MDPV和MDGPV母源抗体对MDPV-MDGPV二联活疫苗抗体水平影响的研究

为明确番鸭细小病毒(MDPV)和番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)母源抗体对免疫MDPV-MDGPV二联活疫苗(下称“二联活疫苗”)番鸭抗体水平的影响,本研究将二联活疫苗分别免疫1日龄不同母源抗体水平的雏番鸭,并设非免疫对照组,分别于免疫前和免疫后不同时间点连同非免疫对照组同时采血,采用乳胶凝集抑制试验(LPAI)分别测定各组雏番鸭血清中MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体效价。并按雏番鸭母源抗体高低分组即:MDPV母源抗体阴性组(<1 log2,A组)、MDPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,B组)、MDPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,C组)、MDGPV母源抗体阴性组(<1 log2,D组)、MDGPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,E组)和MDGPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,F组),根据LPAI抗体检测结果分析各免疫组抗体水平变化和非免疫对照组母源抗体消长规律。结果显示:免疫二联活疫苗均可诱导1日龄雏番鸭产生不同水平的LPAI抗体,免疫后7 d(7 dpi)MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体均100%阳性,随后逐渐升高至28 dpi达峰值;其中,7 dpi~28 dpi母源抗体阴性组(A组和D组)的MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体快速升高且明显高于母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组);1 dpi~5 dpi母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组)因母源抗体未衰减,其MDPV LPAI和MDGPV LPAI效价均高于母源抗体阴性组(A组和D组)。非免疫对照组番鸭母源抗体消长分析结果显示不同母源抗体衰减期存在差异,随着日龄增长母源抗体逐渐下降,低母源抗体组(1 log2~3 log2)和高母源抗体组(4 log2~6 log2)分别在8日龄和15日龄时均有80%左右番鸭MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体转为阴性。上述结果表明低母源抗体对1日龄雏番鸭二联活疫苗抗体的产生无明显影响,而高母源抗体对番鸭抗体峰值有一定影响,建议高母源抗体雏番鸭可适当推迟至5日龄免疫。本研究为该二联活疫苗免疫程序的制定提供了科学依据。

新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代(NDRV-S-C30)腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2~8 d和2~10 d,排毒高峰期为4~6 d;病毒血症时间为1~4 d,其中1~2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3~6 d,在脾脏的带毒时间为1~8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增殖能力弱,丧失了对易感靶器官造成病理损伤的能力。明确了NDRV弱毒S株的排毒规律及病毒血症时间,为建立弱毒免疫效力评价方法奠定了基础。

短喙与矮小综合征鹅细小病毒对樱桃谷鸭的致病性研究

为研究短喙与矮小综合征鹅细小病毒（SBDS-GPV）对樱桃谷鸭的致病性，本研究以SBDS-GPV M15分离株人工感染2日龄樱桃谷鸭，测定感染鸭发病情况、体重、喙长宽和抗体水平变化。结果显示：该病毒可经口服和同居感染2日龄樱桃谷鸭，感染鸭症状与自然感染一致，发病率70 %～100 %，死亡率10 %～30 %；耐过鸭的体重和喙长分别为正常鸭的61.1 %～67.6 %和63.1 %～64.8 %；感染后7 d和14 d血清中的抗GPV抗体阳转率分别为60 %～80 %和100 %，直至感染后66 d仍维持在高水平；应用抗GPV单克隆抗体进行间接免疫荧光检测，病死鸭肝脾心等组织检测结果均为阳性。上述结果表明SBDS-GPV M15株可经消化道传播，对樱桃谷鸭具有很强的致病性，以短嘴与矮小综合征为临床特征。本研究可作为相关临床病例的诊断依据。

新型鸭呼肠孤病毒σB和σC蛋白间接ELISA方法的建立

以纯化的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)NP03株重组σB和σC蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测NDRV抗体的间接ELISA方法。优化后的最佳条件为:σB蛋白包被浓度为12.5μg·mL^(-1);σC蛋白包被浓度为6.25μg·mL^(-1);封闭液为15%FBS;血清稀释度为1∶80;酶标二抗稀释度为1∶400;底物37℃显色5min。该方法对MDRV、DHV、MPV和MD-GPV阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。该方法与NDRV全病毒间接ELISA相比较,符合率高达92.5%。本研究进一步丰富了NDRV抗体的检测方法。

短喙矮小综合征灭活苗母源抗体消长及其被动保护研究

为了解实验室试制短喙矮小综合征(SBDS)灭活疫苗免疫种鸭后代的母源抗体消长规律及被动保护效果,本研究收集了160份SBDS灭活疫苗免疫樱桃谷鸭种鸭后代不同日龄的血清,用鹅细小病毒(GPV)胶乳凝集抑制试验(LPAI)跟踪检测抗体效价,并对8日龄不同母源抗体雏鸭进行攻毒,记录发病情况并测定攻毒后第14 d的体重、喙长宽值。结果显示,樱桃谷种鸭免疫SBDS灭活疫苗后能够使其后代携带较高水平的母源抗体,至10日龄为2.4±0.7514(-log2),阳性率100%;21日龄为0.2±0.37(-log2),阳性率15%。拟合出1日龄~14日龄母源抗体消长曲线公式为y=6.409e^(-0.10x),R^2=0.99421,其中y表示抗体水平,x表示日龄。母源抗体被动保护试验结果显示雏鸭母源抗体LPAI效价≥2(-log2)可抵抗SBDSV强毒攻击,获得有效被动保护。表明SBDS灭活疫苗免疫种鸭可保护其后代雏鸭抵抗SBDSV强毒感染,有效被动保护期10 d以上。本研究为鸭SBDS的免疫程序制定和有效防控奠定了基础。

新型鸭呼肠孤病毒病浓缩灭活疫苗的制备及免疫原性分析

为研制高效的新型鸭呼肠孤病毒病(NDRV)灭活疫苗,分别采用病毒尿囊液和浓缩后病毒尿囊液为抗原,经甲醛灭活处理后与常规油佐剂制成灭活疫苗,并进行种鸭免疫后血清学检测、雏鸭免疫保护及安全试验。结果表明,浓缩疫苗安全性好,能明显提高疫苗的免疫效果,高峰期抗体效价的免疫持续期比常规疫苗长;浓缩疫苗免疫雏鸭后的免疫保护性达100%。以上研究表明,NDRV浓缩疫苗安全、高效,在雏鸭上具有良好的免疫保护效果,具有良好的市场前景。

鸭瘟病毒的分离与初步鉴定

采集疑似鸭瘟病毒自然感染的病死番鸭的肝脾等组织,应用番鸭胚成纤维细胞(MDEF)进行病毒分离,通过对分离毒的血凝特性(HA)测定、间接免疫荧光试验(IFA)荧光定量PCR、PCR产物测序和动物回归试验等初步鉴定。结果显示:通过MDEF从疑似病料中分离到4株病毒(DPVfj1、DPVfj2、DPVfj3、DPVfj4),均不能凝集鸽红细胞;IFA结果排除了分离毒为鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭副粘病毒和禽坦布苏病毒;鸭瘟病毒荧光PCR试剂盒检测分离毒核酸均为鸭瘟阳性;鸭瘟病毒(JQ673560)gJ蛋白基因序列特异引物进行PCR扩增均为阳性,且PCR产物序列与鸭瘟病毒参考株gJ蛋白基因序列相似度均大于99%;动物回归试验显示,分离毒人工感染30日龄番鸭和同居感染5日龄雏番鸭均可复制出与自然感染一致的临床表现及病理变化,并能回收到病毒。上述结果表明4株分离毒均为鸭瘟病毒强毒株。

番鸭源鹅细小病毒VP2病毒样颗粒制备及免疫原性测定

为制备杆状病毒表达系统表达的番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)VP2蛋白形成的病毒样颗粒(VLPs),并测定其免疫原性,本研究通过PCR扩增得到MDGPV PT株VP2基因,通过杆状病毒表达系统构建了表达MDGPV VP2的重组杆状病毒MDGPV-rBV。以MOI 5的MDGPV-rBV感染Sf9细胞后,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示,MDGPV-rBV感染的细胞出现亮绿色荧光;western blot检测VP2蛋白,结果显示在约65 ku处出现特异性条带,表明VP2蛋白正确表达。收集MDGPV-rBV感染的Sf9细胞制备细胞超薄切片样品,同时超速离心富集病毒样品,分别经透射电镜观察,可在细胞核观察到与MDGPV病毒粒子二十面体形态一致的VLPs,直径约20 nm,表明表达的VP2能够组装成VLPs。按常规方法制备VLPs油佐剂疫苗,以42μg/只VLPs经胸部肌肉注射免疫130日龄番鸭,免疫后2至7周每周采血并分离血清,利用GPV胶乳凝集抑制试验(LPAI)和微量中和试验检测免疫番鸭的MDGPV抗体效价,结果显示免疫后抗体效价逐渐升高,至第4周达到峰值,随后平缓下降,免疫番鸭的LPAI效价及中和效价峰值分别为4.9±1.10 log2、7±1.15 log2,以上结果表明构建的MDGPV VLPs具有良好免疫原性。本研究为MDGPV VLPs在疫苗和诊断试剂的开发应用奠定了基础。

番鸭呼肠孤病毒感染对禽流感疫苗免疫抗体应答的影响

1日龄番鸭感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)后,应用MTT法测定番鸭血液、脾脏和胸腺的B淋巴细胞增殖功能,应用血凝抑制方法检测禽流感疫苗免疫后抗体变化规律,探讨MDRV对B淋巴细胞功能的影响。结果显示:免疫组番鸭禽流感疫苗二免后H5和H9 AIV-HI抗体效价上升,二免后14 d HI效价最高,随后抗体效价维持在7.5 log2以上。MDRV组番鸭二免后抗体缓慢上升,二免后21 d HI效价最高,随后抗体效价维持在6.0 log2以下,HI效价与对照组差异极显著(P<0.05)。1日龄番鸭人工感染MDRV后,免疫后7 d外周血T淋巴细胞增殖指数与对照组相比明显下降(P<0.05)。免疫后14~28 d与对照组相比显著下降,差异极显著(P<0.01),表明MDRV感染抑制了B淋巴细胞增殖功能。以上结果表明MDRV感染能抑制抗体应答和番鸭外周血和免疫器官中B细胞的增殖功能作用,造成B细胞功能抑制。

伪狂犬病病毒(PRV)不同毒株抗原相关性研究

为了解PRV不同毒株之间的抗原性差异,评价弱毒FB株预防新型PRV的潜力,以4株PRV(FA、FB、Bartha-K61和FJ2012)毒株及其高免血清为材料,应用交叉中和试验测定PRV不同毒株的抗原性差异,通过FB免疫猪攻毒试验评价弱毒FB株对新型PRV的保护潜力。结果表明:中和抗体测定表明兔抗FB株、FA株、Bartha-K61株和FJ2012株高免血清的中和效价分别为1∶54、1∶91、1∶91和1∶215。交叉中和试验显示FB株与FA株、FB株与FJ2012株、FA株与FJ2012株的抗原相关性(R值)均大于0.8,Bartha-K61株与FA株、FB株、FJ2012株的R值均小于0.4,表明FB株与FJ2012株的抗原相关性高于Bartha-K61株与FJ2012株。仔猪免疫攻毒试验显示FB免疫猪能抵抗新型PRV(FJ2012株)的攻毒,保护率100%。提示PRV弱毒FB株有望成为预防新型猪伪狂犬病毒(FJ2012株)的疫苗候选株。

应用PCR-RFLP技术检测短喙矮小综合征鹅细小病毒

为准确诊断鸭短喙矮小综合征(SBDS)以及鉴别鹅细小病毒感染鸭群中新发短喙矮小综合征鹅细小病毒(SBDS-GPV),本研究通过对GenBank登录的水禽细小病毒基因组核苷酸序列的比对分析,根据该病毒5'非编码区基因序列特征设计一对特异性引物,建立了SBDS-GPV聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测方法。特异性试验和敏感性试验显示,水禽细小病毒特异性引物可以扩增得到约200 bp的目的片段,SBDS-GPV PCR产物能够被SspⅠ酶切为140 bp和60 bp两个片段,番鸭细小病毒与德兹西氏病小鹅瘟病毒则不能被酶切,检出SBDS-GPV DNA的最低浓度为2.28×10~7拷贝/μL。利用该方法对14份疑似SBDS临床样品检测,阳性样本采用SPF鸭胚进行病毒分离,结果显示SBDS-GPV PCR-RFLP检测的阳性样本经病毒分离均为SBDS-GPV。上述研究表明,该SBDS-GPV PCR-RFLP检测方法特异性强、敏感性高,为SBDS的防控提供了有效手段。

鸭2型腺病毒感染导致番鸭“肝白化病”的研究

2015年以来,福建省番鸭饲养区的雏番鸭群流行一种以肝脏肿大、颜色变淡呈黄白色、表面有斑驳状或散在点状出血点为特征的疫病,俗称番鸭"白肝病""肝白化病"。经流行病学调查、病原排查和分离病毒人工感染试验,初步表明该病病原为鸭2型腺病毒。

H146-like鹅嵌杯病毒TaqMan-MGB PCR检测方法的建立及应用

为建立检测H146-like鹅嵌杯病毒(GCV)的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank已登录的H146-like GCV基因组(KY399947)的NS基因保守区序列,设计合成一对能够特异性扩增134 bp片段的特异性引物(GCV-QP3/GCV-QP4)和TaqMan-MGB探针(GCV-Probe),经过反应体系和条件优化,建立了检测H146-like GCV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。当质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL^5.07×10^9拷贝/μL时,荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.995。特异性试验结果显示,该方法对水禽常见病毒(如鹅星状病毒、鹅副粘病毒、鹅细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒与鸭坦布苏病毒等)的检测均为阴性,仅对H146-like GCV检测为阳性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法可以检测到的最低质粒标准品为5.07×10^2拷贝/μL,而常规PCR方法检测该质粒标准品最低为5.07×10^4拷贝/μL,敏感性高;批内和批间的变异系数均小于1.6%,重复性良好。对福建省62份疑似临床组织样品进行检测,结果显示TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法阳性检出率为93.5%(58/62),而常规PCR方法的阳性检出率为72.6%(45/62),两种方法的符合率为77.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏性高,重复性好,在H146-like GCV的快速检测中具有良好的应用前景。

番鸭小鹅瘟病毒PT株E盒基序缺失感染性克隆的构建及生物学特性分析

为获得含有E盒基序(E-box)缺失突变体病毒全基因组的番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV) PT株缺失病毒并分析其生物学特性,本研究以含有MDGPV PT株全长感染性DNA克隆的质粒pMDGPVPT为模板,通过重叠延伸PCR方法将5'-末端倒置重复序列(5'-ITR)第315位E-box缺失,获得感染性重组质粒pPT-Ed315-320。pPT-Ed315-320经卵黄囊接种转染9日龄番鸭胚后拯救出缺失病毒rMDGPV-Ed315-320。生物学特性试验显示,rMDGPV-Ed315-320感染番鸭胚后能够引起其特征性病变,与其亲本病毒株PT相比,rMDGPV-Ed315-320的毒价及其在番鸭胚中增殖能力均有所下降,但在番鸭胚成纤维细胞中的复制能力增强。本研究为进一步了解5'-ITR中E-box的缺失与MDGPV致病力之间的关系奠定了基础。

3种鸭源细小病毒的抗原相关性研究

为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了3种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价,分析三者之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;MPV与MD-GPV和SBDS-GPV之间的中和抗体效价R值分别为0.01和0.02,LPAI抗体效价R值分别为0.03和0.04;MD-GPV和SBDSGPV中和抗体和LPAI抗体效价R值均为0.35。表明MPV与GPV(包括MD-GPV和SBDS-GPV)之间的抗原相关性较低;MD-GPV与SBDS-GPV抗原相关性较高,为同一血清型的不同亚型。研究结果为有效防控不同鸭源细小病毒感染提供了理论依据。

番鸭呼肠孤病毒感染对MPV-GPV弱毒疫苗抗体应答的影响

1日龄番鸭感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)后,应用LPAI方法检测MPV-GPV二联弱毒疫苗免疫后抗体变化规律,应用MTT法测定番鸭血液、脾脏和胸腺的B淋巴细胞增殖功能,探讨MDRV对B淋巴细胞功能的影响。结果显示番鸭感染MDRV后免疫MPV-GPV二联疫苗,IM 7 d时番鸭GPV-LPAI效价平均值1.5log2;随后缓慢上升,到IM 21-28 d时GPVLPAI效价平均值维持在约3log2。与单独免疫组相比,GPV-LPAI效价大大降低,不能提供有效保护。1日龄番鸭人工感染MDRV后,PI 7 d外周血T淋巴细胞增殖指数与对照组相比明显下降(P<0.05)。PI 14-28 d与对照组相比下降,差异极显著(P<0.01),表明MDRV感染抑制了B淋巴细胞增殖功能。结果表明,MDRV感染能抑制抗体应答和番鸭外周血和免疫器官中B细胞的增殖功能作用,造成B细胞功能抑制。

小鹅瘟病毒的分离鉴定及遗传变异分析

本试验采用间接免疫荧光(IFA)检测临床表现肠栓塞的疑似小鹅瘟病死雏鹅的肝、脾和胰腺等组织,随后取IFA阳性病料进一步进行病毒的分离和鉴定。结果显示:病死雏鹅组织的冰冻切片IFA检测呈小鹅瘟病毒(GPV)阳性反应;将病料接种番鸭胚分离到3株病毒(命名为GPV NP1、GPV NP2和GPV NP5);分离毒接种MDEF细胞并盲传3代出现细胞病变且GPV IFA为阳性;分离毒与抗GPV单抗致敏胶乳能产生特异性凝集反应,LPA效价达1∶32;全基因序列分析发现,分离毒与鹅源经典GPV强毒株(DY16、RC16)的核苷酸序列同源性高达99.7%以上;与鸭短喙矮小综合征分离株(M15、SC16)及GPV弱毒疫苗株(SYG61v)同源性为92.8%~94.3%。结果表明该分离毒株为鹅细小病毒经典毒株。本试验揭示了我国目前雏鹅群流行GPV基因组特征,为有效防控小鹅瘟病提供了依据。

鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用

番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。

鸭IFN-βmRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

【目的】建立一种检测鸭IFN-βmRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。【方法】根据GenBank中鸭IFN-β(KT428159)核苷酸序列设计并合成特异性引物,将鸭IFN-β基因克隆至pET-30a载体,以此构建的pET-30a-IFN-β阳性重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测,构建标准曲线,并进行引物特异性、灵敏度及重复性试验。【结果】该扩增特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线单峰(Tm=87.94±0.16℃);Ct值在8.9-34.0线性拟合程度高,相关系数R^(2)>99.5%;灵敏度高,最低检测限为2.84 copies·μL^(-1);重复性好,对来自临床的3种组织样品检测的组内变异系数小于0.13%,组间变异系数不超过1%。【结论】该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为鸭IFN-βmRNA表达水平的定量分析提供了技术手段。

鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增,产物回收后克隆至pMD-18-T载体,构建阳性重组质粒作为标准品,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,建立其标准曲线,对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线为单峰,相关系数R2均大于0.998,组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平,结果显示,BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高,分别为5.5×10^(4)、 1.1×10^(5)、 5.1×10^(5)和7.7×10^(5)拷贝·μL^(-1);BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高,分别为7.5×10^(4)和7.6×10^(3)拷贝·μL^(-1);而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高,分别为1.5×10^(5)、2.1×10^(4)、1.8×10^(3)和3.3×10^(3)拷贝·μL^(-1)。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。