脱落酸的摇瓶发酵工艺优化研究

【目的】通过脱落酸的摇瓶发酵工艺优化,提高脱落酸的摇瓶发酵水平,从而减少摇瓶效价误差,有利于诱变效应的分析。【方法】通过工艺试验确定对脱落酸摇瓶发酵的影响因素,对影响因素进一步进行正交优化试验,得到脱落酸摇瓶培养基的最优配比组合浓度。【结果】脱落酸摇瓶配方中的麦麸可以完全被黄豆粉替代,替代后其摇瓶效价从0.171 g/L提高到0.550 g/L,提高幅度达221.6%。经过进一步正交试验,以黄豆粉、麦芽糖、乙二醇为影响因素,摇瓶产量为评价指标,摇瓶产量结果显示黄豆粉为最显著影响因子,其次为麦芽糖。得到最佳摇瓶配方为黄豆粉5 g/L、麦芽糖10 g/L、乙二醇4 g/L,花生粉4 g/L,葡萄糖4 g/L,硫酸镁1 g/L。摇瓶发酵效价从0.205 g/L提高到1.441 g/L,比对照提高602.9%,其提高幅度较大。【结论】发酵摇瓶中黄豆粉替代麦麸更有利于发酵过程中脱落酸菌产素水平的提高。

人工全膝关节置换术治疗膝关节骨关节炎的疗效观察

目的观察人工全膝关节置换术治疗膝关节骨关节炎的临床疗效。方法我科自2004年1月～2007年8月应用人工全膝关节置换术对80例(98膝)膝关节骨关节炎患者进行治疗,其中男性24例,女性56例,平均年龄60.2岁(48～74岁);左膝33例,右膝29例,双侧膝关节同时置换者18例。结果所有患者均随访12～36个月(平均24个月),根据HSS膝关节评分系统进行疗效评价:优75膝,良18膝,一般5膝,未出现效果差的病例,优良率为94.9%;术前平均HSS评分为(45±6)分,术后平均HSS评分为(88±6)分,治疗后较治疗前明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人工全膝关节置换术治疗膝关节骨关节炎疗效确切,可有效缓解患者疼痛,改善膝关节功能。

巴参菜多糖提取工艺及抑制HepG2细胞活性

以巴参菜全草为原料,采用水提醇沉法,通过单因素和L9(34)正交试验考察提取温度、提取时间、料液比对多糖提取率的影响,确定其最佳提取条件;并通过四氮甲唑蓝法和台盼蓝染色法初步评价巴参菜多糖体外抗肿瘤活性。结果表明:巴参菜多糖最佳提取条件为提取温度100℃、提取时间2.0h、料液比1:25(g/mL),提取2次,此条件下多糖提取率为14.99%;巴参菜多糖能显著抑制HepG2细胞增殖、降低其存活率,且呈现出量效关系和时效关系。因此,巴参菜多糖能较好的抑制HepG2细胞活性。

高山被孢霉发酵产花生四烯酸油脂的补料工艺

为了缩短高山被孢霉(Mortierella alpina)产花生四烯酸(ARA)油脂发酵周期,以提高ARA油脂生产强度,主要研究了不同底物流加方式对M.alpina产ARA油脂的影响。考察分批发酵、残糖反馈补料分批发酵对ARA油脂发酵的影响,并进一步在残糖反馈补料发酵的基础上建立了一种反复补料分批发酵工艺。结果表明:与分批发酵相比,虽然细胞干质量和油脂浓度变化不显著,但是残糖反馈补料方式ARA生产强度从0.93提高至1.33g/(L·d)。在残糖反馈补料基础上反复补料分批发酵一共进行了4批,细胞干质量稳定在30 g/L左右,油脂含量稳定在50%左右,ARA含量分别达到42.81%、43.17%、42.30%和39.71%。

大龄先天性髋关节脱位的改良手术方法治疗

目的探讨改良手术方法在治疗大龄先天性髋关节脱位(CDH)中的临床疗效。方法自2004年1月至2009年6月来我科治疗的34例大龄先天性髋关节脱位患儿,在Pemberton手术方式的基础上增加新的方法进行治疗。结果 34例患者均随访12～36个月,术后均为中心性复位,3个月后X线检查示髋臼截骨处植骨融合,形成坚固的髋臼顶,无移植骨块被吸收发生。依照周永德疗效评价标准,优26例,良5例,可2例,差1例,总优良率为91.2%。结论应用改良手术方法治疗CDH疗效满意,术后可增加髋臼的容积,利于髋关节的稳定,还可以有效纠正股骨颈前倾角,改善髋臼指数,预后良好,适合临床推广应用。

蛋清肽-钙配合物体内促钙吸收作用研究

目的:为了考察蛋清肽-钙配合物(EWP-Ca)在动物体内的补钙效果。方法:将60只Wistar雄性大鼠随机分为6组:普通组、缺钙模型组、CaCO3组以及低、中、高剂量EWP-Ca组,通过构造缺钙大鼠模型,进行了为期30d的补钙实验,实验结束后对各种与补钙相关的指标进行测定。结果:与缺钙模型组相比,高剂量EWP-Ca组(Ca剂量为106.4mg/(kg.d))能极显著增加大鼠股骨直径、干质量、骨钙含量及股骨密度(P<0.01),极显著降低血清碱性磷酸酶(AKP)活力(P<0.01);与钙含量相同的CaCO3组相比,EWP-Ca高剂量组股骨直径、骨钙含量极显著和显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:EWP-Ca具有体内促进钙吸收作用,且效果优于钙含量相同的CaCO3。

油炸藕片加工工艺和质构特性研究

以新鲜莲藕为原料,对油炸藕片裹衣配方及加工工艺进行研究。通过单因素试验和正交试验确定了裹衣粉的配方,并考察了切片厚度、油炸时间和油炸温度对藕片质构特性、色泽、口感、含油量的影响。结果表明:裹衣粉最佳配比为每100mL水中加入面粉40g、玉米粉12g、米粉6g,最佳油炸工艺为切片厚度8mm、油炸温度170℃、油炸时间6min。在此加工条件下,产品具有良好的感官品质和质构特性。

离子排斥色谱法同时测定2,3-丁二醇发酵液中的葡萄糖和木糖及各种代谢产物

针对2,3-丁二醇发酵体系,以高交联度磺化苯乙烯-二乙烯基苯共聚物多孔微球为固定相的AminexHPX-87H离子色谱柱为分析柱,利用示差折光检测器对该体系中的6种代谢产物(2,3-丁二醇、3-羟基丁酮、乙醇、乙酸、甲酸和乳酸)以及2种残留底物葡萄糖和木糖进行了分离。在65℃柱温下,以5 mmol/L H2SO4作为流动相,发酵液样品中底物葡萄糖和木糖及2,3-丁二醇等各种代谢产物的线性相关系数均在0.9990～0.9999之间,回收率为98.8%～103.2%,精密度为0.3%～2.1%。在最佳色谱条件下,能够同时测定2,3-丁二醇发酵体系中的残留底物和各种代谢产物的含量,适合于实时定量监测2,3-丁二醇发酵过程。

生物制造不同立体构型2,3-丁二醇:合成机理与实现方法

总结了不同2,3-丁二醇立体异构体的生物合成机制,以及有利于这些立体异构体高效合成的一些策略,包括构建全细胞催化剂及利用合成生物学技术重建代谢途径等先进方法;同时指出,未来的研究重点是进一步利用合成生物学的方法,以提高不同立体构型2,3-丁二醇的生物合成能力,并建立这些异构体高效可行的分离方法.

花生四烯酸油脂高产菌株的选育

以高山被孢霉为出发菌株,抗氧化剂——没食子酸辛酯为筛选剂,经过紫外-LiCl复合诱变处理,筛选出抗脂肪酸脱氢酶抑制剂的菌株。将筛选出的菌株经过摇瓶发酵复筛,筛选到1株生产性能优于出发菌株的突变株R807。与原始菌株相比,该菌株的油脂组成脂肪酸分布中C18系列脂肪酸相对较少,花生四烯酸(ARA)占总脂肪酸的含量保持在40%(质量分数)以上。其菌体生物量达到39.2 g/L,油脂产量达到16.3 g/L,ARA占总脂肪酸含量为41.72%(质量分数),ARA产量达6.81 g/L。各数值比原始菌株分别提高了22.9%、3.2%、35.1%和39.8%。连续传代多次,其产量性状无显著变化。

高山被孢霉三阶段培养法生产花生四烯酸油脂

为提高高山被孢霉(Mortierella alpina)生物合成花生四烯酸油脂的生产效率,基于花生四烯酸油脂的积累机制,建立了一种三阶段培养法:第一阶段在全培养基中培养促进菌体生物量的快速积累,确定了60 g/L糖初始质量浓度时,最有利于生物量的快速积累;第二阶段在C源丰富而其他营养缺乏的条件下培养,促进油脂快速积累,对糖最佳初始浓度、接种时间、pH和培养时间进行了优化;第三阶段培养诱导油脂中花生四烯酸的高效积累,并确定此阶段培养时间为36 h时为最佳时间。实验结果表明:三阶段培养工艺条件下,菌体生物量、油脂量、花生四烯酸量分别为41.6、26.6和11.4 g/L,本研究相比传统分批发酵工艺在产率和花生四烯酸最终产量方面都有了显著提高。

酶膜耦合连续法制备玉米肽解酒及防醉研究

为了考察酶膜耦合连续法制备的玉米肽(CP)在动物体内的解酒及防醉效果,并与间歇法制备的CP进行比较,采用小鼠模型分别进行翻正反射实验、解酒和防醉实验,并以市售海王金樽为阳性对照,观察小鼠的醉酒只数和醉酒时间,测定小鼠血清中乙醇体积分数及肝脏乙醇脱氢酶(ADH)的活力。结果表明:酶膜耦合连续法制备的CP能极显著地缩短小鼠醉酒时间及降低酒后血清中乙醇体积分数(P<0.01),极显著激活其肝脏ADH活力(P<0.01);各项数据均显示CP具有良好的解酒、防醉效果,连续法制备的CP其醒酒效果优于间歇法制备的CP;CP的摄入时间与饮酒时间间隔短是有利的;摄入300mg/kg(以体质量计)连续法制备的CP其解酒效果与摄入450mg/kg海王金樽相当。酶膜耦合连续法制备的CP是良好的醒酒物。

产酸克雷伯氏杆菌发酵产2,3-丁二醇的培养基优化

采用不同设计方法相结合的策略对耐高糖产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)ME-UD-3-4发酵产2,3-丁二醇的培养基进行优化。首先在单因素实验的基础上采用Plackett-Burman设计法对影响ME-UD-3-4发酵产2,3-丁二醇的相关因素进行研究,筛选到3种有显著效应的因素(P<0.05):葡萄糖、玉米浆和MgSO4.7H2O。然后利用响应曲面法(Response Surface Methodology,RSM)对这3种因素的最佳水平范围进一步探讨;对得到的回归模型进行分析,得最佳条件(g/L):葡萄糖220、玉米浆19和MgSO4.7H2O 0.4;在最佳条件下,发酵80 h,2,3-丁二醇产量从原来的57.3 g/L提高到86.1 g/L,生产强度由0.72 g/(L.h)提高到1.08 g/(L.h)。

木糖酸的合成及应用研究进展

综述了木糖酸的化学合成和生物合成方法,重点对微生物发酵的菌种、代谢途径和国内外发酵水平进行了总结,并对木糖酸的应用前景进行了展望。未来的研究重点应集中在木糖酸生物合成的代谢机理、高产木糖酸的菌种选育以及木糖酸的应用开发等方面。

绝经后女性膝骨关节炎性激素水平及其与年龄和病变程度的关系

目的观察绝经后女性膝关节骨关节炎性激素水平及其与年龄和病变程度的关系。方法观察2016年1月至2016年12月我院骨关节外科确诊为膝关节骨关节炎,行膝关节置换术或保守治疗的50岁以上绝经后女性患者215例,按年龄分组,每10岁为一组,分为三组,测量身高、体重,计算体重指数,进行WOMAC量表评分、X线拍片、膝关节磁共振T2-mapping成像。空腹抽血检测卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇。按照卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)的高低分两组,高FSH组(>40 mIU/mL)、低FSH组(<40mIU/mL),高FSH组50~60岁患者42例,61~70岁患者45例,大于70岁患者26例,低FSH组50~60岁患者37例,61~70岁患者40例,大于70岁患者25例,观察两组WOMAC评分和T2值。结果绝经后女性膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者随着年龄增加,身高、体重、体重指数、血甘油三酯、胆固醇、血糖无显著变化,WOMAC评分、平均T2值显著性增加。血清FSH水平在50~60岁组最高,之后随着年龄增加,血清FSH浓度显著下降,血清黄体生成素(1uteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)在绝经后随年龄增加逐渐降低,LH下降有显著性,E2下降无显著性。与FSH>40mIU/mL组比较,FSH<40 mIU/mL组的年龄差异无统计学意义,但WOMAC评分、T2值显著增加。结论膝骨关节炎是增龄性疾病,绝经后女性雌激素水平显著下降,50~60岁卵泡刺激素达到分泌高峰,排除年龄、雌激素的影响,随着卵泡刺激素的下降,骨关节炎症状加重。

糖尿病雄性大鼠骨代谢特点的观察

目的观察Ⅱ型糖尿病雄性大鼠骨代谢的特点以及骨密度和骨组织形态计量学指标的变化。方法采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素诱导建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型。20周后处死大鼠,测定股骨和腰椎骨密度、骨形态计量学以及骨代谢相关指标(血清骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶、24 h尿C a、24 h尿羟脯氨酸),此外还观察了GHbA 1c、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、胰岛素样生长因子-Ⅰ等变化。结果Ⅱ型糖尿病大鼠血清骨钙素、股骨和腰椎骨密度以及骨形态计量学指标反映骨形成参数均明显低于正常对照组,而血抗酒石酸酸性磷酸酶活性和尿钙、尿羟脯氨酸排出量以及形态计量学反映骨吸收参数均明显高于正常大鼠。结论Ⅱ型糖尿病大鼠的骨吸收加快而骨形成不足,导致其骨量下降和骨形态计量学特性改变。

踝关节骨折的手术治疗分析

目的探讨和总结踝关节骨折手术治疗及术后康复的效果。方法对2005年4月～2010年6月收入院的54例踝关节骨折的患者进行手术治疗,男34例,女20例,年龄18～70岁,平均41岁,其中旋后内收型15例,旋前外旋型12例,旋前背屈型9例,旋后外旋型18例。所有患者均采用手术治疗,内踝采用螺钉或张力带钢丝固定,外踝用钢板螺钉或张力带钢丝固定,后踝以螺钉内固定。术后进行规范的功能锻炼。结果 54例均得到随访,随访1～4年,平均16个月,治疗效果优良率85.2%。结论早期手术、踝关节骨折解剖复位、牢固的内固定及术后早期积极功能锻炼对改善远期疗效非常重要。

克氏针固定并双侧骨道缝合法治疗锤状指畸形

目的探讨应用单枚克氏针固定并双侧骨道缝合方法治疗锤状指的临床疗效。方法 2011年6月至2014年10月,对23例锤状指患者应用单枚克氏针固定远指间关节,双侧骨道缝合法重建伸指肌腱止点。术后6周拔除克氏针进行功能康复锻炼。结果术后随访4~11个月,平均6个月,其中20例获得随访,3例失访,将患指与健指的远侧指间关节的活动度进行对比,按照TAM系统评定方法进行评定,优12例,良5例,差3例,优良率85.00%。结论应用单枚克氏针固定并行双侧骨道缝合方法治疗锤状指畸形操作简便、固定牢固、经济实用,获得了良好的活动度,是治疗锤状指的有效方法。

乙醇非氧化代谢产物脂肪酸乙酯的研究进展

脂肪酸乙酯(fatty acid ethyl esters,FAEEs)是乙醇经非氧化代谢途径的产物,其在诱导器官损害方面发挥着重要的作用,可作为长期摄入酒精的标记物。本文对FAEEs在体内的毒性、作为酒精摄入标记物的证据、相关合成酶提取以及FAEEs的检测等方面的研究进展进行综述,以期为乙醇代谢研究方面提供一定的理论依据。