作调控MeAGPS1a表达的功能验证

木薯是华南地区重要的经济作物,其块根富含淀粉。解析木薯块根淀粉合成调控机理将有助于木薯高产、高淀粉分子改良。AGPase由大亚基和小亚基构成,催化1-磷酸葡萄糖和ATP形成腺苷二磷酸葡萄糖和焦磷酸,其中腺苷二磷酸葡萄糖为淀粉生物合成的底物。AGPase酶是植物淀粉合成的限速酶,提高AGPase酶活性,有利于作物淀粉的积累及产量的提高。木薯MeAGPS1a基因编码的小亚基是AGPase的催化中心,前期研究表明生长素响应因子MeSAUR1作为转录因子正调控MeAGPS1a基因表达,酵母双杂交筛选木薯cDNA文库显示钙调素类似蛋白(CaM-like,CML)成员MeCML24为MeSAUR1的候选互作蛋白。为了确定MeCML24和MeSAUR1的互作关系,本研究从‘SC8’木薯品种基因组克隆了MeCML24基因,该基因的CDS区长度为492 bp,编码163个氨基酸。MeCML24蛋白的理化性质及二级结构分析显示,该蛋白理论等电点pI值4.38,属于亲水性蛋白,α-螺旋占52.76%,无规则卷曲占30.06%,β-转角结构占11.04%。构建酵母双杂交载体BD-MeCML24,自激活实验表明MeCML24不具有自激活活性。酵母双杂交点对点实验发现,共转AD-MeSAUR1和BD-MeCML24质粒的酵母菌株在SD/TLHA+x-α-gal培养基上变蓝,表明MeCML24与MeSAUR1存在互作关系。采用双分子荧光互补(BiFC)实验,将融合蛋白MeSAUR1-nEYFP和MeCML24-cEYFP在烟草叶片中共表达,在激光共聚焦显微镜下检测出黄色荧光蛋白EYFP的荧光信号,进一步证明了MeCML24与MeSAUR1互作。最后利用双荧光素酶实验证明MeCML24与MeSAUR1互作负调控MeAGPS1a基因表达。本研究揭示了木薯MeSAUR1与MeCML24协同调控MeAGPS1a基因表达的机制,发现钙调素类似蛋白MeCML24参与调控木薯块根淀粉合成关键基因MeAGPS1a表达,为利用分子生物学技术培育木薯优良品种提供了理论基础。

“裸聊”背后的陷阱

孙思远也没多想就点击了链接。在进一步的聊天中,“可儿”不但主动提出要做他的情人,还说要和他视频“玩点刺激”的。深夜,孙思远通过某社交App认识了主动热情的“美女”网友,而且网友还要求和他开视频裸聊,孙思远以为自己走了“桃花运”。

基于“金课”建设的种子学课程研究性教学改革探究

研究性教学在引导学生主动思考、提高学生综合运用知识和解决问题的能力等方面起到积极作用。本文以种子学理论课程为例,结合研究性学习教育理念,分别从精选教学内容、创新教学方法、引入专题学习和多元化考核方式等方面入手,系统论述了研究性教学在种子学理论课程教学中的应用。实践表明,将研究性教学手段应用于该课程的实验教学中,取得了较好的教学效果。

教师资格认证下师范生教育实践能力培养模式探索

以学科教学知识（pedagogical content knowledge,PCK）为基础,通过立体化核心课程群和＂观摩—见习—研习—实训—实习＂五阶段一体化实践教学体系构建,引入教师职业资格标准,师范生将已有的化学学科专业知识、技能和教育科学知识运用于中学化学教育、教学和研究工作;建立可观察、可测量、可操作的科学的成长档案袋,达到系统全面地提升师范生教育实践能力的目的,实现教育实践能力培养模式的创新探索。

木薯己糖激酶MeHXK5的催化功能鉴定

己糖激酶是植物体内催化己糖磷酸化的关键酶,参与植物的生长发育过程。前期已克隆获得了主要在木薯花中表达的己糖激酶基因MeHXK5。该研究主要利用己糖激酶酵母突变菌株YSH7.4-3C进行酵母功能互补实验,验证MeHXK5催化己糖磷酸化的功能。结果表明:转pDR195-MeHXK5载体的YSH7.4-3C酵母可以在以葡萄糖或果糖为唯一碳源的培养基中生长,表明MeHXK5能催化己糖磷酸化为酵母的生长提供碳水化合物和能量。该研究结果为进一步研究MeHXK5参与木薯的开花过程的生理功能奠定了基础。

3个不同木薯品种的代谢产物解析

本研究以3种木薯品种(‘KU50’‘SC205’和‘SC9’)块根为实验材料,采用色谱-质谱联用非靶向代谢组学技术,对8月龄木薯块茎的代谢物进行差异性分析。通过鉴定共获得77个差异代谢物,主要涉及糖及其衍生物、氨基酸、有机酸等,‘KU50’和‘SC205’两个品种的优势代谢产物(相对含量>15%)均为蔗糖,且二者含量基本相当,‘SC9’的优势代谢产物为蔗糖与果糖;‘SC9’中蔗糖、柠檬酸相对含量显著低于‘KU50’和‘SC205’,但果糖、半乳糖、葡萄糖高于二者。利用主成分分析(PCA)发现,3个木薯品种块根代谢物组成结构差异性显著,获得差异显著的33种代谢物中主要涉及糖类及其衍生物、有机酸及其衍生物、生物碱、核苷酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物等5个类别。通过GO、KEGG、通路富集分析共注释到14个差异显著性代谢途径,其中,共有16个代谢物富集于氨酰tRNA生物合成途径,9个富集于精氨酸和脯氨酸代谢途径,3个富集于氰基氨基酸代谢途径。本研究通过对3个木薯品种块根代谢物的种类、相对含量、主要代谢物和显著差异代谢物进行分析,阐明了不同木薯品种淀粉品质形成的物质基础。可为后期更好地进行木薯品种改良、品种选育及木薯食品加工提供参考。

木薯转化酶抑制子MeINH3基因的克隆及生物信息学分析

转化酶抑制子调控转化酶的活性,在植物的糖代谢过程中具有重要作用。为了研究木薯的转化酶抑制子,本实验利用木薯基因组数据库分析及RT-PCR方法,从木薯中分离了1个木薯转化酶抑制子MeINH3的cDNA序列。MeINH3序列长度为564 bp,包含528 bp的完整开放阅读框,编码127个氨基酸,N端有16个氨基酸残基的信号肽,4个保守的半胱氨酸残基可形成两个二硫桥。亚细胞定位预测表明,MeINH3蛋白定位于胞外。根据生物信息学分析结果,推测其可能抑制木薯细胞壁转化酶活性。

非绿质体的分裂增殖调控与展望

质体分裂在绿色及非绿组织中广泛存在。本文综述了质体分裂研究现状,特别是非绿质体方面取得的成果和进展。质体分裂至少受由质体与蓝藻内共生进化而来的内部机制及宿主进化而来的外部机制调控,是一个高度集成的多蛋白参与的过程。随着植物由低等到高等的进化,分裂蛋白种类也逐渐增加,发掘与质体分裂有关新基因仍是当前研究热点。质体在不同细胞中的分化存在差异,不仅质体形态和功能存在着组织特异性,质体的分裂调控机制也可能存在着差异。质体分裂特别是非绿质体与代谢物积累的研究,对作物淀粉品质的改良具有潜在的应用价值。

木瓜秀粉蚧为害对不同木薯品种次生代谢物质含量的影响

次生代谢物质在植物防御植食性害虫时发挥重要作用,但目前尚无次生代谢物质与木薯品种抗虫相关性的报道。本研究系统开展了木瓜秀粉蚧为害前后不同木薯品种叶组织中总酚、丙二醛、单宁等次生代谢物质含量的差异分析。结果表明,与为害前相比,木瓜秀粉蚧为害1、4、8 d后,感虫木薯品种‘BRA900’‘面包’‘SC205’和‘瑞士T7’叶组织中总酚与丙二醛含量无显著差异,单宁含量则显著降低,而抗虫木薯品种‘缅甸’和‘C1115’叶组织中总酚和单宁含量显著增加,丙二醛含量显著降低。抗虫木薯品种的总酚含量在粉蚧为害前显著低于感虫木薯品种,而粉蚧为害1、4、8 d后显著高于感虫木薯品种;抗虫木薯品种丙二醛含量在为害前与感虫木薯品种无显著差异,粉蚧为害1、4、8 d后显著低于感虫木薯品种;抗虫木薯品种单宁含量在为害前后均显著高于感虫木薯品种。相关性分析发现,木薯对木瓜秀粉蚧的抗性与叶组织中总酚含量和单宁含量显著正相关,与丙二醛含量显著负相关。本研究初步阐明基于次生代谢物质总酚、丙二醛、单宁的木薯品种对木瓜秀粉蚧的抗性机理。

5种南药植物提取物对致病疫霉的抑制作用

为了筛选防治晚疫病有效的植物资源,测试了5种南药植物粗提物及其中九里香粗提物5种萃取组分对致病疫霉的抑制作用。结果表明,九里香粗提物抑菌活性较高,对抑制致病疫霉菌丝生长、休止孢萌发及休止孢侵染离体叶片的EC50值分别为6.51 mg/mL、3.77mg/mL和19.56 mg/mL。九里香粗提物萃取组分中,石油醚萃取组分活性较高,对抑制致病疫霉菌丝生长、休止孢萌发及休止孢侵染离体叶片的EC50值分别为2.87 mg/mL、1.85 mg/mL和8.67 mg/mL。九里香乙醇粗提物和石油醚萃取组分对晚疫病的防效较好。

木薯MeSWEET10a基因启动子EBE区编辑载体的构建及验证

木薯细菌性枯萎病(cassava bacterial blight,CBB)是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种(Xanthomon asaxonopodis pv. Manihotis, Xam)引起的木薯重要病害,影响木薯产量,我国主栽的木薯品种均不抗Xam。Xam分泌的TAL20效应蛋白可结合木薯MeSWEET10a基因启动子的EBE区,激活该基因表达,促进糖类运输至Xam侵染的部位,为病菌的繁殖提供碳水化合物。本研究利用在线软件CRISPR-P v2.0设计EBE区的基因编辑靶点,构建CRISPR/Cas9基因编辑质粒pCAMBIA1301-Cas9-EBE-sgRNA。将重组质粒转化LBA4404根癌农杆菌,利用农杆菌介导法侵染木薯脆性胚性愈伤组织。提取侵染和未侵染的木薯脆性胚性愈伤组织DNA,PCR扩增靶点EBE区及潜在的脱靶位点,并进行Sanger测序分析编辑效果。结果发现EBE区被成功编辑,且没有脱靶现象。本研究有助于进一步获得MeSWEET10a基因启动子EBE区域的木薯突变体,以增强木薯抗细菌性枯萎病的能力。

木薯MeSAP13基因的克隆及其抗细菌性枯萎病功能鉴定

胁迫相关蛋白(stress-associated proteins, SAPs)在植物对胁迫应答和胁迫调控中起重要作用。木薯是我国重要的粮食作物和经济作物,细菌性枯萎病(cassava bacterial blight, CBB)已严重危害我国木薯产业的健康发展。为了探讨木薯MeSAP基因在抗细菌性枯萎病中的作用,本研究克隆了我国主栽木薯品种‘华南8号’(SC8)的MeSAP13基因,分析该基因在细菌性枯萎病病原菌侵染时的表达模式及其编码蛋白的基本特性。利用基于木薯花叶病毒介导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS)技术抑制了MeSAP13基因在木薯SC8叶片中的表达,通过接种细菌性枯萎病病原菌Xpm HN11对MeSAP13的抗病功能进行抗性鉴定。结果发现:在病原菌Xpm HN11侵染叶片3 d后MeSAP13基因表达量显著上调,说明木薯MeSAP13基因能够响应病原菌的侵染;在VIGS载体转化木薯叶片40 d后发现,与转化pCsCMV-A载体的对照叶片相比,MeSAP13在转化pCsCMV-MeSAP13叶片中的表达量显著下调了40%~60%,表明通过VIGS技术成功抑制了MeSAP13在木薯叶片中的表达。将病原菌Xpm HN11接种至MeSAP13基因沉默叶片和对照植株叶片,发现MeSAP13基因沉默植株接种叶片的水渍状病斑面积显著大于对照植株接种叶片。分析侵染后0、3、6 d病原菌Xpm HN11的繁殖情况发现,在侵染后3 d和6 d的MeSAP13基因沉默植株接种叶片中,其病原菌数量显著高于对照植株接种叶片。以上研究结果表明,抑制MeSAP13基因的表达,降低了木薯对细菌性枯萎病的抗性。

木薯MeLHCB4基因的克隆及表达分析

本研究采用RT-PCR技术克隆了木薯叶绿素a/b结合蛋白基因MeLHCB4编码区序列。通过生物信息学对其基因结构、基因编码蛋白的理化性质等进行分析,并对不同物种的LHCB4氨基酸序列进行比对和构建进化树。结果表明,木薯MeLHCB4基因的CDs序列全长858 bp,编码285个氨基酸,蛋白理论相对分子质量约为30.9 kDa,理论等电点为5.47,该蛋白属于稳定的亲水性蛋白,预测该蛋白可能定位于细胞核或细胞质中。实时荧光定量PCR检测该基因的表达模式发现,MeLHCB4基因主要在木薯叶片和茎中表达,受到茉莉酸甲酯(JA)、水杨酸(SA)和乙烯前体(ACC)等激素的诱导表达,推测其可能参与了JA、SA、ACC信号途径。细菌性枯萎病病原菌侵染木薯叶片12 h后,MeLHCB4的表达量显著提高,表明MeLHCB4参与了木薯对病原菌的响应过程。

木薯MeNOSIP与MeRbohD蛋白的互作验证及其对外源激素的响应

为了解木薯(Manihot esculenta)MeRbohD在抗病途径中的功能,笔者在获得MeRbohD候选互作蛋白MeNOSIP(nitric oxide synthase-interacting protein,一氧化氮合酶互作蛋白)的基础上,通过RT-PCR克隆获得MeNOSIP基因编码区序列,并进行生物信息学分析。结果表明,MeNOSIP的CDs序列全长918 bp,编码含305个氨基酸的多肽,属于不稳定的亲水类蛋白质,亚细胞定位预测MeNOSIP在细胞膜上表达。采用酵母杂交验证发现,MeRbohD与MeNOSI真实互作。MeRbohD和MeNOSIP在JA,SA,ABA诱导下基因均上调表达;ABA处理下,MeRbohD和MeNOSIP基因表达变化趋势一致,推测它们可能共同参与了由ABA介导的抗逆通路。

失控的加油卡

欢欣公司要将几辆闲置车辆租赁给分公司,按照流程,车辆对应的加油卡副卡也应被注销,黄真玉需将副卡上剩下的几万元余额转还到加油卡主卡上,可他却动了别的心思。

木薯MeRbohE基因的克隆及表达分析

从木薯中克隆了1个Rboh基因—Me Rboh E,该基因全长5 397 bp,开放阅读框2 775 bp,编码925个氨基酸,编码的蛋白分子量为104.8 KDa,理论等电点为8.90,蛋白结构具有典型的植物Rboh基因家族特征。q RT-PCR结果表明,Me Rboh E基因在木薯组培苗的根中表达量最高,茎中次之,叶中最低;在受到低温(4℃)、高盐(300 mmol·L-1Na Cl)和100 mmol·L-1ABA诱导后,表达量呈现不同程度的上调,表明该基因能应答非生物胁迫。