肝癌细胞自分泌外泌体通过TGF-β1调控自身细胞学行为

目的:研究肝癌Huh7细胞外泌体促进自身转移的机制。方法:培养肝癌Huh7细胞,分离提取外泌体并进行鉴定。将分离的外泌体与Huh7细胞共培养,Transwell比较细胞迁移和侵袭能力;检测外泌体中TGF-β1水平;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TGF-β1、SMAD2/3、EMT相关分子表达。结果:提取的外泌体经Western blot检出CD63、TSG101条带;透射电镜检测出双侧膜结构小体;纳米粒径分析显示颗粒大小集中在100 nm左右。外泌体中检出TGF-β1。外泌体与Huh7细胞共培养,免疫荧光显示外泌体成功进入Huh7细胞。与对照组相比,共培养组细胞迁移和侵袭大幅增加,TGF-β/Smad通路相关分子活化,上皮标志物E-钙黏蛋白、p-Smad7表达下降,间充质标志物-波形蛋白表达升高。结论:肝癌Huh7细胞自分泌的外泌体通过运输TGF-β1上调TGF/Smad通路进而影响肝癌转移,探明了肝癌发展机制,为肝细胞癌治疗提供了新思路。

miR-148a-3p靶向调控FLOT2促进肝癌细胞迁移、侵袭及增殖

目的:探究脂筏特征蛋白2(Flotillin2,FLOT2)对肝癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响及相关机制。方法:通过ENCORI数据库和细胞功能学实验证实FLOT2在肝癌中的表达情况以及对肝癌细胞生物学行为的影响;TargetScan中检索可能调控FLOT2的miRNA,CancerMIRNome分析miR-148a-3p在肝癌中的表达和对肝癌患者预后的影响,qRT-PCR和Western Blot检测过表达miR-148a-3p后肝癌细胞中FLOT2的表达水平,双荧光素酶实验验证miR-148a-3p与FLOT2的靶向调控关系;将细胞分为pcDNA组、pcDNA-FLOT2组以及pcDNA-FLOT2+miR-148a-3p mimics组,Transwell实验以及EdU实验检测三组细胞迁移、侵袭和增殖能力。结果:FLOT2在肝癌中高表达,高表达FLOT2的肝癌患者预后更差,过表达FLOT2增强肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力;miR-148a-3p在肝癌组织中低表达,与肝癌患者预后相关,和FLOT2呈负相关;过表达miR-148a-3p降低FLOT2的mRNA和蛋白水平,双荧光素酶实验表明miR-148a-3p靶向调控FLOT2基因;过表达miR-148a-3p抑制FLOT2促进肝癌细胞迁移、侵袭和增殖的能力。结论:miR-148a-3p靶向调控FLOT2基因促进肝癌细胞迁移、侵袭及增殖。

新型冠状病毒感染的肺炎持续阳性患者的中西医结合治疗一例

新型冠状病毒感染的肺炎(COVID-19)疫情爆发后被世界卫生组织定义为国际关注的突发公共卫生事件。国家卫生健康委员会在数月内发布了多个版本的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》[1],第三版以后均包含了中医诊疗方案,并且不断更新内容。在中西结合诊疗方案指导下,大批患者接受治疗后符合治愈标准顺利出院。但是在临床实践中我们还常遇到一类特殊人群。这部分患者的病情程度虽然属普通型,经过治疗无明显症状,影像学检查正常,但核酸检测长时间阳性,住院时间21 d以上,总病程超过30 d,超出一般病毒感染自限性痊愈时间。这类人群是治疗的难点之一,在此我们回顾1例此类病例总结经验与教训,以供借鉴。

72例社区获得性肺炎误诊为肺结核的研究

目的探讨社区获得性肺炎误诊肺结核的因素,提高诊断率,减少误诊。方法回顾我院2011年5月至2013年8月收治386例社区获得性肺炎患者,对其中误诊为肺结核的72例患者,对比其胸部X线正侧位片诊断结果;胸部CT影像学诊断结果;以及依据病史、临床症状,结合胸部X线、胸部CT影像学诊断的结果,结合治疗后的疗效。进行比较,分析三者误诊率。结果 72例误诊患者,初诊时,仅依靠胸部X线正侧位片分析,误诊69例;仅依靠胸部CT,误诊53例;依靠病史、临床症状,结合胸部X线片、胸部CT等分析,误诊23例。三者比较差异有统计学意义(胸片与胸部CT比较χ2=13.73,P<0.01;胸部CT与结合临床比较χ2=25.08,P<0.01)。治疗2周后,仅依靠胸部X线正侧位片分析,误诊23例;仅依靠胸部CT,误诊16例;二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。依靠病史、临床症状,结合胸部X线片、胸部CT等分析,误诊7例。依靠胸部CT诊断与此结合临床诊断比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论社区获得性肺炎,由于抗生素的滥用,患者就诊时,肺炎处于不同间段,缺乏典型X线表现,单纯依靠胸片、胸部CT,如肺结核无增值的结节、索条、钙化影及空洞影很难鉴别。临床上应该根据病史、症状、体征,结合胸部X线片、胸部CT,综合分析,才能减少误诊,尽早准确诊断,及时有效治疗。

CCDC137基因在肝细胞癌组织中表达的临床意义及其对MHCC97H细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:分析卷曲螺旋结构域蛋白137(CCDC137)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系,探讨敲低CCDC137基因对肝癌MHCC97H细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC数据集,获得CCDC137基因表达谱和临床资料信息,利用生物信息学方法分析CCDC137基因在HCC组织中的表达水平与患者临床病理指标的相关性以及对预后的影响;用基因集富集分析(GSEA)预测CCDC137基因在HCC中可能调控的信号通路,用Kaplan-Meier法及Log-Rank检验进行生存分析,并运用Cox比例风险回归模型分析影响患者预后的危险因素。采用小干扰RNA技术抑制肝癌MHCC97H细胞中CCDC137基因的表达,用qPCR法、WB法、CCK-8法及Transwell实验分别检测干扰后细胞CCDC137 mRNA和蛋白表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:在TCGA数据库检索到的371例HCC患者中,CCDC137 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),其高表达与肿瘤组织学分级、癌组织分期、T分期等存在显著关联(OR=0.014、0.007、0.047,均P<0.05),CCDC137高表达的患者OS明显低于CCDC137基因低表达的患者(P<0.05),多因素Cox回归分析提示CCDC137基因可作为HCC患者的独立预后因子。GSEA结果发现,CCDC137基因高表达的样本存在碱基切除修复和剪接体等多个通路基因集的富集(P<0.01,FDR<0.05)。敲低CCDC137基因后,MHCC97H细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。结论:CCDC137基因在HCC组织中高表达,其高表达与HCC的发生发展及预后不良有关。敲低CCDC137基因表达抑制MHCC97H细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

复方鳖甲软肝片治疗63例间质性肺炎的临床疗效

目的:探讨复方鳖甲软肝片治疗间质性肺炎的疗效。方法:选择我院2007年3月至2012年3月收治的63例间质性肺炎患者,将其随机分为二组,治疗组33例,对照组30例,均采用糖皮质激素甲泼尼龙、阿托伐他汀钙等治疗,治疗组加用复方鳖甲软肝片治疗,治疗6月,复查胸部CT,观察病灶吸收情况:病灶吸收1/2以上为有效,1/4以上为好转,无变化或增多为无效;观察使用糖皮质激素后水钠潴留出现情况:出现明显向心性肥胖为有副作用,仅四肢轻度浮肿为轻度水钠潴留;无四肢轻度浮肿为无副作用。结果:本组63例患者,治疗结束时,胸部CT病灶吸收情况:治疗组33例,显效21例,好转9例,无效3例;对照组30例,显效16例,好转5例,无效9例;两组病灶吸收效果显著,差异无统计学意义(P>0.05);两组显效及好转例数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。使用糖皮质激素后水钠潴留出现情况:治疗组出现明显副作用9例,轻度副作用11例,无副作用13例。对照组出现明显副作用18例,轻度副作用8例,无副作用4例,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于间质性肺炎患者,在糖皮质激素甲泼尼龙、阿托伐他汀钙等治疗的基础上加用复方鳖甲软肝片治疗,效果好,糖皮质激素副作用出现少,值得推广。

慢性阻塞性肺疾病缓解期患者肺康复疗效观察

目的观察慢性阻塞性肺疾病患者缓解期肺康复治疗效果。方法选取COPD缓解期患者60例，遵循随机分配原则，分为观察组、对照组。对照组采取常规治疗联合饮食调节治疗；观察组在此基础上加入肺康复治疗。对比2组患者治疗效果。结果经过治疗后，观察组患者FEV1(1.9±0.4)L、FVC为(2.7±1.2)L、FEV1占预计值64%、FVC占预计值67%、FEV1/FVC为67%，均明显优于对照组(P＜0.05)。结论COPD缓解期患者应用肺康复治疗能够有效改善患者肺功能指标与活动耐力，值得推广。

四种氟喹诺酮类药物治疗复治耐多药肺结核对比研究

目的 比较和评价环丙沙星 (C)、氧氟沙星 (O)、左氧氟沙星 (V)、司帕沙星 (SP) 4种氟喹诺酮类药物治疗复治耐多药肺结核 (MDR TB)的临床应用价值。方法 将经细菌学证实的 16 8例复治耐多药肺结核患者随机分入对照组和 4个研究组 ,同期进行临床研究。对照组方案为 3HRZEAK/5HL2 ZE/ 4HL1E ,4个研究组系在对照组方案基础上在前 8月分别加用C、O、V、SP。分析比较满疗程及随访 2年的痰菌、X线变化及药物不良作用。结果 满疗程时 ,含C、O、V、SP 各组痰菌阴转率分别为 70 .0 %、73.3%、86 .7%、93.5 % ,对照组为 4 0 .0 % ;X线病灶有效率分别为 86 .6 %、86 .6 %、90 .8%、90 .3% ,对照组为 6 0 .0 % ;空洞闭合率分别为 5 3.3%、5 8.8%、85 .7%、70 .6 % ,对照组为18.8%。经统计学处理 ,上述 3项指标各研究组均优于对照组 (P <0 .0 1) ;各研究组间的痰菌阴转率C组与O组效果相近 (P >0 .0 5 ) ,V组与SP 组效果相近 (P >0 .0 5 ) ;V或SP 组优于C或O组 (P <0 .0 5 )。X线病灶有效率和空洞闭合率各研究组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。治疗期间未见严重不良反应。随访 2年 ,各研究组痰菌复发率分别为 5 .0 %、5 .0 %、4 .0 %、3.8% ,对照组为 35 .7% ,各研究组与对照组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。

重症及危重症甲型H1N1流感病毒性肺炎的胸部影像学表现

目的探讨重症、危重症甲型H1N1流感病毒性肺炎的胸部影像特征。方法 29例经病毒核酸检验确诊的重症、危重症甲型H1N1流感病毒性肺炎患者,其中,22例经胸部X线摄影,12例经胸部CT扫描,8例同时接受了上述两种方法检查。对所有患者的临床与影像资料进行了回顾性分析,并比较了X线胸片与CT的诊断潜能。结果 22例经胸部摄影患者表现为肺纹理增重,两肺野内、中带有边界模糊的斑片状致密影。12例经胸部CT扫描的患者表现为两肺野散在分布的斑片状致密影及磨玻璃样密度影,其中6例X线胸片未见病变。同时,CT显示胸腔积液与心包积液各2例。结论重症、危重症甲型H1N1流感病毒性肺炎的影像学表现是以两肺斑片状及磨玻璃样密度影为主,CT可以发现两肺上野及外带的较淡致密影,对判定病变的有无及累及范围明显优于X线胸片。

A型肉毒素治疗三叉神经痛的研究进展

三叉神经痛特征主要表现在面部的电灼烧样疼痛、针扎样疼痛、刀刮样疼痛、破裂样疼痛等。病情发作时间不定,最常见的疼痛发作时长为几秒或者1~2分钟,之后疼痛会得到缓解,恢复正常。但随着病情的加重,不仅会有发病次数和发病时间的上升,且每次发病的严重性也会增加,严重时患者的脸部会产生非常剧烈的痛感,甚至更有患者因此而影响生活饮食和日常的语言交流,表现在无法张口,脸部剧烈的痛感极大地影响患者的自理能力。关于神经痛的发病机制,传统而经典的说法是:三叉神经纤维发生异常,自发放出可引起痛觉的异常灼烧样电信号。这是因为三叉神经长期被血管压迫导致脱髓鞘或发生恶性的髓鞘化,但更加详细的作用仍然在探索之中。已有科学数据显示A型肉毒素对三叉神经痛具有很好的疗效作用,但是其中的作用原理还需要长时间的研究与探讨,本文即从A型肉毒素治疗三叉神经痛的治疗机制、治疗效果、不良反应等三方面进行综述。

阿托品与氯丙嗪配合治疗肺结核咯血临床观察

咯血是肺结核病人的一个常见症状.作者从临床工作实践中体会到应用阿托品、氯丙嗪配合抗纤维蛋白溶解的药物治疗慢性纤维空洞型肺结核咯血,疗效满意.现报告如下.

环丙沙星和氧氟沙星治疗复治耐多药肺结核的研究

结核菌耐药菌株的不断产生和增加,特别是耐多药结核病(MDR-TB)已成为结核病防治的难点之一.……

细粒棘球蚴感染诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR抑制炎症反应

目的探究CD73/腺苷/腺苷A2A受体(A2AR)通路在细粒棘球蚴抑制巨噬细胞炎症反应中的作用及机制。方法取健康C57BL/6小鼠腹腔注射无菌淀粉肉汤(0.5 ml/只),3 d后抽取腹腔液,分离巨噬细胞,以1×10^(6)/ml接种于6孔板中,待细胞贴壁后,加入细粒棘球蚴囊液(终浓度0.8 mg/ml)培养0、6、12、18和24 h后,qRT⁃PCR检测CD73、A2AR、肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)和精氨酸酶1(Arg⁃1)的相对转录水平,流式细胞术检测CD73的表达量,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测A2AR、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2(p⁃ERK1/2)的表达量。取分离的巨噬细胞接种于6孔板(1×10^(6)个细胞/孔),囊液组、给药组和对照组(每组3孔)分别加入囊液(终浓度0.8 mg/ml)、囊液(终浓度0.8 mg/ml)和药物(腺苷受体抑制剂SCH58261,终浓度50μmol/L),以及等量培养基,培养24 h后,采用qRT⁃PCR检测TNF⁃α、Arg⁃1的相对转录水平,Western blotting检测ERK1/2、p⁃ERK1/2的表达量。取6~8周龄健康C57BL/6雌鼠,感染组小鼠于肝被膜下注射5000个细粒棘球蚴原头节(20μl/只),健康组小鼠不作处理。1个月后,两组各取6只小鼠,取肝脏,石蜡包埋后制备切片,HE染色观察肝组织病变情况,免疫组织化学染色检测A2AR的表达情况,流式细胞术检测包囊近端和远端肝组织的CD73表达情况。取感染小鼠,给药组(8只)和溶剂组(8只)小鼠分别腹腔注射腺苷受体抑制剂(SCH58261)1 mg/(kg•d)和等量的PBS,健康组小鼠(8只)不作处理,22 d后,称量小鼠的体质量,以及肝脏、脾脏、肾脏和心脏的质量,计算各脏器与体质量的比值;取小鼠肝组织,石蜡包埋后制备切片,HE染色观察包囊周围炎性细胞浸润情况。两组间数据比较采用独立样本t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果巨噬细胞经细粒棘球蚴囊液处理后,CD73 mRNA相对转录水平,18 h组(1.66±0.17)和24 h组(2.01±0.15)均高于0 h组(1.00±0.09)(t=3.35,P<0.05;t=5.83,P<0.01);流式细胞术检测结果显示,CD73+巨噬细胞占比,18 h组[(2.74±0.43)%],高于0 h组[(1.53±0.10)%](t=4.72,P<0.01)。6、12、18、24 h组A2AR mRNA的相对转录水平分别为1.00±0.14、1.02±0.02、0.72±0.08、1.03±0.03,均高于0 h组(0.29±0.03)(t=4.84、17.55、5.21、15.26,均P<0.01);Western blotting结果显示,6、12、18、24 h组A2AR蛋白相对表达量分别为1.22±0.05、1.32±0.02、1.40±0.05、1.46±0.04,均高于0 h组(1.00±0.00)(t=5.89、18.35、9.14、15.06,均P<0.01)。TNF⁃αmRNA的相对转录水平,6、12和18 h组分别为1.00±0.04、0.31±0.03、0.12±0.01,均高于0 h组(0.01±0.00)(t=22.37、11.33、11.48,均P<0.01)。Arg⁃1 mRNA的相对转录水平,18 h组(0.69±0.09)和24 h组(2.10±0.07)均高于0 h组(0.004±0.00)(t=7.61、28.64,均P<0.01)。Western blotting结果显示,6、12、18 h组p⁃ERK1/2蛋白的相对表达量分别为3.07±0.71、1.68±0.18、1.43±0.14,均高于0 h组(1.00±0.00)(t=4.15、5.40、4.50,均P<0.05),且6 h组高于18 h组和24 h组(0.97±0.34)(t=3.23、3.80,均P<0.05)。囊液组和给药组TNF⁃αmRNA的相对转录水平分别为0.85±0.05和1.56±0.13(t=5.13,P<0.01);囊液组Arg⁃1 mRNA的相对转录水平为147.73±10.06,高于给药组(13.94±1.00)和对照组(59.59±9.82)(t=13.23、6.27,均P<0.01),且给药组的相对转录水平低于对照组(t=4.62,P<0.01);Western blotting结果显示,给药组p⁃ERK1/2的蛋白相对表达量(2.08±0.38)高于囊液组(0.94±0.29)和对照组(1.00±0.00)(t=3.42、4.04,均P<0.05)。HE染色结果显示,感染组小鼠肝组织出现炎性细胞浸润带;免疫组织化学染色结果显示,感染组小鼠肝组织炎症细胞A2AR阳性。流式细胞术检测结果显示,包囊近端肝组织CD73+巨噬细胞占比为(12.31±0.04)%,高于远端的(5.95±2.36)%(t=3.81,P<0.05)。药物处理22 d后,健康组、溶剂组和给药组的小鼠肝脏、脾脏、肾脏、心脏的质量与体质量的比值分别为6.13±0.66、5.90±0.48、5.47±0.87,0.44±0.18、0.41±0.29、0.33±0.10,0.68±0.03、0.64±0.05、0.60±0.09,0.99±0.15、0.77±0.13、0.78±0.19,差异无统计学意义(F=0.95、0.42、1.46、2.02,均P>0.05)。HE染色结果显示,与溶剂组相比,给药组包囊周围炎性细胞增多。结论细粒棘球蚴通过诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR促进炎症抑制因子的分泌来逃避宿主免疫。

咏旱莲

初冬陋室有鲜莲,绿叶红花佐玉颜。雅韵清幽堪入画,馨香一缕赋诗篇。