聂青和:慢性乙型肝炎长效干扰素治疗何时停药?

记者问:请您谈谈长效干扰素治疗能停药吗?聂青和教授:口服抗乙肝病毒药物(核苷(酸)类似物)不能自行停药,因为目前的口服抗乙肝病毒药物只能抑制HBV。但是干扰素治疗可以随时停药!如果追求乙型肝炎的临床治愈,存在停药的时机问题。我们应用长效干扰素治疗慢性乙型肝炎期望达到:1、抑制病毒复制,获得HBe Ag血清学转换;2、最大限度降乙肝病毒低HBs Ag;3、实现临床治愈,并产生表面抗体(HBs Ab);4、获得停止治疗后持久临床治愈,达到完全治愈;5、最大限度降低肝细胞癌(HCC)发生风险。慢性乙型肝炎达到完全治愈即清除HBV DNA(包括ccc DNA和整合HBV DNA)目前是难以实现的。而达到临床治愈,即有限疗程治疗后HBs Ag消失,伴或不伴血清学转换,HBeAg消失、血清中高敏HBV DNA检测不到,肝组织炎症和纤维化减轻,可最大限度降低HCC发生风险,被认为是现在和未来慢性乙肝的治疗方向。

聂青和:非酒精性脂肪性肝病的生活方式干预治疗

记者:请从“生活方式干预”角度谈谈非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治疗?聂青和教授:NAFLD现在也称为代谢相关脂肪性肝病(MAFLD),久坐少动等不健康生活习惯、膳食热量过高、膳食结构不合理等不健康饮食习惯与NAFLD发病率不断增高密切相关。因此,改变不良生活方式是治疗NAFLD的基石。

聂青和:从科普角度谈慢性乙型肝炎患者的“临床治愈”

记者问:中国《慢性乙型肝炎防治指南(2022版)》中谈到了慢性乙肝“临床治愈”,如何才能获得临床治愈呢?聂青和教授:首先要了解什么是慢性乙肝“临床治愈”,根据国内相关指南或共识,临床治愈需要满足四个方面的要求:(1)乙肝表面抗原(HBsAg)转阴,伴或不伴(HBsAb)表面抗体出现;(2)HBV DNA低于检测下限;(3)肝功能保持正常;(4)B超等其他手段检测出的肝组织学没有其他病变。

金属蛋白酶组织抑制因子-2在大鼠肝组织中的定位及表达

用人血白蛋白攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型 ,以正常大鼠为对照。采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中金属蛋白酶组织抑制因子 2 (TIMP 2 )mRNA和相关抗原。了解TIMP 2在正常及实验性免疫性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态。结果为实验组肝脏中TIMP 2mRNA和相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞 ,以汇管区及纤维间隔中最明显 ,阳性信号位于细胞胞浆中 ,未见细胞核表达。提示在肝纤维化中 ,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP 2表达的主要细胞 ,并随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重 ,TIMP

HCV感染后机体保护性免疫缺陷原因探讨

目的探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因。方法根据HCVC区和NS4区基因序列设计并人工合成3条合成肽,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值,同时以正常人血清做对照。结果抗-HCV SP42,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜;116例抗-HCV阳性者中113例(97.41％),抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值偏高,所有病例追踪观察1a(其中11例抗-HCV阳性者随访2a);30例患者接受α-干扰素治疗,发现抗-HCV抗体κ/λ比值恒定不变。结论 HCV感染者抗-HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护性免疫缺陷的原因之一。

GB病毒B型(GBV-B)感染的临床与免疫病理研究

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.1995年 Simons et al 成功地克隆出2株黄病毒 RNA 序列,称之为 GBV-A,GBV-B.继而从一名西非患者血清中克隆出另一黄病毒 RNA 序列,称之为 GBV-C.1996年初美国另一研究小组从一名慢性输血后肝炎患者血清中克隆出一株黄病毒 RNA 序列,称之为 HGV.进一步的研究后认为 GBV-C,HGV 为同一病毒的不同分离株.动物实验发现,GBV-B 可单独引起动物发病,而 GBV-A 单独感染时未能引起发病.本文以此为依据,对 GBV-B 感染者的临床与免疫病理加以研究,试图探讨 GBV-B 对人体肝脏的致病性及其在人体内的分布状态.方法根据 GBV-B NS5区的核苷酸和氨基酸序列,通过计算机软件对其抗原位点进行了预测,并分析其亲水性、键流动性、电荷状态及抗原表位分布等特性,合成一条30个氨基酸多肽.探讨合成肽最佳包被量之后,成功地建立了间接 ELISA 法,用来检测抗-GBV-B.应用此方法检测各型肝炎及其他高危人群血清标本1286份.同时应用 RT-PCR 检测血清中 GBV-B RNA及免疫组化检测肝炎患者肝组织相关病毒抗原.结果经鉴定合成肽纯度在95%以上,氨基酸分析的实际值与理论值基本一致.将合成肽与牛血清清蛋白(BSA)偶联免疫白兔获得高效价抗-GBV-B NS5区的多克隆抗体(PcAb).批内、批间变异系数分别为6.06%和7.65%(均<10%);中和抑制试验结果证明我们建立的 ELISA 法具有较好的特异性.血清抗-GBV-B 检测结果表明各型肝炎患者血清抗-GBV-B 阳性率为10.56%;其中非甲～非戊型肝炎患者血清抗体阳性率为8.57%;肝炎高危人群如献血员、血液透析者及静脉药瘾者血清抗-GBV-B 阳性率分别为2.90%,8.62%及13.44%.随机抽取抗-GBV-B 阳性和抗-GBV-B 阴性血清标本各32例进行RT-PCR 检测 GBV-B RNA,结果64例均为阴性.应用抗-GBV-B 多克隆抗体为试剂,对42例肝炎患者肝组织进行免疫组化研究,均未检测出 GBV-B 相关抗原.结论提示 GBV-B 可能不是人类肝炎病毒,对人体肝脏的致病性轻微,其抗体在不同人群中出现可能是一种短暂的感染,其意义有待进一步研究.

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA

目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.目前关于庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性和组织嗜性尚无结论性资料.本文目的是研究 HGV/GBV-C RNA 在肝组织中表达并进一步探讨HGV/GBV-C 引起肝脏损害的可能机制.方法应用地高辛素标记 HGV/GBV-C cDNA 探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒 RNA.结果检测196例肝炎患者肝组织切片中的 HGV/GBV-CRNA 阳性率为37.24%;在血清中 HGV/GBV-C RNA 呈阳性患者肝组织中该病毒 RNA 检出率为48.94%;单一 HGV/GBV-C 感染者肝组织中检出率为58.33%;阳性信号仅为胞质型.原位杂交信号阳性细胞与肝细胞变性、瘀胆、炎性细胞浸润及细胞坏死程度等并不相关.本文原位杂交与免疫组化两种检测方法对比研究结果表明,两项技术有较高的符合率(86.74%),说明这两项技术具有相辅相成的作用.结论提示 HGV/GBV-C RNA 并不直接损害肝细胞.原位杂交和免疫组化两项技术成功地应用于石蜡包埋切片,为回顾性研究 HGV/GBV-C 的致病性及致病机制提供了有价值的实验手段.

固相致敏红细胞吸附技术快速检测肝硬化患者血清中TIMP-1

目的 建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术(SPASE)用于快速检测肝硬化患者血清中 TIMP- 1.方法 用 TIMP- 1单克隆抗体包被微量血凝板 ,加热冲洗后加入待检血清标本 ,最后加入单克隆抗体致敏红细胞 .应用致敏红细胞作为指示系统 ,观察红细胞吸附状况来判定结果 .结果 SPASE法全过程仅需要 2 .5～ 3h,40 8例肝病患者血清检测 TIMP- 1结果为急性肝炎组检出阳性率 16 .4% ;慢性肝炎组阳性率为 33.3% ;肝硬化组阳性率为 73.6 % .结论 血清中 TIMP- 1的变化可作为肝纤维化较为有用的诊断指标 .SPASE法具有较高的敏感性、特异性和快速性 ,试剂用量少 ,且不需复杂的仪器设备 ,实验程序又简单 。

单克隆抗体双抗体夹心ELISA快速检测肝炎患者血清中TIMP-2

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的双抗体夹心ELISA法,探讨血清TIMP-2的水平与肝纤维化病程进展程度的关系.方法确定包被TIMP-2单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-2 McAb的最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法.并用于临床初步检测408例肝炎血清TIMP-2水平.结果包被TIMP-2 McAb的最佳工作浓度为2μg/ml,HRP标抗体的最佳工作浓度1:400.该法具有良好的重复性,灵敏度达5 ng/ml,中和抑制率在80%以上,稳定性能好,与国外TIMP-2 ELISA试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有良好的相关性(Y=1.2752X-4.7465,r=0.976).临床检测表明TIMP-2随着病损纤维化程度加重而升高,与正常人血清TIMP-2水平相比差异显著(P＜0.01～0.001).结论该法能够快速检测人血清中TIMP-2浓度,血清TIMP-2可作为定量诊断肝纤维化指标之一.本试验为国内TIMP-2诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据.

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒表达的免疫组化研究

目的 了解HGV/GBV C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV C相关抗原的分布状况 ,探讨HGV/GBV C对肝脏的损害机制。方法 以抗HGV/GBV CNS5单克隆抗体或抗HCVNS3单克隆抗体为试剂 ,采用免疫组织化学方法检测肝炎病人肝组织中HGV/GBV C、HCV相关抗原表达。结果 5 6例肝炎病人肝组织中HGV/GBV C相关抗原表达阳性率为 2 6 .79% (15 / 5 6 ) ;HCVNS3抗原表达阳性率为 39.2 9% (2 2 / 5 6 )。HGV/GBV CNS5抗原表达阳性信号主要位于肝细胞胞浆中 ,染色阳性细胞周围可见淋巴细胞浸润。结论 肝细胞中存在HGV/GBV C相关抗原表达 ,其编码产物可能作为一种靶抗原 ,诱发免疫病理反应 。

血清学诊断肝纤维化新指标——金属蛋白酶组织抑制因子检测方法学建立及应用评价

目的 自行建立一种改良固相致敏红细胞吸附技术 (SPASE)用于快速检测肝硬化病人血清中金属蛋白酶组织抑制因子 1,2 (TIMP 1和TIMP 2 ) ,同时研究TIMP 1和TIMP 2在肝硬化病人肝组织中的定位及表达状态 ,以及肝组织TIMPs与血清TIMPs的相关性。探讨血清中TIMP 1和TIMP 2可否作为肝纤维化的血清学诊断新指标。方法 应用自行建立的SPASE检测 10 82例肝病病人 (其中肝硬化 3 10例 )血清标本中的TIMP 1和TIMP 2。用原位杂交及免疫组织化学技术分别检测 40例肝硬化病人活检肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 ,并与病人自身血清检测结果对比。另检测 2 0例正常肝组织作为对照。结果 SPASE法特异性中和抑制试验示中和抑制率均在 70 %以上 ,检测 3 10例肝硬化病人血清中TIMP 1和TIMP 2的阳性率分别为 79.68%和 65 .16%。 40例肝硬化病人肝组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原表达阳性率为 10 0 % ,TIMP 1表达强度高于TIMP 2 (P <0 .0 1) ;阳性信号主要位于肝细胞胞质内 ,未见细胞核表达。 40例肝硬化肝活检病人血清检测结果 ,TIMP 1阳性率为 10 0 % ,TIMP 2阳性率为 77.5 % ( 3 1/4 0 )。正常肝组织无一例有TIMPs相关抗原表达。结论 TIMPs定位于肝硬化病人的肝细胞胞质内 。

毒素型及免疫型大鼠纤维化肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子定位及表达差异

目的探讨人血白蛋白免疫诱导型及四氯化碳(CCl4)毒素诱导型所致大鼠肝纤维化模型肝组织中金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)定位及表达状态的差异。方法分别以20%人血白蛋白进行免疫攻击和CCl4毒素攻击大鼠,造模结束后对大鼠肝组织进行HE、VG染色及电镜观察;同时研究TIMP1、TIMP2蛋白及mRNA定位及表达状态。结果造模结束后,免疫诱导型模型肝组织病理改变具有进行性加重趋势,TIMP1、TIMP2mRNA及蛋白表达强度高、持续时间长;而毒素诱导型模型具有TIMP1、TIMP2mRNA及蛋白表达强度弱、肝纤维化持续时间短等特点。免疫诱导实验组肝脏中TIMP1、TIMP2相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中最明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达。原位杂交检测结果亦相似。结论毒素诱导型肝纤维化模型自然吸收较快,不利于抗肝纤维化药物疗效的观察;免疫诱导型肝纤维化模型自然吸收时间较慢,且在造模结束后1～3个月有逐渐加重趋势,有利于抗肝纤维化药物疗效观察及肝纤维化机制研究。

正常及实验性肝纤维化大鼠肝脏中的金属蛋白酶组织抑制因子-1

目的:了解金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在正常及实验性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态.方法:用人血白蛋白免疫攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型,以正常大鼠为对照.采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中TIMP-1mRNA和相关抗原表达,同时用PCR技术检测肝脏中TIMP-1基因水平.结果:实验组肝脏中TIMP-1相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞,以汇管区及纤维间隔中最明显,阳性信号位于细胞胞质中,未见细胞核表达.原位杂交检测结果也展示了上述相同的分布和定位.正常大鼠肝组织中可见TIMP-1基因表达,但表达水平极低.实验组肝组织中TIMP-1呈高水平表达.结论:在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP表达的主要细胞.随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重,TIMP-1基因表达水平随之增高.

单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎的临床研究

我们自1993年以来应用国产单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)治疗慢性乙型肝炎,对乙型肝炎病毒血清标志物(HBVM)变化的影响进行了观察,现总结报道如下。 资料与方法 一、病例选择与分组 本文观察的128例慢性乙型肝炎均符合北京1995年第五次全国传染病寄生虫病学术会议制定的病毒性肝炎分型诊断标准。在HBVM中,将HBsAg、抗-HBc-IgM(1:100)或抗-HBc-IgG(1:100)和HBeAg三项中。

胸腺素α1治疗慢性丙型肝炎的临床荟萃分析

目的研究分析胸腺素α1(thymosin alpha-1,Tα1)对慢性丙型肝炎的治疗作用。方法通过MEDLINE、PUBMED、Blackwell等电子数据库搜寻有关胸腺素α1治疗慢性丙型肝炎的相关资料,加以统计学上的比较、分析、观察及评价其对慢性丙型肝炎的临床治疗效果。结果我们对7个样本共计202例研究胸腺素α1治疗慢性丙型肝炎的随机对照实验进行临床荟萃分析,发现胸腺素α1治疗组的疗效(50%)几乎是对照组(12%)的四倍,在统计学上差别显著。结论胸腺素α1单用或联合其它药物治疗慢性丙型肝炎能取得较好的临床治疗效果,与干扰素和利巴韦林治疗相比较,不仅能有效地减少HCV复制,不良反应少,而且诱导了一个持续的递增的血清ALT复常和HCV RNA的清除。

实验性肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-2基因及蛋白表达阻断研究

目的:探讨以TIMP-2为靶基因,应用反义寡核苷酸 (asON)技术抑制其在肝组织中的表达对大鼠肝纤维化发展的影响．方法:22只大鼠分为治疗组(n=6)、模型组(n=6)和正常对照组(n=10)．以人血白蛋白免疫攻击方法制备免疫诱导型肝纤维化大鼠模型．模型制备过程中,治疗组大鼠以尾静脉注射方式给予针对TIMP-2的硫代反义寡核苷酸．RT-PCR、原位杂交、免疫组化、ELISA 等方法检测TIMP-2的转录以及表达水平．用病理学检查以及Ⅰ、Ⅳ型胶原的免疫组化结果分析肝纤维化发展程度．通过胶原纤维特殊染色及电镜等观察asON对大鼠肝纤维化的影响．结果:治疗组病理学分级状况优于模型组(u=2．071, P<0．05)．治疗组血清TIMP-2低于模型组(T=55, P<0．05),高于正常对照组(T=55,P<0．05)．治疗组肝组织TIMP-2 mRNA表达弱于模型组(t=3．332,P<0．05), 高于正常对照组(t=5．550,P<0．05)．Ⅳ型胶原免疫组化图像定量分析结果显示,治疗组与模型组有显著差异(t =2．310,P<0．05),其表达较低,但仍高于正常对照组(t= 3．623,P<0．05)．治疗组Ⅰ型胶原免疫组化图像扫描结果与模型组相比,其数值亦较低(t=2．845,P<0．05)．治疗组肝窦基底膜胶原沉积较轻,与模型组无明显差异．结论:抑制TIMP-2在肝组织中的表达可以减缓大鼠肝纤维化发展．

ELISA法检测血清HBcAg的意义及临床关系的研究

本文报告用ＥＬＩＳＡ法检测６３１份乙肝患者血清中ＨＢｃＡｇ，此法可避免放射免疫法探针的放射污染，不受放射性物质半衰期时间长短的影响，可随时检测临床血清标本。其结果不仅能反映患者体内ＨＢＶ感染状况、ＨＢＶ复制情况、ＡＳＣ病情及有无传染性，还可以评估ＨＢＶ感染后肝脏病变程度、预后及抗病毒药物的治疗效果。

HCV感染人滋养层细胞过程中抗体依赖性增强作用的初步研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)在感染人滋养层细胞的过程中是否存在抗体依赖性感染增强(ADE)作用,探讨HCV母婴传播的分子机制。方法将HCV阳性血清以4种不同方式感染体外培养人滋养层细胞,应用RT-PCR法对标本进行HCVRNA定性检测,并进一步评估不同浓度CD16单抗对感染过程的阻断作用。此外,应用免疫电镜技术观察滋养层细胞感染HCV病毒颗粒情。结果HCVRNA在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本均为阳性表达,且平均拷贝数较高,在FcγRⅢ(CD16)单抗阻断组多个标本内未能检测到HCVRNA的表达,且阳性标本拷贝数较低;CD16单抗对感染的阻断作用随浓度的升高而增强;在全血清组、CD81单抗阻断组及LDL-R单抗阻断组多个标本细胞内可间断测得未脱壳的HCV病毒颗粒,CD16单抗阻断组细胞内未能检出。结论滋养层细胞膜CD81和LDL-R分子不参与HCV感染滋养层细胞的过程,而FcγRⅢ分子则与此过程密切相关。HCV感染人滋养层细胞过程中存在抗体依赖性增强作用。