低氧对白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力的影响

目的研究低氧对白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力的影响。方法Raji细胞体外常规培养,用体积分数为1%、3%、5%的氧分别处理Raji细胞24h,以常氧培养Raji细胞为对照组,通过细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR检测细胞VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western Blot检测细胞HIF-1α蛋白的表达。结果与对照组相比,3%、5%的氧均能增强Raji细胞黏附力、运动力和侵袭力(P<0.05或P<0.01),而且还能上调Raji细胞HIF-1α蛋白、HIF-1α mRNA、VEGF mRNA、MMP-9 mRNA的表达(P<0.01),各组MMP-2 mRNA均无明显表达;而1%氧与对照组相比各检测指标无明显变化(P>0.05)。结论适度低氧可增强白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力,其机制可能是通过HIF-1α上调VEGF、MMP-9表达实现的。

高强度化疗时代下儿童急性髓系白血病感染的临床研究

目的:研究儿童急性髓系白血病(AML)患儿在高强度化疗后感染的临床特点并探索防控措施。方法:选取2016年1月-2019年8月本院初诊AML患儿56例,分析总结其在诱导、巩固期感染的发生率、病原菌及感染部位。结果:AML患儿各阶段感染率在93.4%-96.4%之间,严重感染率平均值为16.0%(11.3%-19.6%),发生感染相关的死亡为10.7%。不明原因性发热是感染主要原因,而血流感染则常见于严重感染,以革兰氏阴性菌感染为主。化疗期间真菌感染率为35.7%。结论:儿童AML各化疗阶段均出现高感染发生率,重视血流感染导致的严重感染,预防性使用抗真菌药物以减少AML合并的真菌感染。

儿童横纹肌肉瘤预后模型的构建及验证

目的分析影响儿童横纹肌肉瘤(RMS)预后的因素并构建列线图预测模型。方法从监测、流行病学、最终结果(SEER)数据库中收集2004年至2016年年龄≤18岁且分期明确的RMS患者1212例,并随机分为测试集(n=865)和验证集(n=347);同时收集2013年1月至2018年12月经免疫组化染色确诊的25例RMS患者作为外部验证集。采用Cox风险比例回归模型分析筛选影响儿童RMS患者生存的独立预后因素并构建预后列线图模型。采用Bootstrap法对模型进行内部验证及外部验证,并绘制校准曲线。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用时间依赖受试者工作特征(tdROC)曲线评估该模型预测RMS患者3、5、10年生存率的准确性。结果多因素Cox风险比例回归模型分析结果显示,总分期、手术、原发部位均为影响RMS患者总生存时间的独立因素。将这些因素纳入并成功构建了列线图模型。该预测模型在测试集、内部验证集及外部验证集中C指数分别为0.762、0.833、0.792, tdROC曲线评估该模型对RMS患者预后预测的准确性,结果显示,在SEER测试集、SEER验证集、外部验证集中,列线图预测RMS患者3、5、10年生存率的曲线下面积(AUC)分别为0.753、0.768、0.736,0.818、0.831、0.808和0.839、0.794。结论通过多因素Cox风险比例回归模型筛选影响儿童RMS预后的变量,并对相关独立危险因素进行可视化构建,具有较高的临床价值,对高危人群的筛选及后续个体化诊疗方案的制定具有重要意义。

儿童异基因造血干细胞移植后急性肾损伤临床分析

目的分析儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性肾损伤(AKI)的临床特征及危险因素。方法回顾性分析2016年8月至2020年3月于武汉儿童医院血液肿瘤科接受allo-HSCT患儿的临床资料,对比移植预处理开始前及移植后100天血肌酐(Cr)、肌酐清除率(Ccr),以及移植后1年的生存情况;采用logistic回归分析影响AKI发生的危险因素。结果共147例allo-HSCT患儿纳入研究,其中男85例、女62例,接受移植时中位年龄5.5岁(0.7个月~16岁)。其中101例(68.7%)患儿发生AKI,中位时间为移植后24.0(-5.0~91.0)d。二元logistic回归分析显示,移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)、肝窦间隙阻塞综合征(SOS)是AKI发生的独立危险因素(P<0.05)。按pRIFLE诊断标准将发生AKI的101例患儿分为风险期组54例、肾损伤期组31例以及肾衰竭期组16例。不同分期之间患儿Cr以及Ccr差异均有统计学意义(P<0.05),肾衰竭期组Cr较高,Ccr较低。allo-HSCT后随访1年,18例患儿死亡,其中AKI患儿死亡16例(风险期1例,肾损伤期5例,肾衰竭期10例)。生存分析发现无AKI组1年总体生存(OS)率为(95.70±2.97)%,AKI组为(84.00±3.86)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童allo-HSCT发生AKI较为常见,aGVHD、SOS是AKI发生的危险因素;AKI与患儿1年OS相关。

环孢素A治疗儿童非重型再生障碍性贫血的转归效果及预后因素分析

目的:总结环孢素(CsA)治疗儿童非重型再生障碍性贫血(NSAA)的长期效果,并探讨与CsA治疗NSAA起效和预后相关的早期指标。方法:回顾性分析2013年1月-2017年12月在华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院住院的36例NSAA患儿的病历资料,所有患儿在确诊后均接受CsA口服治疗,2周后检查CsA谷浓度以维持在200-250μg/L范围,评估时间点为口服CsA后3、6、12、18和24个月,评估项目为外周血细胞分类计数及网织红细胞百分比与计数。结果:36例患儿中男性16例,女性20例,中位年龄5.46(2.92-7.99)岁,中位随访时间28.00(10.00-38.25)个月。口服CsA后24个月临床治疗有效的累计病例数为21例。完全缓解4例,部分缓解17例,无效15例,总有效率58.33%,药物起效的中位时间为3.0(0.5-10.0)个月。与无效组比较,有效组(完全缓解和部分缓解)患儿表现为口服CsA后第3个月中性粒细胞和红细胞显著升高,第6个月血红蛋白、血小板、白细胞显著升高(P <0.05);口服CsA 3个月后有效组除2例患儿在3-12个月内进行成分输血外,其余19例患儿均不再需要成分输血支持治疗。结论:NSAA患儿口服CsA总体有效率为58.33%。治疗3个月后是否停止输注血液制品可作为疾病转归的转折点,治疗3个月时的中性粒细胞、红细胞和6个月时的血红蛋白、血小板、白细胞水平可作为评估疾病转归的指标。

儿童异基因造血干细胞移植后血浆sST2/Reg3α蛋白水平与急性移植物抗宿主病的相关性

目的:探讨儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后血浆sST2/Reg3α蛋白动态变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的相关性。方法:收集2019年1月至2020年1月在武汉儿童医院血液肿瘤科接受allo-HSCT的患儿29例的临床资料。采集患者移植后14 d和28 d外周血标本,使用Luminex方法检测血浆sST2/Reg3α蛋白浓度。结果:29例患儿中男性15例,女性14例,中位年龄53(29-117)个月。接受移植后0-I度aGVHD 18例,II-IV度aGVHD11例;皮肤aGVHD 6例,肠道aGVHD(GI-aGVHD)3例,肠道及皮肤aGVHD 5例。II-IV度aGVHD组与0-I度aGVHD组移植后28 d血浆sST2蛋白水平分别为101.81(73.94-150.77)ng/ml与48.97(28.82-56.69)ng/ml,差异具有统计学意义(P=0.021)。GI-aGVHD组与无aGVHD组患者移植后28 d血浆sST2蛋白水平分别为118.74(87.00-243.36)ng/ml和48.97(23.55-61.40) ng/ml,差异具有显著性(P=0.004)。当移植后28 d血浆sST2蛋白浓度≥65.34ng/ml时预测II-IV度aGVHD的敏感度为85.7%,特异性为87.5%;且移植后血浆sST2蛋白高水平组(≥65.34 g/ml)患者II-IV度aGVHD发生率显著高于低水平组(<65.34 ng/ml)(P=0.021)。Reg3α蛋白在II-IV度aGVHD组与无aGVHD组的差异无统计学意义。结论:儿童allo-HSCT后血浆sST2蛋白水平升高提示II-IV度aGVHD的发生。高水平sST2蛋白有望作为预测II-IV度aGVHD发生的生物学诊断标志。

儿童异基因造血干细胞移植后肠道急性移植物抗宿主病的临床研究

目的:观察儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特点、治疗及转归,并分析其危险因素。方法:回顾性分析2016年8月-2020年8月在同济医学院附属武汉儿童医院接受allo-HSCT的136例患儿的临床资料,观察肠道aGVHD患儿的临床特征,并用Logistic回归分析其危险因素及Kaplan-Meier模型分析其累积生存率。结果:136例患儿中24例(17.6%)发生肠道aGVHD,其中4例为II度,20例为III-IV度,发生的中位时间为28(10-63)d。临床表现为腹泻黄绿色稀水便伴间断腹痛,其中17例伴有恶心呕吐,11例伴鲜血便,8例患儿在出现肠道aGVHD前有皮疹。肠道aGVHD的平均治疗时间为33(11-100)d;18例患儿接受电子肠镜检查及组织病理学检查。经过治疗后,24例患儿中20例肠道aGVHD症状得到控制,总有效率为83.3%,最终9例在随访期内死亡。发生肠道aGVHD组累积总生存率为62.5%(15例/24例),明显低于无肠道aGVHD组(90.2%,101例/112例)(Log-rank检验,P=0.001)。单因素分析显示,儿童allo-HSCT后肠道aGVHD的发生与患儿年龄及性别、基础疾病、供者性别、供受者血型、预处理方案、GVHD的预防方案、ATG使用剂量、移植物单个核细胞数(MNC)和CD34;数量、中性粒细胞及血小板的植入时间无明显相关性(P>0.05),与移植类型(χ^(2)=16.020,P=0.001)及HLA相合程度(χ^(2)=15.502,P=0.001)具有相关性(P<0.05);多因素分析显示,仅HLA不全相合(1位点不合)无关供者是儿童allo-HSCT后并发肠道aGVHD的独立危险因素(P=0.014,OR=16,95%CI 1.735-147.543)。结论:肠道aGVHD是影响儿童allo-HSCT后总生存率的危险因素,HLA不全相合(1位点不合)无关供者为其发生的高危因素。

92例儿童朗格汉斯细胞组织细胞增生症的临床特点及疗效分析

目的回顾性总结儿童朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的治疗效果及预后。方法收集本院血液肿瘤科2013年1月1日—2020年9月30日收治的初次确诊LCH并治疗的92名患儿的临床特点,使用Kaplan-Meier生存分析法计算生存率,Log-Rank检验及Cox比例风险回归模型进行单因素及多因素生存分析。结果92例患儿中男性56例(60.9%)、女性36例(39.1%),发病年龄中位数23(1~135)个月。92例患儿接受初始6周治疗后缓解率为63.0%(58/92)。中位随访时间30(1~99)个月,5年总生存率(OS)和无事件生存率(EFS)分别为(97.6±1.7)%和(58.6±7.2)%,病死率2.2%(2/92)。单因素分析,发病>2岁、无危险器官浸润、6周治疗有效和仅单系统累及的患儿5年EFS较高(P=0.011,0.012,0.000,0.015),进一步多因素分析,6周治疗是否有效是影响EFS的主要因素(P=0.000)。BRAF-V600E基因突变多发生在2岁以下患儿(P=0.016),阴性组与阳性组5年EFS分别为(50±15.9)%和(42.2±17.3)%。结论改良DAL-HX83方案治疗儿童LCH的5年OS尚可,但EFS仍有待进一步提高。BRAF-V600E基因突变阳性患儿或可使用靶向药物。

盐酸小檗碱增敏柔红霉素诱导儿童急性淋巴细胞白血病原代细胞凋亡作用的研究

目的:探讨盐酸小檗碱(BBR)增敏柔红霉素(DNR)诱导儿童急性淋巴细胞白血病原代细胞(P-ALLCs)凋亡的作用及相关机制。方法:收集初诊初治的急性淋巴细胞白血病(ALL)儿童骨髓标本12例,分离单个核细胞,按活细胞数2×10^5/m L接种于含20%小牛血清1640的96孔培养板,培养4 h后按照设定DNR 4个浓度和BBR 3个浓度单药及交叉联合应用方案加入不同体积的PBS稀释DNR和BBR储备液培养干预24 h,采用cell counting kit-8 assay(CCK-8)检测DNR和BBR单药作用以及两者联合作用对P-ALLCs增殖的抑制作用。结果:DNR单药作用时抑制率为(11.56%±0.73%)^(59.60%±2.80%),随着DNR浓度的增加,P-ALLCs的增殖抑制逐渐增强,且后一浓度与前一浓度比较差异均有统计学意义(P均<0.05);BBR单药作用时抑制率为(12.39%±1.50%)^(39.75%±2.43%),随着BBR浓度的增加,P-ALLCs的增殖抑制逐渐增强,且后一浓度与前一浓度比较差异均有统计学意义(P均<0.05);DNR联合BBR时的抑制率为(18.43%±1.11%)^(89.96%±1.40%)。在4个联合用药组中,随着BBR浓度的增加,对P-ALLCs的增殖抑制逐渐增强(P均<0.05),而且每一组中DNR联合BBR后的抑制率比DNR单药作用强(P均<0.05)。结论:DNR和BBR对儿童P-ALLCs均有细胞毒性作用并成浓度依赖性。两药联合作用时BBR可以增加P-ALLCs对DNR的敏感性,该作用与浓度有一定的相关性。

新型冠状病毒疫情下多中心517例血液肿瘤患儿的家庭管理

目的了解新型冠状病毒疫情期间血液肿瘤患儿的家庭管理方法。方法回顾性总结疫情期间在多中心儿童血液肿瘤科就诊的517例血液肿瘤患儿的临床资料以及家庭管理情况。结果517例血液肿瘤患儿中,男298例,女219例,中位年龄5岁4个月。急性淋巴细胞白血病260例(50.29%),急性髓系白血病36例(6.96%),重型再生障碍性贫血40例(7.74%),其他(包括淋巴瘤、神经母细胞瘤、肾母细胞瘤等实体瘤)181例(35.0%)。其中发热61例,咳嗽31例,肺部CT异常表现77例,门诊进行了新型冠状病毒核酸及抗体筛查的患儿结果均为阴性,患儿在日常居家、外出就诊途中及居家网络化管理中均采取了合理的管理方式。结论多中心儿童血液肿瘤患儿COVID-19感染情况较为乐观,合理的家庭管理让血液肿瘤患儿能够较好地避免院外感染COVID-19。

低氧对K562细胞侵袭转移的增强作用

目的研究低氧对白血病细胞株K562细胞侵袭能力和转移能力的影响。方法细胞体外常规培养,用浓度为1%,3%,5%的氧分别处理细胞24 h,以常氧培养K562细胞为对照组,通过细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF),MMP-2,MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测细胞HIF-1α蛋白的表达。结果与对照组相比,3%和5%的氧均增强K562细胞黏附力、运动力和侵袭力(P<0.05或P<0.01),而且还能上调K562细胞HIF-1α蛋白,HIF-1αmRNA,VEGF mRNA,MMP9 mRNA,MMP2 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);而1%氧与对照组相比,以上各检测指标无明显变化(P>0.05)。结论适度低氧能增强白血病细胞株K562细胞侵袭能力和转移能力,其机制可能是通过HIF-1α上调VEGF,MMP-2和MMP-9表达实现的。

儿童肝脾γδT细胞淋巴瘤1例并文献复习

目的总结并探讨儿童肝脾γδT细胞淋巴瘤（γδHSTCL）的临床表现、细胞形态学（M）、脾活检免疫组织化学（I）、细胞遗传学（C）及TCR基因重排分子生物学（M）特征及其对早期诊断的重要性。方法分析1例确诊为γδHSTCL患儿的临床及MICM特点，并复习相关文献。结果骨髓细胞学检查提示约0．365异常细胞浸润；免疫表型分析：异常细胞群约占有核细胞的0．245，主要表达分化群（CD）2／CD3／CD7／CD19／CD38／cCD3／T细胞受体（TCR）γ/δ。脾脏组织免疫组织化学：CD3（＋），CD45RO（＋），CD8（＋），CD4（-），细胞毒性颗粒相关蛋白（TIA-1）（＋），CD20（-），TCRβ（-），CD79α（-），间变性淋巴瘤激酶（ALK）（-），白细胞共同抗原（LCA）（＋），CD30（-），末端转移酶（TdT）（-），CD10（-），髓过氧化物酶（MPO）（-），颗粒酶B（Granzyme B）（＋）；且增殖细胞核抗原（Ki-67）（＋）的肿瘤细胞数约为80．00％。脾脏组织流式细胞免疫表型：淋巴细胞占全部有核细胞的72．26％，T淋巴细胞[CD3（＋）]约占88．90％，其中约有92．09％的T淋巴细胞Ki-67（＋），CD7^dim（＋），TCRγ／δ（＋），CD2（＋），CD8（＋），CD34（＋），TCRαβ（-），CD5（-），CD4（-），CD56（-），约59．16％细胞为异常成熟T淋巴细胞。骨髓细胞染色体核型：46，XY。骨髓细胞荧光定量聚合酶链反应检测基因重排：TCRβ（＋）、TCRγ（＋）和TCRδ（＋）。患儿入院后先予对症支持治疗及抗感染治疗，确诊后予泼尼松60mg／m^2口服治疗，疗效不佳，死亡。结论MICM分型对于早期准确诊断和甄别儿童γδSHSTCL具有重要价值。

白花蛇舌草乙醇提取物体外诱导人AML-M2白血病细胞凋亡机制研究

目的观察白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa Willd.,EEHDW)对AML-M2白血病Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响机制。方法采用MTT比色法、Hoechest荧光染色检测测定EEHDW作用后Kasumi-1细胞增殖和凋亡的情况,Western blotting法检测Kasumi-1细胞中Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、Cyto-C、P65、p-P65、IkBα、p-IkBα、IKKα/β、C-myc以及AML1-ETO的蛋白水平。结果 EEHDW抑制急性髓系白血病Kasumi-1细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性。0.04,0.06,0.08mg·mL?1的EEHDW能诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。EEHDW可以显著上调Cyto-C、cleaved PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9以及Bax的表达水平,而降低Bcl-2、C-myc和AML1-ETO蛋白的表达,同时EEHDW能够浓度依赖性地增加p-P65、p-IkBα的蛋白表达。结论 EEHDW诱导Kasumi-1细胞凋亡一方面是通过调节Bax/Bcl-2的表达影响线粒体途径,另外一方面还与激活NF-кB信号通路有关,在这个过程中同时抑制原癌基因C-myc和AML1-ETO融合基因的表达。