脂多糖诱导下急性肾功能衰竭小鼠肾脏中TOLL样受体4的表达

目的:探讨TOLL样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肾功能衰竭(ARF)肾脏中表达及意义。方法:建立LPS诱导的小鼠ARF模型。应用免疫组织化学SABC法、Western blot及RT-PCR法检测肾组织TLR4蛋白及mRNA的表达变化。TUNEL法检测肾脏的凋亡情况。结果:TLR4在正常组(NG)肾脏中主要分布于肾小管、管周、肾间质区,肾小球系膜区也有表达,而ARF组TLR4在上述区域的表达显著增加,以近端小管、肾间质、远端小管、肾血管等部位较明显,两组光密度值比较有明显差异(P<0.05);TLR4的表达与肾功能的改变呈正相关(r=0.91);与NG组相比,ARF组的TLR4蛋白及mRNA水平的表达显著上调,以造模24 h后最明显;TUNEL法显示凋亡小体主要出现在ARF组肾脏的近端小管及管周围,肾小球无明显变化。结论:TLR4在脂多糖诱导的小鼠ARF肾脏中有较高表达,同时在其肾近端小管及小管周围组织发现较明显的凋亡小体。二者在ARF发病中可能起重要作用。

应用基因缺失小鼠研究TLR4在LPS诱导的急性肾衰竭中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肾衰竭(ARF)肾脏中的作用机制。方法:以TLR4基因缺失的C3H/HeJ小鼠和其野生正常对照的C3H/HeN小鼠为实验对象。实验分TLR4+(C3H/HeN)组、TLR4-(C3H/HeJ)组,单次性腹腔注射LPS(15 mg/kg)诱导小鼠ARF模型。24 h后检测血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)值来评估肾功能;Nomura评分法对肾组织病理改变进行半定量评分;免疫组织化学SABC法检测TLR4在两组小鼠肾组织中的表达、RT-PCR法检测肾组织总TLR4 mRNA的表达变化、免疫蛋白印迹检测肾组织总TLR4蛋白水平;TUNEL法检测肾脏组织的凋亡情况。结果:TLR4+(C3H/HeN)组的Cr、BUN分别为(202.26±11.08)μmol/L(、20.36±1.52)mmol/L,TLR4-(C3H/HeJ)组的Cr、BUN分别为(109.67±13.32)μmol/L(、6.42±0.41)mmol/L,差异有显著性(P<0.01);TLR4-(C3H/HeJ)组的肾组织结构正常,无明显的病理改变,而TLR4+(C3H/HeN)组小鼠肾小管呈轻中度的病理改变,主要表现为近端肾小管管腔扩大、空泡形成等;与TLR4-(C3H/HeJ)组相比,TLR4+(C3H/HeN)组的TLR4蛋白及mRNA表达明显上调;TUNEL法显示凋亡小体主要出现在TLR4+(C3H/HeN)组小鼠肾脏的近端小管及管周围,肾小球无明显凋亡小体出现,TLR4-(C3H/HeJ)组小鼠肾组织中未检测到凋亡小体,二者平均吸光度值分别为(0.117±0.008)和(0.038±0.003),差异有显著性(P<0.001)。结论:TLR4在LPS诱导的小鼠急性肾功能衰竭的发病中起一定作用。LPS可能通过激活TLR4信号转导途径引起肾组织中肾小管上皮细胞凋亡过度,肾小管上皮细胞数量减少,从而导致急性肾功能衰竭的发生。

管竞环教授分期分证论治IgA肾病经验

管竞环教授治疗IgA肾病具独特经验,在诊治中注意分期分证治疗。IgA肾病分急性期和慢性期,急性期以疏散风热、解毒利咽、清利湿热、凉血止血为主,慢性期以益气补肾、温补肾阳、滋阴益肝补肾、益气养阴等为主;分证主要根据临床主症如血尿、蛋白尿等采用不同的方法,强调①见血休止血,治本当求源;②精微勿外流,蛋白需固摄;③衷中参西,护肾防变;④首重感染,祛除诱因;⑤重视舌诊,灵活施治;⑥扶正固本,顾护脾胃;⑦辨证求因,补泻兼施。

特异性shRNA抑制人近端肾小管上皮细胞Toll样受体4的表达

目的:研究RNA干扰法对人近端肾小管上皮细胞(HKC)中Toll样受体4(TLR4)表达的抑制作用。方法:将针对TLR4分子设计的采用体外转录生物合成的特异性短发卡RNA(shRNA)双链分子用脂质体转染的方法导入体外培养的HKC;应用免疫荧光染色在共聚焦显微镜下观察TLR4的分布及表达强弱;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测TLR4及内参照-βactin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果:干扰组TLR4的荧光强度显著低于对照组,其mRNA和蛋白的表达量分别下降了67%和62%。同时观察到TLR4主要分布于HKC细胞的胞膜及胞质区。结论:采用生物体外转录的方法成功合成针对TLR4的shRNA双链分子,并有效地转入HKC细胞中使TLR4的表达下调。

管竞环教授运用血府逐瘀汤经验

管竞环教授是我国著名的中医肾病专家,对"血府逐瘀汤"的运用在结合中药微量元素的基础上强调应以辨证论治为准绳,注重辨定位、辨归经、辨四性等3方面,还原方剂本质,提高临床疗效。

PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应

目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂10μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂20μmol/L)、rHuEPO干预组(20U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO+LiCl双干预组。Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、AktSer473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3βSer9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;An-nexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡。结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一。rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

管竞环论肾系疾病辨证论治选药组方筛选法

管竞环是武汉市第一医院主任医师、教授,全国第二、三、四批名老中医药专家学术经验继承工作指导老师,世界中医药学会联合会肾病专业学术顾问,从事中医肾病临床、科研、教学近50年,中医理论功底深厚,临床疗效卓著;在科研方面,首次运用元素检测方法把中药四性、五味和方剂四性成功进行了量化,并出版了《中医药理论量化与微量元素》,

苦参素对维持性血液透析患者微炎症状态的影响:随机对照试验

背景:维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者体内普遍存在微炎症状态,它严重影响MHD患者长期生存率,改善MHD患者微炎症状态具有重要意义。目的:观察苦参素对MHD患者微炎症状态的影响,探讨苦参素对MHD患者微炎症的治疗作用。设计、场所、对象和干预措施:选择2008年6～9月在武汉市第一医院血液净化中心进行规律性维持血液透析治疗的60例慢性肾衰竭患者,随机分为治疗组和对照组,每组各30例。治疗组给予苦参素胶囊0.4g口服,1次/d,连续服用3个月,对照组不用药。主要结局指标:检测治疗前及治疗3个月后血清超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血清白蛋白(albumin,Alb)、血清前白蛋白(pre-albumin,PAB)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和三酰甘油(triglyceride,TG)浓度。结果:治疗组3例服药后当天出现胃痛,其中2例退出,1例经停药观察后症状消失,继续服药后胃痛未再次出现。治疗组2例服药第2天出现皮疹,经停药观察后症状消失,继续服药后未再次出现皮疹。其他患者均未发现不良反应,共58例完成观察。与治疗前比较,治疗组治疗后hs-CRP、IL-1β和TNF-α水平降低(P<0.01),Alb、PAB、TC及TG水平升高(P<0.01),与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:苦参素能够改善MHD患者的微炎症状态。

393例维持性血液透析患者临床资料分析

随着血液净化技术的推广与普及，维持性血液透析（MHD）是目前我国慢性‘肾衰竭（CRF）患者延长生命采用的最主要方法。武汉市第一医院肾内科血液透析中心有透析机78台，其中血液透析机71台，血液透析并滤过机7台，另有连续性肾脏替代治疗（CRRT）机2台。自2007年1-12月共有393例成年CRF患者在我中心行维持性血液透析，现将患者临床资料报告分析如下。

正颌联合术后正畸矫治在唇腭裂术后牙颌面畸形患者中的应用

目的观察正颌外科联合术后正畸矫治在唇腭裂术后牙颌面畸形患者中的临床应用效果。方法选取2010年6月至2012年6月我院收治的120例唇腭裂术后牙颌面畸形患者,将其作为临床研究对象,随机分为对照组和观察组,每组60例。其中对照组采用正颌外科手术进行治疗,观察组采用正颌外科联合术后正畸矫治进行治疗。观察两组患者治疗后头影测量数据的变化、咀嚼功能的改善及术后畸形复发情况。结果观察组患者治疗后SNB、ANB、LI-NB等指标较治疗前明显改善(P<0.05),其余指标与治疗前较为相近(P>0.05);观察组并发症发生率为30.00%,明显低于对照组(P<0.05),观察组牙齿吻合度、咀嚼能力改善的程度为66.67%、83.83%,均较对照组明显改善(P<0.05),差异均具有统计学意义;观察组的复发率仅为16.67%,而对照组的复发率高达66.67%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论正颌外科联合术后正畸矫治对唇腭裂术后牙颌面畸形的患者具有显著的疗效,头影测量数据有效改善了牙齿吻合度、咀嚼能力,并且减少并发症的发生,值得在临床上广泛应用。

维持性血液透析患者钙磷乘积与营养状态的关系

目的回顾性分析维持性血液透析患者钙磷乘积与营养状态的关系。方法对武汉市第一医院维持性血液透析110例终末期肾脏病患者的临床资料进行回顾性分析,统计其透析前血清钙磷和一般营养状态等指标。钙磷乘积≤55(mg/dl)2为A组,>55(mg/dl)2为B组,比较两组的差异。结果与A组相比,B组血磷(P)明显较高(P<0.01);血浆白蛋白(Alb)、透析前尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量均较高(P<0.05);血钙(Ca)、血红蛋白(Hb)、甲状旁腺激素(iPTH)无统计学意义(P>0.05)。结论血液透析患者钙磷乘积的升高,可能与营养状态的改善,血磷摄入增加有关。

管竞环教授治疗慢性肾衰竭的临证思辨经验

管竞环教授曾是全国中医肾病专业委员会副主任委员,著名肾病专家,全国第二、三、四批名老中医药专家学术经验继承工作指导老师,国务院政府津贴获得者。从事肾脏病的临床、科研工作40余年,经验丰富,

慢性肾衰竭证候标准研究概况

慢性肾衰竭是由于多种慢性肾脏疾患发展到晚期,或累及肾脏的系统性疾病所引起的肾实质损害,而导致慢性肾功能减退,以及由此而产生的各种临床症状和代谢紊乱所致的综合征,相当于中医水肿、癃闭、溺毒、哕逆、关格等病证范畴。

参芎注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤肾脏病理的保护作用

目的观察参芎注射液对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法选取SD雄性大鼠24只,随机分为假手术组、模型组和给药组各8只。分别制备肾缺血再灌注损伤模型。给药组大鼠于术前连续3d腹腔注射参芎注射液(给药剂量33.3mL/kg体重)。模型组与假手术组均腹腔注射等量生理盐水。24h后处死大鼠,测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)并观察肾脏组织的病理学改变。结果模型组大鼠血清Cr与BUN均明显高于假手术组(均P<0.01);给药组大鼠血清Cr与BUN均较模型组明显降低(均P<0.01)。假手术组大鼠肾小管上皮细胞未见明显缺血性改变,模型组大鼠肾小管上皮细胞缺血性改变明显,给药组大鼠肾小管上皮细胞缺血性改变较模型组明显减轻。结论参芎注射液对急性肾缺血再灌注损伤大鼠肾脏有明显的保护作用。

参芎注射液对腹膜纤维化的抑制作用

目的探讨参芎注射液改善腹膜纤维化的作用机制。方法将32只SD雄性大鼠随机分为4组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、低剂量组（C组，参芎注射液15ml／kg）和高剂量组（D组，参芎注射液30ml／kg），每组8只。于实验第28天处死动物取腹膜组织待检。留取腹膜组织做HE及Masson染色，RT-PCR间接免疫荧光法检测细胞转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果与A组相比，B组的壁层腹膜厚度明显增加；与B组相比，C组和D组的腹膜厚度明显减轻。B组腹膜组织TGF-β1表达明显上调，C组和D组腹膜组织TGF-β1表达明显减低。结论参芎注射液可通过抑制腹膜纤维化大鼠腹膜组织的TGF-β1表达而发挥显著的抑制纤维化的作用。

管竞环治疗慢性肾衰竭的临证思辨经验

管竟环教授曾是全国中医肾病专业委员会副主任委员，著名肾病专家，全国第二、三、四批名老中医药专家学术经验继承工作指导老师，国务院政府津贴获得者。从事肾脏病的临床、科研工作40余年，经验丰富，用药独特，在慢性肾衰的中西医诊治方面造诣深厚。笔者有幸侍诊于旁，受益匪浅。现将管老治疗慢性肾衰竭的经验总结如下。

参芎注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的观察参芎注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织核因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响，探讨其肾保护作用机制。方法将24只SD大鼠随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、参芎预处理组，每组8只。免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达，酶联免疫吸附法检测肾组织TNF-α含量，用MDA和SOD试剂盒分别检测肾组织MDA含量和SOD活性。结果①与假手术对照组相比，缺血再灌注组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达、TNF-α和MDA含量明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．01）；而SOD的活性明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。②与缺血再灌注组相比，参芎预处理组大鼠肾组织NF-κB蛋白表达、TNF-α和MDA含量降低，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；而SOD的活性明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论参芎注射液对肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用，其机制可能与抗自由基氧化损伤以及抑制炎性细胞因子NF-κB和TNF-α的表达有关。

缺血预处理对缺血再灌注损伤大鼠肾组织TLR2表达的影响

目的观察缺血预处理对缺血／再灌注损伤大鼠肾组织Toll样受体2（TLR2）表达的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术对照组（SHAM组）、单纯缺血再灌注组（I／R组）和缺血预处理组（IPC组），每组8只。于术后24h留取各组大鼠血标本和肾组织。检测各组大鼠血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN），肾组织切片行HE染色后观察其病理学改变，酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量，实时荧光定量多聚酶链反应检测肾组织TLR2mRNA表达，Westernblot检测肾组织TLR2蛋白表达。结果与SHAM组相比，I／R组大鼠SCr和BUN升高，肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．01）；与I／R组相比，IPC组大鼠SCr和BUN降低，肾组织TNF-α含量和TLR2蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论缺血预处理可能通过抑制大鼠。肾组织TLR2表达及其信号通路，下调TNF-α的表达，发挥其肾脏保护作用。

参芎注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜组织CTGF表达的影响

目的探讨参芎注射液对腹膜纤维化大鼠腹膜组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法用4.25%腹膜透析液+脂多糖建立大鼠腹膜纤维化模型。实验分正常对照组(A)、模型组(B)、低剂量参芎注射液治疗组(C)、高剂量参芎注射液治疗组(D)。实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CTGF mRNA的表达,间接免疫荧光及免疫印迹法检测蛋白的表达水平。结果与A组相比,B、C、D组的CTGF mRNA和蛋白的表达水平明显上调;与B组相比,C、D明显减轻(P<0.05)。结论参芎注射液可能通过抑制腹膜纤维化大鼠腹膜组织的CTGF表达而发挥一定的抗纤维化作用。