基于析因设计探讨金雀根及肾消通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织CD68/iNOS和p38MAPK信号通路的影响

目的:基于析因设计观察金雀根及肾消通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织巨噬细胞标记物CD68/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、p38MAPK信号通路的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组(S组)10只和造模组60只。造模组大鼠以单侧肾切除联合一次性腹腔注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病肾病模型。根据析因设计原理将成模大鼠随机分为模型组(A0B0组)、肾消通络方组(A1B1组)、金雀根组(A1B0组)、肾消通络方减金雀根组(A0B1组),另设阳性对照恩格列净组(Em组)。S组和A0B0组给予等容积的1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余组给予相应药物灌胃8周。治疗前及治疗后每隔4周检测空腹血糖、24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)。药物干预8周后处死大鼠,检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN);PASM-Masson染色观察肾脏病理,免疫组化法检测肾组织CD68、iNOS表达;Western Blot检测肾组织中骨调素(OPN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p38MAPK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达。结果:A0B0组大鼠空腹血糖、Scr、BUN和U-mAlb水平较S组显著升高(P<0.01),肾脏病理表现为肾小球基底膜增厚、系膜增生、系膜外基质增多、出现K-W结节,CD68、iNOS、OPN、TGF-β1、p-p38MAPK蛋白表达显著升高(P<0.01);经治疗后,Em组、A1B1组、A0B1组血清Scr、BUN、U-mAlb水平和肾组织CD68、iNOS、OPN、TGF-β1、p-p38MAPK/p38MAPK表达均有所下调,与A0B0组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);Em组空腹血糖水平显著下调(P<0.01),A1B1组、A0B1组和A1B0组空腹血糖与A0B0组比较差异无统计学意义。结论:金雀根和肾消通络方均可改善肾功能,降低尿蛋白,减轻糖尿病肾病肾脏炎性损伤,其机制可能与抑制巨噬细胞和p38MAPK信号通路激活,减少TGF-β1等炎症介质的释放有关。

基于析因设计探讨金雀根及其复方对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及对氧化应激的干预

目的基于析因设计探讨金雀根及其复方对DKD大鼠的治疗作用及对氧化应激的干预。方法SD大鼠60只随机分为正常组、模型组、复方组、金雀根组、复方去金雀根组、西药对照组。除正常组外其它组以单肾切除联合STZ诱导的DKD大鼠为模型,予以相应药物灌胃8周后比较各组大鼠的体重、血糖、24h尿微量白蛋白及肾功能,PASM-Masson套染观察肾脏病理,并检测氧化应激相关指标,Western blot检测P38MAPK信号通路相关蛋白表达。结果与模型组相比,金雀根复方组体重增加,血糖、尿微量白蛋白均有所下降,BUN、SCR降低,肾脏病理明显改善,SOD活性增加,ROS、MDA表达含量下降,p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表达水平显著下降。金雀根组SOD活性增加,ROS、MDA表达含量下降,但p-p38MAPK、TGF-β1蛋白表达水平与模型组不存在统计学意义(P>0.05)。结论金雀根复方能够有效延缓DKD的进展,改善临床症状,减少尿蛋白,恢复肾功能,并可有效抑制DKD大鼠的氧化应激反应。通过抑制p38MAPK信号通路调控氧化应激可能为其延缓DKD的进展的机制之一。析因设计分析表明,在缓解临床症状,减少尿蛋白,改善肾功能等方面,复方去金雀根优于单药金雀根,而在抑制氧化应激方面,单药金雀根的作用更为显著,不同水平上二者均具有协同增效的作用。金雀根可通过抑制肾脏的氧化应激反应而起到肾脏保护作用,但并未证实其与p38MAPK信号通路的关联。

肾消通络方对糖尿病db/db小鼠肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:观察肾消通络方对自发性2型糖尿病动物模型db/db小鼠肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨肾消通络方对db/db小鼠肾脏的保护作用和机制。方法:将24只SPF级8周龄的雄性db/db小鼠随机分为中药组、西药组、模型组,每组8只;另取8只同遗传背景野生型正常db/m小鼠为正常组,连续治疗8周。于治疗前与治疗后每隔2周检测空腹血糖,每隔4周收集24h尿液,用于检测24h尿微量白蛋白水平。给药8周后处死小鼠,摘眼球取血,用于检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;分离肾脏,放入4%多聚甲醛中固定,用于后续病理检测。HE和PAS染色观察肾组织病理改变;免疫组织化学法检测肾组织中Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、Scr、BUN、24h尿微量白蛋白显著升高(P<0.01);肾组织结构排列紊乱,肾小球肥大,基底膜增厚,系膜细胞增生、毛细血管管腔变窄;肾组织TLR4、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组和西药组血清Scr、BUN、24h尿微量白蛋白均显著降低(P<0.01);肾脏病理改变减轻;TLR4、NF-κB p65、MCP-1蛋白表达显著减弱(P<0.01)。结论:肾消通络方能够抑制db/db小鼠肾脏炎症因子的表达从而减轻肾脏损害,其机制可能与下调TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达有关。