基于线粒体COⅠ基因序列的梭鲈野生群体遗传结构

为了解梭鲈种群的遗传结构,实验利用线粒体细胞色素c氧化酶Ⅰ亚基(COⅠ)基因部分序列分析了中国6个和中亚2个群体的遗传差异,并与欧洲群体的单倍型序列进行了比较。结果在640 bp的COⅠ基因序列中检测到5个变异位点,定义了7种单倍型,发现Hap1为8个梭鲈群体的共享单倍型,且与欧洲群体的HapA相同,在中国群体所占比例(93.36%)高于中亚群体(72.58%)和欧洲群体(53.85%);Hap2和Hap3是中国群体的特异单倍型,而Hap4~Hap7为中亚群体的特异单倍型。单倍型序列的聚类图和网络图均显示Hap1/A为梭鲈群体的原始单倍型,中国和中亚群体的特异单倍型相对于原始单倍型仅有1~2个位点的变异,属于Hap1/A的亚型,与欧洲群体的特异单倍型具有较大的差异。每个群体检测到1~4种单倍型,斋桑湖(ZS)群体单倍型最多,而中国的腾格里湖(NX)、兴凯湖(XK)和鸭绿江(YJ)群体仅有1个单倍型(Hap1);塔什干(TS)群体的单倍型多样性(Hd)和核苷酸多样性(π)最高(Hd=0.514±0.069;π=0.00079±0.00011),其次是ZS群体,而中国梭鲈群体的多样性参数较低。AMOVA分析结果显示,梭鲈群体间遗传变异占20.74%,群体间遗传分化程度较高(0.15≤F_(st)=0.20736<0.25),TS群体与ZS群体和中国群体间的遗传分化极大(F_(st)>0.25),中国群体中仅黑河(HH)群体与其他群体的遗传分化较大,而中国其他5个群体间无遗传分化。基于群体间遗传距离的系统进化树显示,来自中国的6个梭鲈群体与哈萨克斯坦的ZS群体聚为一支,而乌兹别克斯坦的TS群体独立为一支。研究结果为梭鲈群体的繁殖及放流管理提供了参考。

纳米硒饲料添加剂在盐碱胁迫抗性提升中的应用前景

我国“三北”内陆地区拥有大量的盐碱湖泊、地下咸水和盐碱沼泽等水资源,由于水体具有高盐度、高碳酸盐碱度、高硬度和离子组成复杂等特点,在渔业生产开发利用中存在苗种成活率低、生长缓慢、饲料成本高、经济效益差等问题,严重限制了盐碱水渔业的快速发展。硒(Se)是水生动物必需的微量元素之一,在提高机体免疫和抗逆性等方面的功效显著,有利于缓解盐碱胁迫等非生物胁迫对机体产生的氧化损伤。文章分析了我国盐碱水域渔业开发所面临的难题,纳米硒在清除自由基、提高抗氧化和免疫水平的优势。在盐碱水渔业生产中,纳米硒将有可能作为功能性饲料添加剂,提高鱼类的生产性能和耐盐碱性。

拟赤梢鱼卵巢早期发育与sox3基因cDNA克隆及表达分析

为初步阐明拟赤梢鱼(Pseudaspius leptocephalus)卵巢发育特征及sox3(sry related high mobility group box 3)基因在其卵巢发育过程中的作用,本研究通过组织切片观察了拟赤梢鱼卵巢早期发育过程,利用RACE技术克隆了该鱼sox3基因c DNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术分析了sox3基因在拟赤梢鱼不同组织及性腺不同发育时期的表达模式。结果显示,拟赤梢鱼卵巢在孵化后45 d分化形成,160 d时由Ⅰ期进入Ⅱ期,孵化后360 d,卵巢仍处于Ⅱ期。拟赤梢鱼sox3基因cDNA全长为1800 bp(GenBank登录号:MT952206),编码299个氨基酸,存在保守的HMG(histidine,methionine,glycine-rich)结构域。氨基酸序列比对和系统进化树分析结果显示,拟赤梢鱼SOX3蛋白与斑马鱼(Danio rerio)和翘嘴鲌(Culter alburnus)亲缘关系最近。此外,sox3基因在拟赤梢鱼卵巢中表达量最高,其次是脑和眼睛,在精巢和其他组织中微量表达;在性腺分化过程中,sox3基因在卵巢中表达量显著高于未分化性腺和精巢,在卵巢发育阶段表达量不断升高,而在精巢中持续低水平表达。综上,本研究推测sox3基因主要参与拟赤梢鱼卵巢的分化和发育。

富硒植物乳杆菌对大鳞鲃组织铅积累及氧化应激的影响

为探究铅(Pb)胁迫下富硒植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对大鳞鲃(Luciobarbus capito)的保护作用,利用植物乳杆菌将无机硒转化为纳米硒并添加到鱼饲料中,选用体质量为(75.4±0.9)g的大鳞鲃,设置对照组(control,饲喂基础饲料)、铅组(水中Pb质量浓度为0.2 mg/L,饲喂基础饲料)和富硒铅组(SL+Pb,水中Pb质量浓度为0.2 mg/L,饲喂富硒饲料,纳米硒含量为5 mg/kg,植物乳杆菌含量为3.125×10^(8)CFU/kg),养殖试验共进行14 d,然后采集样本,测定各组大鳞鲃肝、肾、鳃、肠和肌肉中硒和铅的积累量,以及抗氧化酶活力和抗氧化基因表达量。结果表明:当亚硒酸钠质量浓度为200μg/mL时,培养基中植物乳杆菌菌落数量最多,达1.150×10^(7)CFU/mL,纳米硒含量为184μg/mL,电镜下可观察到球形纳米硒颗粒(SeNPs);富硒铅组鱼体各组织中硒的积累量显著高于对照组和铅组(P<0.05),铅组鱼体肝、肾、鳃和肌肉组织中的硒含量均显著低于对照组(P<0.05),但肠道中硒含量显著高于对照组(P<0.05);铅组和富硒铅组鱼体各组织中铅的积累量显著高于对照组(P<0.05),铅组鱼体各组织中铅的积累量依次为鳃>肝>肾>肠>肌肉,富硒铅组鱼体铅的积累量显著低于铅组(P<0.05);富硒植物乳杆菌能够显著提高铅胁迫下鱼体肾和鳃组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性(P<0.05),显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.05);铅组和富硒铅组鱼体肾组织中抗氧化基因Nrf2、HO-1和GPx表达量显著降低(P<0.05),与铅组相比,富硒铅组这些指标显著增加(P<0.05)。研究表明,在含铅水体胁迫下,饲料中添加富硒植物乳杆菌能够降低鱼体各组织中的铅积累量,缓解铅胁迫下鱼体的氧化应激。

盐碱对大鳞鲃血清渗透压、离子含量及鳃丝Na^+/K^+-ATP酶活力的影响

通过室内毒理实验,研究了盐度、碱度以及盐碱交互作用对大鳞鲃(Barbus capito)血清渗透压、血清离子(Na+、K+、Cl、尿素氮)浓度和鳃丝Na+/K+-ATP酶活力的影响。单因子实验中,随着含盐水平(8g/L、10g/L、12g/L、14g/L)的增大,大鳞鲃血清渗透压和血清离子(Na+、K+、Cl)浓度均显著升高(P<0.05),鳃丝Na+/K+-ATP酶活力先升高后降低,受体内外渗透压差的影响最显著(P<0.05)。碱度的增大(19.05mmol/L、30.20mmol/L、47.86mmol/L、75.86mmol/L)能引起血清K+和尿素氮浓度显著升高(P<0.05),但对血清渗透压和鳃丝ATP酶活力无显著影响。在双因子实验中,盐碱交互升高会引起渗透压和血清离子(Na+、Cl、尿素氮)显著升高(P<0.05)。方差分析结果表明,盐度、碱度及交互作用均对渗透压有显著影响,影响作用最大的是盐度,其次是碱度,交互作用最小。鳃丝Na+/K+-ATP酶活性先升高后降低,最高值出现在盐度10g/L、碱度30.20mmol/L的正交试验组。从实验结果可得出,大鳞鲃在盐度12g/L以下的水体中能生存,在盐碱共存的环境下,能耐受的上限为盐度10g/L、碱度30.20mmol。本研究旨在掌握大鳞鲃的生存盐碱度范围,以期为该物种的增养殖生产提供基础依据。

大鳞鲃人工繁育技术初报

从乌兹别克斯坦引进体质量20-40 g的野生大鳞鲃（Barbus capito）鱼种,经5年人工培育性腺已发育成熟,2008年5月筛选8尾亲鱼进行人工繁殖试验。结果表明：注射催产药物LHRH-A2、HCG和DOM可促使亲鱼产卵和排精,催产的4尾雌鱼中有3尾成功产卵,获得受精卵4.8万粒,孵出鱼苗3万尾,其催产率、受精率、孵化率分别为75%,72.3%,67.1%。水温20-23℃时,从受精卵到孵出鱼苗需要约70 h,到仔鱼上浮开口需要约6 d。在哈尔滨地区池塘人工培育大鳞鲃鱼苗,1龄鱼体质量可达（40.06±1.19）g,体长（14.34±0.15）cm。

4种常用水产药物对大鳞鲃的急性毒性试验

采用静水试验方法,研究了硫酸铜、敌百虫、高锰酸钾、漂白粉对大鳞鲃的急性毒性效应。结果得出4种药物对大鳞鲃96 h的LC50值分别为0.65,0.76,4.00,1.12 mg/L,安全浓度分别为0.129,0.234,1.620,0.326 mg/L,对大鳞鲃的毒性由大到小依次为硫酸铜、敌百虫、漂白粉、高锰酸钾。除高锰酸钾的安全浓度与常用浓度相当外,其余3种药物的安全浓度均低于常用质量浓度,表明在大鳞鲃疾病防治中,高锰酸钾可安全使用,其余3种药物均有一定中毒风险,应谨慎使用。

两种方法分析大鳞鲃染色体核型的比较研究

染色体核型分析是细胞遗传学研究的主要内容。为了获得准确、便捷的染色体核型分析方法,以引进耐盐碱品种大鳞鲃为实验材料,取头肾细胞冷滴片法制备染色体标本,采用E-ruler测量软件和Photoshop图像软件结合完成了染色体核型分析,并与常规方法的测量结果、核型分析进行了比较。结果显示,E-ruler软件与常规方法对伸展平直染色体的测量无显著差异,前者对弯曲形态染色体的测量结果更为准确;Photoshop图像软件能剔除染色体中期分裂相照片的背景,准确判断着丝粒的位置,快速、便捷地完成染色体核型图拼贴。研究表明,利用E-ruler软件和Photoshop软件相结合可获得准确、清晰的核型分析结果,本方法适用于其他鱼类和生物的染色体核型分析。染色体分析结果显示,大鳞鲃的染色体组为二倍体,未发现与性别有关的异型染色体,核型公式为2n=100=12m+38sm+38st+12t,NF=150。同鲃科其他鱼类的核型相比,大鳞鲃与国内几种倒刺鲃核型类似,具有鲃亚科进化核型特征。

达里湖高原鳅人工繁殖技术初步研究

从达里湖运进2~4龄、体质量17.6~34.5g的野生达里湖高原鳅Triplophysa dalaica亲鱼3000多尾,经春季池塘培育至性腺成熟,于2015年5月挑选成熟亲鱼进行催产。雄鱼整头部略圆盾,在眼的部位最窄;胸鳍背面增厚为肉垫,上有刺突;吻部上方有肉垫隆起,无刺突。注射HCG 100 IU＋LRH-A_25μg/kg的催产效果较好。催产20尾雌鱼中17尾产卵,获受精卵5.02万粒,孵出鱼苗2.30万尾,催产率、受精率、孵化率分别为85.0%、65.6%和69.8%。达里湖高原鳅成熟卵为浅黄色,卵径（0.932±0.01）mm,遇水后具强粘性。水温18℃时,受精后70h出膜,初孵仔鱼平均全长（3.47±0.06）mm,3d后卵黄囊完全吸收,能平游、摄食。在自然水温16~25℃下养殖30d平均全长2.89cm。

铬对鲤嗜多染红细胞微核的诱变效应

在实验室条件下以不同浓度Cr6+( 0 1 2 2、 0 670、 1 2 1 9、 3 65 7、 1 0 971和32 91 3mg/L)水体染毒鲤鱼种 40d ,微核试验结果表明 :处理组铬浓度的提高 ,其嗜多染红细胞微核率相应提高。鲤暴露于Cr6 +3 66～ 32 91mg/L时 ,铬处理鱼微核细胞率较对照组鱼有明显差异。鱼肌肉、鳃、肝和肾组织内的Cr6+残留量同其微核率呈正相关关系。

咸海卡拉白鱼耗氧率和窒息点的测定

实验测定了咸海卡拉白鱼的耗氧率和窒息点,并做出了耗氧率的昼夜变化曲线。结果表明,在水温16～30℃条件下,卡拉白鱼的耗氧率和窒息点随温度的升高而增加;耗氧率与温度的线性回归方程为R=0.028T-0.312(R=0.845),不同体重鱼(3.97～132.22g)在24℃时,耗氧率和窒息点随体重的增加而降低,耗氧率与体重的关系为R=0.6548W-0.21(R=0.974)。卡拉白鱼的昼夜耗氧昼夜平均耗氧为0.3137mg/g.L,耗氧最低值出现在日间11:00时,耗氧最高值出现在凌晨6:00时。

铬对鲤脂质过氧化影响及其对嗜多染红细胞微核的诱变效应

在实验室条件下,将鲤鱼饲养于含铬0,0 12,0 67,1 22,3 66,10 97和32 91mg/L水中40d,进行脂质过氧化测试。结果表明:铬处理组(0 12～10 97mg/L)鲤血清中的丙二醛(MDA)含量明显增高,超氧化物歧化酶(SOD)活性变化不明显,且仅10 97mg/L组的SOD活性降低;铬对鲤肝脏SOD活性影响比血清大,且铬处理组(0 67～10 97mg/L)的SOD值较对照组明显下降(P<0 05)。微核试验结果表明:微核出现率随染毒Cr6+浓度的增高而升高,铬处理组(3 66～32 91mg/L)组嗜多染红细胞微核率较对照组均有明显差异(P<0 05)。随着Cr6+浓度的升高,铬在鱼体残留量显著增加。

咸海卡拉白鱼染色体核型研究

采用植物血凝素(PHA)体内注射,肾组织细胞体内短期培养,空气干燥法制备了卡拉白鱼的染色体.核型分析结果:染色体数2n=50,核型公式为28m+14sm+4st+4t,臂数(NF)为92.

碳酸氢钠对大鳞鲃耗氧率和排氨率的影响

在水温(22±0.5)℃和密闭式流水条件下,测定体质量(104.68±2.20)g大鳞鲃Barbus capito在不同碳酸氢钠(NaHC03)浓度(10 mmol/L、20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L和50mmol/L)下的耗氧率、排氨率和血浆尿素氮浓度。结果表明:碱度10~30mmol/L组大鳞鲃的耗氧率显著高于对照组(P<0.05),但组间无显著差异(P>0.05);碱度40 mmol/L、50mmol/L组的耗氧率极显著高于其他实验组(P<0.01),说明高碱度影响大鳞鲃的生理活动,提高新陈代谢水平抵御高碱度胁迫。随着碱度的上升大鳞鲃的排氨率逐渐降低,碱度30~50mmol/L组的排氨率依次显著低于对照组(P<0.05)。大鳞鲃血浆尿素氮浓度随碱度的升高而逐渐显著上升(P<0.05)。本试验表明,大鳞鲃为了应对碱度胁迫时的氨中毒,首先调节代谢降低氨的产生量,其次在体内将氨代谢合成尿素排出体外。

咸海卡拉白鱼染色体组型初步研究

采用植物血球凝集素 (PHA)体内注射 ,肾组织细胞体内短期培养 ,空气干燥法制备了卡拉白鱼的染色体。核型分析结果 :染色体数 2n =5 0 ,组型公式为 2 8m + 1 4sm +4st+ 4t,臂数 (NF)为 92。

我国大鳞鲃的养殖现状及发展前景

大鳞鲃(Luciobarbus brachycephalus)是我国引进的一个耐盐碱鱼类新种,自2013年全人工繁育苗种推广后,经过十几年的科技攻关和养殖推广,现已在国内形成规模化生产。本文通过查阅相关资料,结合实地考察,总结和梳理了大鳞鲃的分类及资源状况、人工繁育、盐碱耐受性、养殖模式、饵料营养和鱼病防治等养殖技术的研究进展,分析存在的养殖问题和发展前景,以期为我国的渔业养殖结构调整提供参考。

大鳞鲃的人工繁殖、胚胎发育和耐盐碱测定

2008-2010年进行大鳞鲃的人工繁殖和胚胎发育观察,并测定了胚胎、仔鱼的耐盐碱能力。结果表明,大鳞鲃是产漂流性卵的鱼类,繁殖性周期为1年产卵1次类型。水温19～23℃时,催产药物的效应时间在21～26 h,1.4～2.3 kg的雌性亲鱼产卵量在8×105～1.4×106粒,人工繁殖的催产率、受精率和孵化率平均为63.9%、81.5%、86.6%。大鳞鲃的卵为灰白色,直径约1.5 mm,遇水后卵膜会迅速吸水膨胀,1 h后达到最大为4.5 mm。水温20～23℃时,从卵授精到仔鱼孵出需要的积温为49.82℃.d,到仔鱼平游摄食需要积温125.14℃.d,刚出膜的仔鱼全长(6.07±0.18)mm,当达到(8.30±0.47)mm开始平游摄食。在耐盐碱实验中,测得大鳞鲃的胚胎72 h在盐度3.2以下、碱度14.32 mmol/L以下的水体中对成活率无影响;仔鱼96 h在盐度5.1以下、碱度14.32 mmol/L以下的水体对成活率无影响。

三种鳅科鱼对NaCl盐度和NaHCO_3碱度的耐受能力

以鳅科的黑龙江泥鳅(Misgurnus mohoity Dybowsky)、大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus Sauvage)、达里湖高原鳅(Triplophysa dalaica)为实验材料,采用单因子静态急性毒性实验法和均匀正交设计法对其盐碱耐受能力进行研究。实验结果表明,黑龙江泥鳅、大鳞副泥鳅、达里湖高原鳅的24 h和96 h的氯化钠(Na Cl)盐度半致死浓度(LC50)分别为15.64 g/L和13.58 g/L、15.43 g/L和14.18 g/L、14.00 g/L和11.57 g/L,安全浓度(SC)分别为4.12 g/L、4.03 g/L、3.74 g/L,盐度耐受能力顺序为:黑龙江泥鳅>大鳞副泥鳅>达里湖高原鳅。黑龙江泥鳅、大鳞副泥鳅、达里湖高原鳅的24 h和96 h碳酸氢钠(NaHCO_3)碱度半致死浓度(LC50)分别为117.1 mmol/L和72.62 mmol/L、128.4 mmol/L和88.83 mmol/L、155.2 mmol/L和120.0 mmol/L,安全浓度分别为18.77 mmol/L、23.66 mmol/L、36.30 mmol/L,碱度耐受能力顺序为:达里湖高原鳅>大鳞副泥鳅>黑龙江泥鳅。盐碱交互作用对黑龙江泥鳅、大鳞副泥鳅均表现为协同作用,协同系数0~48 h依次增高,以后逐渐减小;而对达里湖高原鳅在0~48 h内表现为协同作用,在48~96 h时表现为拮抗作用,拮抗系数随着暴露时间的延长而增大。对比分析可知,3种鳅科鱼的盐碱耐受能力比大多数淡水鱼高,可作为盐碱水域的增养殖鱼类;而达里湖高原鳅在耐碱方面表现更突出,可以作为高碳酸盐型盐碱水的增养殖鱼类。

乌苏里江唇鱼骨的全人工繁育

从乌苏里江捕获野生唇鱼骨(Hemibarbus labeo)亲鱼150余尾,经人工繁殖获得鱼苗,饲养于池塘中,研究其在人工养殖条件下的生长、繁殖和性腺发育等生物学特性。结果表明,野生亲鱼及其F1在池塘中饲养下,性腺可自然发育至成熟,繁殖季节(5-6月)雌、雄亲鱼会出现明显的副性征,注射催产激素HCG、LRH-A2和DOM的混合制剂,可促使成熟的雌性亲鱼产卵,水温22～26℃时,药物的效应时间在17～22h,人工繁殖的催产率、受精率、孵化率和畸形率分别为87.55%、68.95%、92.5%和5.75%。唇鱼骨的卵为圆形、灰白色或淡绿色,遇水后产生较强的黏性,吸水膨胀卵径为(2.32±0.12)mm(n=50),体质量400～900g的雌性亲鱼绝对怀卵量为(3.19±0.85)×104粒(n=15)。水温22～24℃时,从卵授精到仔鱼孵出需要积温69.43℃·d,到仔鱼平游摄食需要积温139.25℃·d,刚出膜的仔鱼全长(6.1±0.3)mm,平游时全长达到(8.9±0.4)mm。在哈尔滨地区人工池塘养殖唇鱼骨,1+龄鱼体质量为(17.20±2.46)g,2+龄鱼为(89.84±9.30)g,3+龄鱼为(234.94±25.94)g,4+龄鱼为(371.57±64.65)g;雄性3+、雌性4+有部分个体性腺成熟,5+龄时多数个体可发育至性成熟。唇鱼骨的全人工繁育成功,可初步解决苗种来源和池塘养殖问题,并为野生资源的增殖和人工规模化养殖奠定基础。