构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体

目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。

名老中医郑学军治疗臁疮经验

臁疮是中医外科学常见疾病,病因复杂,缠绵难愈。山西省名中医郑学军主任认为脉络湿瘀,日久蕴热成毒为本病病机之关键,内治以“调血利水、化瘀通络”为大法,自拟静脉Ⅰ号方为基本方,各期随证加减(溃疡前期为湿瘀阻络证、溃疡期为湿热瘀毒证、溃疡愈合期为本虚邪恋证);外治以“祛腐生肌”为原则,采用新法炼制红升丹,自制改良生肌玉红油纱,外用于创面;中药熏洗法用于各阶段,常用燥湿解毒洗剂、溃疡洗剂熏洗生肌;重用缠缚,促进静脉回流,减轻下肢水肿。诸法内外相佐,中西结合,取效甚佳。通过分析郑学军主任对臁疮的认识及用药经验规律,总结郑老临证经验,传承学术思想,并附验案一则,以供同道参考。

郑学军治疗雷诺综合征经验举隅

郑学军系山西中医药大学附属医院主任医师,山西省名老中医,师从中医外科大家王玉章先生,从事周围血管病临床工作40余年,对诊治雷诺综合征有独到见解。郑主任治疗雷诺综合征以自拟方温经散寒、活血通络,并重视疏肝解郁,同时结合药酒方及外用熏洗方,临床治疗每获良效。笔者随郑师学习,现将其治疗雷诺综合征的临床经验总结如下。