骨肉瘤干细胞差异表达microRNA对其干性特性的影响

目的 探讨骨肉瘤干细胞差异表达microRNA(miRNA)及其对骨肉瘤干细胞的干性特性(自我更新、侵袭、凋亡)的影响。方法 采用无血清悬浮培养法和流式分选术分离鉴定骨肉瘤干细胞;分别采用成球实验、体外侵袭鉴定骨肉瘤干细胞的干性特性;高通量测序检测骨肉瘤干细胞中差异表达miRNA;采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达miRNA的情况,验证miRNA结果;相关miRNA抑制剂干扰后,分别进行成球实验和侵袭实验检测miRNA对骨肉瘤干细胞自我更新、侵袭能力和细胞凋亡的影响。结果 成功分离Saos-2的CD133^(+)和CD133^(+)细胞,具有较强的自我更新能力和侵袭能力。与CD133^(+)细胞相比,CD133^(+)细胞的高表达miRNAs共有15个;低表达miRNAs共有2个。采用qPCR技术验证高通量测序差异表达miRNA相关结果,CD133^(+)亚群中miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091表达上调,miR-3143、miR-3150a-5p表达下调。抑制相关高表达miRNA(miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091)表达后,CD133^(+)细胞的自我更新能力和侵袭均下降,细胞凋亡上升。结论 骨肉瘤干细胞中具有多种差异表达miRNA,其对骨肉瘤干细胞的干性特性具有调控作用。

光动力抗菌聚合物功能化钛片用于骨科植入体抗感染

目的:评估表面修饰光动力抗菌聚合物钛片(Ti-PGMB)植入体的抗感染性能。方法:用活性氧(ROS)荧光探针验证在光照条件下Ti-PGMB植入体产生ROS,分别建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜模型及植入体部位感染动物模型评估Ti-PGMB抗细菌感染的效果。将小鼠随机分为钛片对照(Ti)组、Ti-PGMB无光照(Ti-PGMB-L)组和Ti-PGMB光照(Ti-PGMB+L)组,每组各10只。Ti组植入钛片,Ti-PGMB+L组和Ti-PGMB-L组植入Ti-PGMB。在植入位置接种等量MRSA细菌悬液(5×10^(7)CFU/mL),24 h后对Ti-PGMB+L组连续光照干预7 d,Ti组和Ti-PGMB-L组不进行其他干预措施。观察3组小鼠植入体部位缝合处切口恢复情况,统计干预3 d、7 d后3组小鼠植入体附近组织匀浆中MRSA数量,并通过酶联免疫吸附实验(ELISA)测定组织匀浆中炎症因子的水平,通过苏木精-伊红染色评估组织炎症感染的程度。结果:在光照条件下,Ti-PGMB植入体能够产生ROS并可消散成熟生物膜。在体内抗感染实验中,干预3d、7d后,Ti-PGMB-L组细菌存活率与Ti组(100%)比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);而Ti-PGMB+L组干预3 d、7 d后细菌存活率与Ti组(100%)比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预7 d后,Ti-PGMB+L组组织匀浆中的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症因子水平低于Ti-PGMB-L组和Ti组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:Ti-PGMB利用其可调控的光动力效应生成ROS,从而消杀感染性细菌及其形成的生物膜。Ti-PGMB能够抑制以MRSA为代表的植入式医疗器械感染、减少炎症反应,具有重要的临床价值。