西安地区EV71感染手足口病的临床特征

目的了解西安地区EV71感染手足口病患儿的临床特征。方法采集手足口病患儿的疱液和(或)咽拭分泌物进行RT-PCR检测;分析EV71感染手足口病患儿的临床特征。结果 96例手足口病患儿中28例为EV71感染;男女比为1.8∶1;0～5岁27例(96.4%);19例为城区患儿(67.9%),其中幼托机构和小学患儿19例(67.9%)。临床表现中发热16例(57.1%),发热多发生在出疹之前;出疹部位为手足24例(85.7%)、臀部11例(39.3%)、肛周5例(17.9%)、膝部16例(57.1%)、肘部5例(17.9%),臀部皮疹以1岁以下患儿为主(81.8%,9/11);所有患儿均痊愈,病程5～11 d,无后遗症。获得了2008年西安地区EV71流行株,将核苷酸序列提交NCBI Genbank,获得核苷酸登录号EU812461。结论本次流行发生于春末夏初;5岁以下儿童是主要感染人群;幼托机构和小学患儿占比例高,可能与EV71经接触传播有关;给予对症治疗后均痊愈。

B19病毒VP1u蛋白对胎鼠心脏的影响

目的探讨B19病毒vplu蛋白是否影响心脏发育及相关机制。方法对不同孕龄母鼠注射B19病毒vplu蛋白,采集胎鼠心脏组织标本,通过光镜、电镜、免疫组织化学、TUNEL和原位杂交技术观察心脏细胞结构变化、细胞凋亡及相关基因或表面标志物变化。结果实验期间有23只小鼠怀孕,vplu蛋白和(或)抗vplu蛋白mAh干预组与对照组均未见胎鼠流产。各组产仔数量及鼠心脏重量进行组间方差分析,差异无显著性(P>0.05)。vplu蛋白和(或)抗VPIu蛋白mAl干预组光镜下均可见心肌细胞间隙增宽,胞质透明淡染,部分心肌细胞脂肪变性。电镜下vplu蛋白(或)和vplu蛋白mAh共同注射组、抗VPIu蛋白mAb注射组均可见线粒体聚集在增宽的心肌细胞间隙中,有空泡化,并TUNEL免疫荧光和免疫组织化学显示心肌细胞发生细胞凋亡。对照组胎鼠均未见异常。结论B19病毒vplu蛋白与胎鼠流产、心脏发育畸形无关,与胎鼠心脏水肿有关。

ELISA法检测人微小B19抗体及其临床应用评价

目的建立检测人微小病毒B19的间接酶联免疫吸附(ELISA)法,评价其临床应用价值。方法采用原保存的XA-B19 VP1独特区蛋白包被ELISA板,优化该方法检测B19抗体的最佳实验条件。与聚合酶链反应(PCR)、parvovirus B19 ELISA方法进行比较,评价其一致性。结果最佳包被量为25 ng/孔,标本血清最佳稀释倍数为1∶200。建立的间接ELISA检测体系与腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、疱疹病毒抗体阳性血清无交叉反应。其检测B19 IgM敏感性为88.37%,特异性为96.15%,与PCR方法一致性好(kappa值>0.75,P>0.05);与parvovirus B19 IgM ELISA方法符合性好,符合率为96.8%。与parvovirus B19IgG ELISA方法比较kappa值>0.75,P>0.05,两种检测方法一致性好。结论建立的间接ELISA检测B19抗体的方法具有灵敏度高、特异性强、经济、快速、方便等优点,适合于流行病学调查和临床标本检测。

“创新思维”通识课程教学改革的探索与实践

随着21世纪高等教育的国际化,以斯坦福大学哈素·普拉特纳设计学院＂设计思维＂系列课程为代表的各类创新思维课程日益为中国应用型本科高校所重视。传统的教育方式面临挑战。笔者通过两年的教学实践,务求使国外高校创新思维课程与我国应用型本科院校通识教育接轨,实现课程的本土化。

急性呼吸道感染住院儿童人类博卡病毒感染的临床特征

目的了解西安地区以急性呼吸道感染住院患儿的人类博卡病毒(HBoV)感染的临床特征。方法将2008年1月-12月以急性呼吸道感染住院患儿的咽拭及痰液标本252例分成2份,1份应用直接免疫荧光法检测RSV,甲、乙型流感病毒,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型副流感病毒和腺病毒常见的7种呼吸道病毒;另1份用于提取HBoV DNA,分析HBoV感染的临床特点及流行病学特征。随机抽取1份HBoV DNA阳性扩增产物进行序列测定,并通过Clustal W软件与GenBank中其他HBoV序列进行多序列比对分析。结果252份标本共检测到15份(6.0%)HBoV PCR阳性扩增产物。HBoV感染全年均有发生,冬春季多发;73.3%HBoV感染患儿的年龄为6个月至3岁;53.3%的患儿诊断为支气管肺炎(包括毛细支气管炎);53.3%患儿合并有其他呼吸道病毒的感染,HBoV单独感染与合并其他呼吸道病毒感染在临床特征方面无明显差别。HBoVNS1测序的291bp与GenBank中2个原型株HBoV Stockholm 1(st1,No.DQ00495)、HBoV Stockholm2(st2,No.DQ00496)和北京的2株(No.DQ988934.2及No.DQ988933.1)的同源性为99.0%。结论HBoV在15例以急性呼吸道感染住院患儿的咽拭及痰液标本中检出,HBoV感染以下呼吸道感染为著,与其他呼吸道病毒有较高的合并感染,HBoV单独感染与合并其他呼吸道病毒感染在临床特征方面无明显差别。

人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac系统中的表达及其反应原性分析

目的:探讨人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达及其反应原性分析。方法:以PCR法扩增VP1全长基因,并将其克隆到pFastBac1载体中,通过转化E.coliDH10Bac筛选阳性克隆,抽提重组VP1-Bacmid。以VP1-Bacmid经Cellfectin介导转染昆虫细胞Sf9,获取重组杆状病毒,扩增后感染Sf9细胞表达VP1蛋白,并以SDS-PAGE进行鉴定。以表达的重组VP1蛋白作为抗原,采用间接ELISA法检测B19病毒感染的患儿血清抗体,并与德国ELISA试剂盒检测的结果比较,分析表达产物的反应原性。结果:(1)获得含VP1全长基因的重组杆状病毒,转染Sf9细胞后能表达相对分子质量(Mr)约87000的VP1重组蛋白。(2)以表达的重组VP1蛋白作抗原,与B19病毒感染的患儿血清的反应,平均A值为0.46,P/N值>2.1,与德国ELISA试剂盒检测的结果(平均A值为0.68)相似。结论:人细小病毒B19-XA株VP1蛋白在Bac-to-Bac表达系统中可成功表达,且表达产物能有效地与抗B19病毒的阳性血清反应,具有良好的反应原性。

小儿血液系统疾病人细小病毒B_(19)感染的研究

目的:探讨我国西北地区血液系统疾病患儿人细小病毒B19(HPV B19)感染情况及两者的相关性。方法:对特发性血小板减少性紫癜、再生障碍性贫血和白血病患儿的外周血分别采用PCR方法检测HPV B19-DNA和ELISA方法检测HPV B19-IgG。结果:特发性血小板减少性紫癜患儿HPV B19-IgG阳性率为43.08%(28/65),白血病患儿HPV B19-IgG阳性率为41.07%(46/112),病例组较对照组比较有极显著性差异(P<0.01);再生障碍性贫血患儿HPV B19-IgG阳性率为21.43%(6/28),病例组较对照组比较有显著性差异(P<0.05)。65例特发性血小板减少性紫癜患儿HPV B19-DNA阳性率为40.00%(26/65);28例再生障碍性贫血患儿HPV B19-DNA阳性率为21.43%(6/28);112例白血病患儿HPV B19-DNA阳性率为27.68%(31/112);对照组HPV B19-DNA检测均为阴性。结论:HPV B19感染与我国西北地区部分血液系统疾病患儿发病相关。

感染所致慢性腹泻的防治

在发展中国家,5岁以下儿童每年约有450万人死于腹泻病,其中一半死于慢性腹泻的合并症。引起小儿慢性腹泻的常见感染为病毒、细菌、真菌、寄生虫等引起的肠道内感染,而抗生素相关性腹泻受到关注。免疫缺陷和营养不良是感染持续或反复的重要因素。治疗重点是补充热卡及营养素,纠正水、电解质平衡失调;抗菌药物应针对特异性病原、并依据药物敏感试验结果选用;同时应用蒙脱石粉、锌、微生态制剂、消旋卡多曲等。促进肠粘膜修复药物可能有助于缩短腹泻病程。提倡母乳喂养、妥善治疗急性腹泻、积极防治营养不良、接种疫苗等措施可有效预防慢性腹泻的发生。

溶血尿毒综合征患儿MCP基因突变分析

目的对溶血尿毒综合征(HUS)患儿进行膜辅助蛋白(MCP)基因突变分析。方法对9例HUS患儿提取外周血MCP基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增MCP基因全部14个外显子及其周围的部分内含子,进行DNA序列测定及基因突变检测。50例尿检正常的南方汉族成年人为对照人群。结果9例HUS患儿未发现MCP基因突变,但2例检测到1个MCP变异(IVS9-78G>A),1例为纯合子,另1例为杂合子,50例对照人群基因测序发现同样MCP变异,表明其为MCP基因多态性,但在9例HUS患儿中的等位基因频率与50例对照人群等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MCP基因多态性(IVS9-78G>A)可能是本研究9例HUS患儿发病的易感因素。

9例汉族非典型溶血尿毒综合征儿童CFH基因突变分析

目的检测并分析中国汉族散发性非典型溶血尿毒综合征(aHUS)儿童补体H因子基因(CFH)突变。方法 9例南方汉族散发性aHUS儿童和50例尿检正常的南方汉族成年人,应用PCR和DNA直接测序法进行CFH检测。结果在9例汉族散发性aHUS儿童中检测出15个CFH基因变异——IVS11-64T>A、IVS19+8G>T、IVS18-87T>C、c.2016A>G(Q672Q)、c.2808G>T(E936D)、IVS1-36C>T、IVS19-5T>C、c.1419G>A(A473A)、c.3138C>T(T1046T)、c.3291G>A(T1097T)、c.184G>A(V62I)、c.1204C>T(H402Y)、c.3172T>C(Y1058H)、c.3178G>C(V1060L)和c.3226C>G(Q1076E),其中2个变异(IVS11-64T>A、IVS19+8G>T)在100条正常染色体中未检出,且未见文献报道;其余13个变异在100条正常染色体中也有检出,为CFH基因多态性。在13个CFH基因多态性中,IVS18-87T>C未见文献报道,其余12个CFH基因多态性已见报道。结论在9例中国南方汉族散发性aHUS儿童中新发现了2个变异和1个CFH基因多态性,以及12个已报道的CFH基因多态性。

具有中和活性抗人类腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备具有中和活性抗人类腺病毒(HAdv)单克隆抗体(mAb),并进行鉴定与应用。方法:以活的人类腺病毒3型(HAdv-3)滴鼻免疫BALB/c鼠,用细胞融合技术制备抗HAdv的mAb细胞株,采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对mAb细胞株染色体进行分析;使用鼠mAb亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定,通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光技术进行特异性鉴定。建立HAdv-3感染动物模型,用获得的HAdv-3 mAb进行保护性研究。结果:细胞融合率为86%,抗HAdv抗体阳性孔率为51.4%。鉴定1株杂交瘤细胞(1A4),染色体数为98条,抗体亚类属IgG2a/κ,抗体腹水ELISA效价达10-5。ELISA、Western blot和间接免疫荧光证实该mAb特异性好。该mAb对HAdv-3感染动物有保护性作用。结论:成功地制备具有中和活性的抗HAdv mAb。该mAb识别的是HAdv六邻体蛋白,对HAdv-3感染动物有保护作用。

血浆置换救治儿童蓖麻子中毒7例的临床体会

目的探讨血浆置换(PE)对蓖麻子中毒儿童的治疗效果。方法7例蓖麻子中毒儿童,在常规治疗的基础上,于误食生蓖麻子后30~91 h给予PE治疗,观察PE治疗前后临床症状及生命体征变化,比较PE治疗前后血常规、血生化和血气分析。结果 PE治疗后患儿的临床症状和体征迅速恢复正常,所有患儿均痊愈出院,未遗留任何系统器官功能障碍和后遗症;PE治疗后血清碱性磷酸酶(AKP)、肌酸磷酸激酶(CK)、a-羟丁酸脱氢酶(HBD)、胆碱酯酶(CLA)明显低于PE治疗前(P<0.05或P<0.01),心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05);PE治疗后外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)和血小板(PLT)计数有下降趋势,淋巴细胞(L)和红细胞(RBC)计数有上升趋势,但均无统计学意义(P>0.05),血红蛋白(Hb)较PE治疗前明显升高(P<0.05);PE治疗后pH值、碳酸氢根(HCO_3^-)和剩余碱(BE)明显高于PE治疗前(P<0.01),阴离子间隙(AG)明显低于PE治疗前(P<0.01)。结论对于病情较重的蓖麻子中毒儿童,在常规治疗的基础上有条件可早期行PE治疗,以彻底清除已进入血液和组织器官的毒素,减少后续损伤,确保患儿生命安全。

儿童IgA血管炎肾炎预后危险因素分析

IgA血管炎(IgA vasculitis,IgAV)是儿童时期最常见的全身性小血管炎,其累及肾脏时被称作IgAV肾炎(IgA vasculitis with nephritis,IgAVN),约20%IgAVN患者可发展为慢性肾脏病,其所致的儿童终末期肾病(ESRD)占ESRD病因构成的1%~2%。识别IgAVN预后的危险因素并及时给予有效干预,对改善患儿预后具有重要意义。本文就影响儿童IgAVN预后的危险因素进行阐述,以期为临床决策提供参考。

以腹泻为首发症状的先天性肾上腺皮质增生症1例

患儿,男,17 d,腹泻4 d,反应差1 d。患儿系第1胎第1产,39＋2周剖宫产娩出,出生体质量3.0 kg。生后哭声响亮,Apgar评分1、5、10 min为8,9,10分,无胎膜早破,脐带、胎盘正常,生后24 h开奶,混合喂养,吸吮有力。患儿于入院前4 d出现腹泻,黄色稀便,约7～8次/d,量中等,无脓血、黏液,家长自述尿量无明显减少,

咽拭子及痰液标本肺炎支原体培养对支原体肺炎诊断的影响

目的通过患儿咽拭子及痰液标本肺炎支原体的培养,比较两种标本的培养结果及对儿童支原体肺炎诊断的影响。方法以2007年6月-2008年6月第四军医大学西京医院儿科住院的支气管肺炎患儿231例为研究对象;选取其中42例经ELISA法检测血清肺炎支原体阳性(急性期血清MP-IgM抗体滴度≥1:80[5]或恢复期血清MP-IgG有4倍升高)的患儿作为试验组,选取其中42例年龄及性别与试验组相匹配的ELISA法检测血清肺炎支原体抗体阴性(急性期血清MP-IgM及恢复期血清MP-IgG阴性)的患儿作为对照组,对两组患儿均同时进行咽拭子及痰液标本的肺炎支原体快速培养,并对两种标本的培养结果进行分析。结果试验组42例患儿中有26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性,阳性率61.9%(26/42例)。26例痰液标本或咽拭子肺炎支原体快速培养阳性的患儿中,18例患儿为痰液标本阳性,阳性率69.2%(18/26),8例患儿为咽拭子标本阳性,阳性率30.8%(8/26),其中7例患儿的痰液标本和咽拭子培养均阳性。对照组42例患儿中有1例咽拭子MP快速培养阳性。结论痰液标本MP快速培养的阳性率高于咽拭子培养的阳性率,与咽拭子相比,痰液标本是诊断支原体肺炎最佳的标本类型。对于ELISA法血清MP阳性的患儿,痰标本MP快速培养检测MP的临床意义远大于ELISA法血清MP阴性的患儿。

企业并购财务风险分析及建议

本文着重分析了不同融资方式对各利益主体所产生的影响,并对并购实践活动提出一些建议。

抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果:经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.6×106个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106,经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论:利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库,为进一步的研究奠定了基础。

汉族非典型溶血尿毒综合征儿童CFI基因突变分析

目的分析汉族非典型溶血尿毒综合征(aHUS)儿童CFI基因突变及其特点。方法研究对象为9例汉族aHUS儿童和50例尿检正常的汉族成年人。分别取其外周血3ml,提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增CFI基因的全部13个外显子及其周围部分内含子。应用正反向引物对PCR产物进行直接DNA序列测定。结果在9例汉族aHUS儿童中未发现CFI基因致病突变;但检测出6个CFI基因多态性,即IVS5+61G>A、804G>A、IVS7+99delT、IVS8-49C>G、IVS11+33A>G和*112C>T。结论CFI基因突变不是本研究9例汉族aHUS儿童的主要致病原因。

信息科学与时间生物医学

如何发挥计算机在快速分析研究处理大量的科学数据信息过程中的优势，将其用于时间生物医学的教学、治疗、研究中。笔者分几方面介绍信息科学在时间生物医学中的应用研究：(1)动态血压数据库系统；(2)高血压病诊治时间医学系统应用软件；(3)SD—93智能型子午流注针刺补泻治疗仪及其应用研究；(4)中医针灸时间治疗学——子午流注计算机教学软件；(5)智能型时间生物医学动物实验柜系统；(6)穴位温差测量仪。