老年性痴呆发病过程中内源性甲醛慢性损伤机制

通过原子力显微镜、荧光标记、Congo染色等方法,观察到低浓度甲醛可以诱导人类神经Tau蛋白错误折叠并形成具有细胞毒性的似球状聚积物;气相色谱和液相色谱等分析结果表明,神经鞘磷脂N-Acyl-4-sphingoine-1-phosphocholine(myelin)的过氧化能够产生甲醛分子;脂质过氧化的代谢产物丙二醛(malondialdehyde)在修饰蛋白质(BSA)的过程中,亦可产生甲醛分子.以上结果为内源性甲醛的产生揭示了新的途径.值得注意的是,在生理条件下,血液中内源性甲醛的水平维持在一个动态平衡((0.087±0.004)mmol/L),与体外培养神经细胞时甲醛产生毒性的浓度(～0.1mmol/L)十分接近,甚至已经达到产生一定细胞毒性的水平.随着机体的衰老,内源性甲醛的调节机能下降,在氧化应激等相关因素的诱导作用下,内源性甲醛浓度可能升高,对中枢神经系统一定部位的神经细胞造成慢性损伤,这可能是散发性老年痴呆发病的机制之一.

乙醛对人类神经tau磷酸化的影响

用乙醛对人类神经tau进行醛胺化 ,通过NCLK (neuronalcdc2 likeproteinkinase)和 [γ 3 2 P]ATP对其磷酸化 .磷酸化的产物经胃蛋白酶降解及HPLC (C 18)分析降解片段 ,发现醛胺化tau的降解物中有两个新的磷酸化肽段 (A4和A6 ) .

人DRR1真核表达载体和稳定转染HEK293细胞株的建立及鉴定

目的:构建人DRR1基因的真核表达载体,通过转染HEK293细胞建立稳定的DRR1表达细胞株。方法:通过改造质粒pIRES,在其MCS1和MCS2中分别引入串联亲和纯化标签和绿色荧光蛋白基因,形成一个新的表达质粒pFSIG。将PCR扩增的DRR1基因插入pFSIG中进行酶切和测序验证。用重组质粒pFSIG-DRR1转染HEK293细胞,通过G418和绿色荧光检测筛选DRR1稳定表达细胞株。通过W esternb lot鉴定FS-DRR1蛋白的表达。结果:酶切、PCR和测序证实成功构建了pFSIG-DRR1表达质粒;建立了稳定转染的HEK293细胞系,W estern b lot检测证明重组DRR1在该细胞系中成功表达。结论:融合有串联亲和纯化标签的DRR1真核表达载体的构建和稳定表达细胞HEK293株的建立为在生理条件下研究DRR1的相互作用蛋白奠定了基础。

配对螺旋样纤维(PHF)-Tau与神经细胞的死亡

神经纤维缠结 (neurofibrillarytangles ,NFT)是老年性痴呆病的重要病理特征 ,人类神经tau分子聚集形成的配对螺旋样纤维 (pairedhelicalfilaments ,PHF)是NFT的主要成分 .最近研究表明 ,PHF与神经细胞的坏死和程序化死亡密切相关 。