异基因造血干细胞移植后发生移植物抗宿主病患者血清外泌体miRNAs敏感生物标志物的表达分析

背景:当前国内外关于人类造血干细胞移植后外泌体miRNA和移植物抗宿主病发生的相关性研究甚少。国内研究匮乏,外泌体来源的核酸分子有望成为新型生物标志物预测急性移植物抗宿主病的发生。目的:探讨异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病患者外周血血清外泌体中候选基因miRNAs的差异表达。方法:收集2017年8月至2018年5月异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病以及未发生急性移植物抗宿主病患者共30例,其中急性移植物抗宿主病组20例,非急性移植物抗宿主病组10例。提取移植前后血清外泌体及mi RNA,基因芯片杂交后图像采集和数据分析。结果与结论:与对照组相比,移植前后呈上升或下降趋势且信号差异倍数超过10倍的mi RNAs在急性移植物抗宿主病组有11个mi RNAs上升,26个下降。hsa-mi R-3976、hsa-mi R-122-5p、hsa-miR-3125明显上调,hsa-mi R-941、hsa-mi R-4687-5P和hsa-mi R-4769-5p明显下调。

2型糖尿病肾病患者脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白水平及其临床意义

目的检测2型糖尿病(T2DM)合并慢性肾脏病(CKD)患者的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP水平,并探讨其临床意义。方法连续性选取2018年8月至2019年7月间南方医科大学深圳医院收治的220例T2DM合并CKD患者作为观察组,根据尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)分组,其中UACR<30 mg/g者70例(A组),300 mg/g>UACR≥30 mg/g者82例(B组),UACR≥300 mg/g者68例(C组)。以同期门诊体检正常者54例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定受试者血浆中的A-FABP水平,比较各组受试者的临床指标[体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖PBG、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血肌酐(Scr)],分析A-FABP水平与上述相关指标的关系。结果观察组患者的BMI、FPG、2 hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、LDL-C、TG、TC、Scr及A-FABP水平明显高于对照组,HOMA-β、HDL-C水平明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);A、B、C三组之间FPG、2 hPBG、HbA1c、TG、HDL-C、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);A、B、C三组患者的HOMA-IR、A-FABP水平均呈增高趋势,HOMA-β呈降低趋势,两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05);C组患者的TC水平为(4.12±1.30) mmol/L,明显高于A组的(3.48±0.29) mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05),但B组的TC水平分别与A、C组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组患者的Scr水平为(111.67±33.09)μmol/L,明显高于A组的(87.72±5.70)μmol/L和B组的(87.57±8.79)μmol/L,差异均具有统计学意义(P<0.05),但A组和B组间的Scr水平比较差异无统计学意义(P>0.05);Pearson相关分析结果显示A-FABP与BMI、FPG、2 hPBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR、HOMA-β、TC、HDL-C均呈正相关(r=0.315、0.237、0.332、0.533、0.318、0.741、0.725、0.263、0.275,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,A-FABP、TC、HbA1c是T2DM慢性肾脏病的独立危险因素(P<0.05)。结论 T2DM患者的血浆A-FABP水平升高与其胰岛素敏感降低、糖代谢紊乱的加重具有高度相关性。同时,高水平的A-FABP也是T2DM患者发生CKD的独立危险因素。

过表达HBx的肝细胞对肝星状细胞增殖和活化的影响及其机制

目的探讨HBV感染对肝星状细胞(HSC)活化的影响及作用机制。方法收集2020年11月—2021年1月慢性乙型肝炎患者血浆30份、乙型肝炎肝硬化患者血浆42份、肝细胞癌患者血浆30份及健康体检者(健康对照组)的血浆18份,ELISA法检测血浆和条件培养液中HBx、TGFβ1、多巴胺β羟化酶(DBH)和羟脯氨酸(Hyp)的含量。采用LO2细胞构建过表达HBx稳转株细胞,LO2细胞分为LO2-HBx组(稳定表达HBx)、阴性对照组(LO2-con)、空白组,分别制备LO2-HBx、LO2-con和LO2细胞(Mock)的条件培养基,孵育人HSC株LX-2,分为LX-2/LO2-HBx、LX-2/LO2-con、LX-2/Mock 3组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖变化。采用rhTGFβ1刺激LX-2细胞,另采用TGFβ1受体抑制剂处理LX-2/LO2-HBx组细胞。荧光定量PCR或Western Blot法检测LO2细胞中的HBx及上述LX-2细胞中α-SMA、Col1A1、DBH和TGFβ1的表达。多组间比较采用单因素方差分析,进一步比较方法采用Bonferroni法;2组间比较采用t检验;相关性分析采用Pearson法。结果LO2-HBx可稳定表达HBx蛋白,其培养上清中TGFβ1含量升高(F=324.701,P<0.01);共培养LX-2/LO2-HBx组细胞发生明显细胞形态变化,出现细胞收缩,胞突明显伸长,胞内脂滴减少,与LX-2/LO2-con组比较其增殖活力明显增强(P<0.05),且α-SMA和Col1A1的mRNA(F值分别为144.712和76.680,P值均<0.01)及蛋白(F值分别为234.142和528.708,P值均<0.001)表达水平升高;LX-2/LO2-HBx组细胞中TGFβ1 mRNA(F=29.382,P<0.01)及DBH mRNA水平升高(F=42.662,P<0.01)。随着rhTGFβ1刺激浓度的增加,LX-2细胞中α-SMA(F=1794.031,P<0.01)、Col1A1(F=91.340,P<0.01)及DBH(F=2501.011,P<0.01)表达增加,在rhTGFβ110 ng/ml时达到峰值。在LO2-HBx组条件培养液中加入TGFβ1受体抑制剂后LX-2细胞中DBH和Col1A1的表达较对照组下调(t值分别为3.603、5.798,P值均<0.05)。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝细胞癌患者的血浆TGFβ1(F=51.188,P<0.001)、HBx(F=39.227,P<0.001)、DBH(F=34.431,P<0.001)及Hyp(F=16.211,P<0.001)较健康对照组升高,血浆中HBx与TGFβ1、TGFβ1与DBH、Hyp与DBH的表达量呈正相关,r分别为0.931、0.863、0.765(P值均<0.001)。结论HBx蛋白可促进LO2细胞分泌TGFβ1,诱导LX-2的增殖和活化,促进肝纤维化的发生,并上调LX-2细胞中TGFβ1及DBH的表达;rhTGFβ1刺激可诱导LX-2活化和DBH表达上调。

血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白水平与糖尿病胰岛素抵抗的相关性分析

目的探讨血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)水平与糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法随机选取2019年3月45例糖尿病患者及同期体检健康者26例作为研究对象,分别作为试验组和对照组,检测两组受检者空腹FABP4水平、空腹血糖(GLU)、空腹血糖胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感性。结果试验组血清A-FABP水平[(12.97±4.96)μg/L]显著高于对照组[(10.55±4.64)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,试验组FABP4水平与GLU、INS、HOMA-IR、胰岛β细胞功能指数和胰岛素敏感性均无相关性(P>0.05)。结论糖尿病患者FABP4水平显著高于健康人群,但是与糖尿病胰岛素抵抗的相关性有待研究。