参附注射液对糖尿病大鼠心肌缺血／再灌注期间磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的探讨参附注射液（SFI）对糖尿病大鼠心肌缺血／再灌注（I／R）损伤的保护作用及其分子机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病大鼠模型。取制模成功的SD大鼠30只，喂养8周后随机分成假手术（sham）组、I／R组、SFI组，每组10只。sham组大鼠对冠状动脉（冠脉）只穿线不结扎；其余两组大鼠通过结扎心脏左冠脉前降支30min、再灌注120min制备I／R模型。SFI组于开胸前持续泵注SFI 10ml·kg^-1·h^-1，开胸后为3ml·kg^-1·h^-1；其余两组泵注等量晶胶液。光镜下进行心肌组织病理学观察，测定各组心肌梗死面积；原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡，计算细胞凋亡指数；免疫组化染色检测心肌磷脂酰肌醇3激酶（PI-3K）表达。结果SFI组心肌梗死面积较I／R组明显减少[（36.32±2.72）％比（47.26±3.48）％，P〈0.05]。I／R组凋亡细胞显著增多；SFI组凋亡细胞较I／R组显著减少，而多于sham组（P均〈0.05）。与sham组和I／R组比较，SFI组的心肌PI-3K表达明显升高（P均〈0.05）。结论SFI能明显减轻糖尿病时心肌I／R损伤，其机制可能与激活PI-3K／Akt信号通路而发挥心肌保护作用有关。

NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨Nod样受体蛋3炎性体(nod-like receptor protein-3,NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)/白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)信号通路介导的高糖缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HK-2)的损伤。方法采用数字表法将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组(n=5),即低糖组(NG组)、低糖缺氧复氧组(NHR组)、高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖缺氧复氧+NLRP3抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)组(HHR-BAY组)。采用高糖(30mmol/L)刺激72h建立高糖模型,缺氧4h复氧2h建立缺氧复氧模型。CCK-8检测细胞存活率;酶标仪测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量; ELISA法检测IL-1β含量和caspase-1活性;免疫印迹法和免疫荧光法检测细胞NLRP3蛋白的表达。结果与NG组比较,NHR组与HG组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0. 05);分别与HG组和NHR组比较,HHR组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0. 05);而NLRP3抑制剂BAY11-7082预处理可显著抑制细胞损伤和氧化应激水平,下调NLRP3蛋白水平,caspase-1活性和IL-1β含量(P均<0. 05)。结论 NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路参与了高糖缺氧复氧诱导的HK-2细胞损伤过程。

瑞芬太尼持续泵注用于肾移植手术麻醉14例

目的探讨瑞芬太尼持续微量泵输注用于肾移植手术麻醉的可行性。方法肾移植手术24例,按麻醉维持用药不同分为A组14例,B组10例,两组麻醉诱导药物相同。A组持续泵注瑞芬太尼(0.1-0.2μg.kg-1.min-1),持续吸入异氟醚(1%)并根据手术需要调节瑞芬太尼用量,手术结束前15 min停吸入麻醉药、5 min停止瑞芬太尼输入。B组持续吸入异氟醚(1%-3%)。记录两组各时段血流动力学变化、术中生命体征、麻醉恢复情况(睁眼时间、呼吸满意、拔管时间)。结果术中两组生命体征维持稳定,应激指标无明显差异;A组麻醉苏醒时间及拔管时间明显短于B组(P<0.05),且A组苏醒平稳和耐受气管导管情况良好,无呼吸遗忘及呼吸抑制。结论瑞芬太尼持续微量泵输注复合异氟醚用于肾移植手术麻醉安全、有效,是较理想的麻醉方法。

Narcotrend麻醉深度监测在宫腔镜手术中的应用

目的评价Narcotrend麻醉深度监测在宫腔镜手术中的应用效果。方法选择2016年10月至2017年1月武汉大学人民医院生殖医学中心择期接受宫腔镜手术的患者120例,采用随机数表法将其分为对照组(C组)和观察组(NT组),每组60例。两组患者均接受丙泊酚全凭静脉麻醉。NT组患者术中根据Narcotrend值维持在20~56调节麻醉深度,而C组患者根据心率、血压和患者体动调节麻醉深度。分别记录两组患者入室(T0)、术前即刻(T1)、术毕(T2)、出室(T3)时的平均动脉压(MAP)、心率(HR),比较两组患者的手术时间、苏醒时间、丙泊酚用量、术中体动发生率、辅助呼吸发生率和术后1 h内恶心呕吐发生率。结果两组患者的一般情况及各时间点的MAP、HR比较差异均无统计学意义(P>0.05);NT组患者丙泊酚用量比C组[(314.9±7.64)vs(341.7±9.89)]减少,苏醒时间较C组[(8.70±0.41)vs(9.93±0.42)]缩短,术中体动发生率(23.3%vs 40.0%)和辅助呼吸发生率(5.0%vs 16.7%)较C组患者低,差异均有统计学意义(P<0.05);NT组和C组患者恶心呕吐发生率为(3.3%vs 5.0%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Narcotrend麻醉深度监测在宫腔镜手术中的丙泊酚用药有较好的指导意义,其能减少丙泊酚用量,降低术中体动和辅助呼吸发生率,且术后苏醒快。

Narcotrend监测下静注利多卡因在宫腔镜手术麻醉中的应用

目的观察Narcotrend麻醉深度指数(NT)监测下静注利多卡因在宫腔镜手术中的应用效果。方法 80例择期宫腔镜手术患者,随机分为生理盐水组(S组)和利多卡因组(L组)。L组于麻醉诱导前静脉注射利多卡因1.5 mg/kg作为负荷量,随后以2 mg/(kg·h)持续输注至术毕;S组给予等容量的生理盐水。两组患者均采用NT监测麻醉镇静深度,麻醉方式为丙泊酚、瑞芬太尼全凭静脉麻醉。记录两组患者手术时间(T_1),丙泊酚和瑞芬太尼总量,苏醒时间(T_2),术后0.5 h(T_3),4 h(T_4),24 h(T_5)静息时的术后视觉模拟评分(VAS),咽喉疼痛发生率,利多卡因不良反应。结果两组患者的年龄、体质量、T_1、T_2和丙泊酚总量差异均无统计学意义(P>0.05)。L组瑞芬太尼用量明显少于S组(P<0.05)。静息时VAS评分T_3,T_4时L组低于S组(P<0.05),而T_5无明显差异。咽喉疼痛发生率L组明显低于S组(P<0.05)。L组未见利多卡因不良反应。结论 Narcotrend监测下静脉输注利多卡因可以安全有效地应用于宫腔镜手术。

参附注射液对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损期间PTEN表达的影响

目的观察参附注射液(SFI)对心肌缺血/再灌注期间糖尿病大鼠PTEN表达的影响,探讨其对糖尿病心肌缺血/再灌注损伤保护作用分子机制。方法健康雄性SD大鼠,腹腔注射链尿佐菌素60 mg/kg制备糖尿病模型。造模成功的30只大鼠再喂养8周,随机分为三组(n=10):假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I/R组)、SFI防治组(SFI组)。S组只穿线包绕冠状动脉左前降支,I/R组结扎冠状动脉左前降支30 min后松开制备心肌缺血/再灌注模型,SFI组开胸前持续泵注SFI 10 mL·kg-1·h-1,开胸后以3 mL·kg-1·h-1持续输注至手术结束,S组和I/R组开胸前持续泵注晶胶液(晶胶比为3∶1)10 mL·kg-1·h-1,开胸后以3 mL·kg-1·h-1持续输注至手术结束。再灌注120 min时处死大鼠计算左心室心肌梗死面积、检测心肌凋亡百分比和PTEN表达,并观察心肌组织病理变化。结果与S组比较,I/R组、SFI组心肌梗死面积,心肌细胞凋亡百分比均增加,PTEN表达增强(P<0.05或0.01);与I/R组比较,SFI组心肌梗死面积,心肌细胞凋亡百分比和PTEN表达均降低(P<0.05或0.01)。SFI组心肌组织病理损伤程度明显轻于I/R组。结论SFI能减轻糖尿病心肌缺血/再灌注损伤,其机制与其抑制心肌细胞PTEN的表达、减少心肌细胞凋亡有关。

Narcotrend指数指导下无痛人工流产术中喷他佐辛最适剂量的选择

目的探讨在Narcotrend指数监测下无痛人工流产术中丙泊酚复合喷他佐辛静脉麻醉时喷他佐辛的最适剂量。方法选择2016年10月至2018年1月年龄18～40岁ASAⅠ-Ⅱ级自愿实施无痛人工流产术患者160例,随机分成单纯丙泊酚组(B)、丙泊酚复合喷他佐辛0.1 mg/kg组(P1)、丙泊酚复合喷他佐辛0.2 mg/kg组(P2)和丙泊酚复合喷他佐辛0.3 mg/kg组(P3),每组40例。记录麻醉前(T0)、手术开始时(T1)、手术结束时(T2)Narcotrend指数值(NI)、平均动脉压(MAP)、心率(HR),并记录术中丙泊酚、阿托品和多巴胺的用量、手术时间、苏醒时间、术中辅助呼吸例数、体动、术中知晓、术后恶心呕吐、离院时间、离院时眩晕例数,并评估离院时疼痛VAS评分。结果各组患者在T0、T1、T2时NI值、MAP及HR指标组间分别比较均无统计学差异(P> 0.05);P2和P3组患者丙泊酚、阿托品和多巴胺用量及体动和离院疼痛VAS评分与B组和P1相比明显减少(P <0.05);P3组苏醒时间和离院时间较其他三组明显延长,离院时眩晕人数较其他三组增多(P <0.05);各组之间在手术时间、术中辅助呼吸、术中知晓和术后恶心呕吐指标上无明显区别(P> 0.05)。结论以0.2 mg/kg喷他佐辛辅助适当量的丙泊酚是无痛人工流产术中麻醉较适合的搭配方案。

硫氧还蛋白相互作用蛋白在大鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在大鼠急性肾损伤中的作用。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组(S),缺血再灌注组(IR),每组8只。采用夹闭双侧肾蒂25 min,再灌注48 h复制大鼠急性肾损伤模型。取大鼠肾脏HE染色观察病理学结果,血标本测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法检测细胞凋亡指数,Western blot检测TXNIP和炎性体3蛋白(NLRP3)的表达,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1β(IL-1β)。结果与S组比较,IR组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死;与S组比较,IR组BUN,Scr,MDA,TXNIP,NLRP3及IL-1β表达增高(P<0.05),凋亡指数增高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论 TXNIP可能通过激活NLRP3/IL-1β炎症通路参与大鼠急性肾损伤。

高糖环境下TLR7/MyD88/NF-κB在HK-2细胞缺氧复氧损伤中的作用机制

目的探讨高糖环境下TLR7/MyD88/NF-κB信号通路在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧复氧损伤中的作用。方法随机将HK-2细胞分为3组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HH/R组),高糖缺氧复氧+TLR7基因沉默组(HH/R-siRNA组)。采用高糖刺激72 h建立高糖模型,缺氧4 h复氧2 h建立缺氧复氧模型。采用CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,酶标仪测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,ELISA法检测细胞内IL-6和TNF-α水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测肾脏细胞TLR7,MyD88和NF-κB蛋白的表达。结果 TLR7-siRNA转染率为72. 56%。与HG组相比,HH/R组细胞活性下降及SOD活性下降,LDH、MDA、IL-6、TNF-α、细胞凋亡率、TLR7、MyD88及NF-κB蛋白表达增多(均P <0. 05);与HH/R组相比,HH/R-siRNA组细胞活性及SOD活性上升,LDH、MDA、IL-6、TNF-α、细胞凋亡率、TLR7、MyD88及NF-κB蛋白表达减少(均P <0. 05)。结论高糖环境中,TLR7/MyD88/NF-κB信号通路参与了HK-2细胞缺氧复氧损伤。抑制TLR7/MyD88/NF-κB信号通路,可以减轻缺氧复氧引起的细胞毒性损伤,降低氧化应激和炎症反应,减少细胞凋亡从而减轻缺氧复氧损伤。

TXNIP/NLRP3信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的评价硫氧还蛋白相互作用蛋白/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（TXNIP/NLRP3）信号通路在糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。 方法清洁级健康雄性SD大鼠，8～12周龄，体重200～220 g，采用腹腔注射1%链脲佐菌素65 mg/kg的方法建立糖尿病模型。取糖尿病模型制备成功的大鼠24只，采用随机数字表法分为3组（n＝8）：假手术组（S组）、肾缺血再灌注组（I/R组）和TXNIP抑制剂白藜芦醇组（R组）。R组于糖尿病模型制备成功后第3周每天腹腔注射白藜芦醇10 mg/kg，连续7 d。糖尿病模型制备成功后第4周，采用双侧肾蒂夹闭25 min再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤模型。再灌注48 h时处死大鼠取肾组织，观察病理学结果，采用比色法测定MDA含量、SOD活性和组织超氧阴离子清除力，采用ELISA法检测IL-1β和IL-18含量，采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。采用Western blot法测定肾组织TXNIP、NLRP3和caspase-1的表达。左心室取血标本，测定血清BUN和Cr浓度。 结果与S组比较，I/R组和R组血清Cr浓度和细胞凋亡指数升高，肾组织超氧阴离子清除力降低，TXNIP、NLRP3和caspase-1表达上调，I/R组血清BUN浓度、肾组织MDA、IL-1β和IL-18含量升高，SOD活性降低（P〈0.05），肾组织病理学损伤加重；与I/R组比较，R组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织MDA、IL-1β、IL-18含量和细胞凋亡指数降低，SOD活性和组织超氧阴离子清除力升高，TXNIP、NLRP3和caspase-1表达下调（P〈0.05），肾组织病理学损伤减轻。 结论糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤的病理生理机制与TXNIP/NLRP3信号通路激活有关。

右旋美托咪啶预先给药对全麻前上导尿管时不适感的影响

目的:观察右旋美托咪啶负荷剂量预先给药对全麻前导尿病人不适感的影响。方法:选择40例拟行全麻颅脑手术患者(动脉瘤患者除外),随机分为对照组(S组)、右旋美托咪啶组(D组)、利多卡因凝胶组(L组)、咪达唑仑组(M组)4组。进入手术室连接心电监护后,D组患者用微量泵泵注右旋美托咪啶,负荷量0.4μg.kg-1,10 min后开始给患者上导尿管,S组患者泵注生理盐水,L组上导尿管之前,导尿管上均匀涂抹利多卡因凝胶,M组上尿管前10 min静脉给予咪达唑仑0.05 mg.kg-1,记录给药前(T1)、给药10 min后上尿管前(T2)、上尿管后(T3)、上尿管后10 min(T4)患者心率(HR)、平均动脉压(MAP)的变化以及VAS疼痛评分。结果:D、L、M组与S组相比,T1、T2时间点患者HR、MAP及T4时间点HR差异无统计学意义(P>0.05);M组与S组相比,T4时间点MAP差异无统计学意义(P>0.05);D、M组与S组相比,T3时间点HR、MAP差异有统计学意义(P<0.05);D组与M组相比,T3时间点HR、MAP差异有统计学意义(P<0.05);D组与S组相比,T4时间点MAP差异有统计学意义(P<0.05);L组与M组相比,T3时间点HR差异有统计学意义(P<0.05);D组VAS疼痛评分明显低于S、L和M组。结论:麻醉前导尿结合负荷剂量右旋美托咪啶预给药是缓解导尿时患者不适感的有效方法,对循环干扰较小。

白藜芦醇通过TXNIP-NLRP3通路对HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤的作用

目的:探讨白藜芦醇通过硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-炎性体3(NLRP3)通路对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)高糖缺氧复氧损伤的作用。方法:随机将HK-2细胞分为高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)及高糖缺氧复氧+白藜芦醇预处理组(HHR-RES组)3组,每组n=5。采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型,白藜芦醇预处理组在高糖刺激的同时给予白藜芦醇50μmol·L-1处理。CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测细胞存活率和细胞损伤情况,超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)法检测细胞氧化应激水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测TXNIP和NLRP3蛋白的表达。结果:与HG组比较,HHR组LDH水平、MDA含量、细胞凋亡率、TXNIP和NLRP3蛋白表达升高(均P<0.05),而细胞存活率、SOD活性降低(均P<0.05);与HHR组比较,HHR-RES组LDH水平、MDA含量、细胞凋亡率、TXNIP和NLRP3蛋白表达降低(均P<0.05),而细胞存活率、SOD活性升高(均P<0.05)。结论:白藜芦醇通过抑制TXNIP-NLRP3通路减轻HK-2细胞在高糖缺氧复氧下的损伤。

瑞马唑仑-丙泊酚-舒芬太尼用于无痛胃镜检查术患者麻醉的效果

目的评价瑞马唑仑-丙泊酚-舒芬太尼用于无痛胃镜检查术患者麻醉的效果。方法拟行无痛胃镜检查术患者80例,年龄20~59岁,体重44~69 kg,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级。采用随机数字表法分为2组(n=40):瑞马唑仑-丙泊酚-舒芬太尼组(RPS组)和丙泊酚-舒芬太尼组(PS组)。RPS组患者依次静脉注射舒芬太尼0.1μg/kg、瑞马唑仑0.15 mg/kg和丙泊酚(注射速率4 mg/s);PS组患者静脉注射舒芬太尼0.1μg/kg和丙泊酚(注射速率4 mg/s),待患者OAA/S评分为0时行胃镜检查术。记录丙泊酚用量、麻醉时间、胃镜检查时间、苏醒时间和离院时间,观察术中辅助呼吸例数、体动反应及离院时不良反应的发生情况。结果与PS组比较,RPS组患者丙泊酚用量减少,麻醉时间、苏醒时间和离院时间缩短(P<0.05)。2组患者胃镜检查时间、术中辅助呼吸例数、体动反应及离院时不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论瑞马唑仑-丙泊酚-舒芬太尼用于无痛胃镜检查术患者麻醉的效果优于丙泊酚-舒芬太尼。

参附注射液对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时PTEN和PI3K表达的影响

目的探讨参附注射液（SFI）对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时第10染色体同源丢失性磷酸酶．张力蛋白酶基因（PTEN）和磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠，体重220～280g，单次腹腔注射1％链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液60mg／kg制备糖尿病模型，取糖尿病模型制备成功的大鼠30只，随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和SFI组。IR组和SFI组采用结扎冠状动脉左前降支30min，再灌注120min的方法建立心肌缺血再灌注模型，S组只穿线不结扎；SFI组开胸前以10ml·kg^-1·h^-1的速率静脉输注SFI，开胸后以3ml·kg^-1·h^-1的速率静脉输注至术毕，S组和IR组均静脉输注等容量乳酸钠林格氏液和羟乙基淀粉。于再灌注120min时处死大鼠，取左心室心肌组织，计算心肌梗死面积。采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，计算细胞凋亡指数。采用免疫组织化学法测定心肌组织PTEN和PI3K的表达水平，并计算其比值（PTEN／PI3K）。观察心肌组织病理学结果。细胞凋亡指数与PTEN／PI3K行直线相关分析。结果与S组比较，IR组和SFI组心肌梗死面积增加，细胞凋亡指数升高，PTEN和PI3K的表达上凋（P〈0．05或0．01），SFI组PTEN／PI3K降低（P〈0．05）；与IR组比较，SFI组心肌梗死面积减小，细胞凋亡指数降低，PTEN表达下调，PI3K表达上调，VFEN／PI3K降低（P〈0．05）；SFI组心肌损伤程度比IR组减轻。细胞凋亡指数与PTEN／PI3K呈正相关（r=0．452，P〈0．05）。结论SFI减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与下调心肌组织PTEN表达，上调PI3K表达，从而激活PI3K／Akt信号通路有关。

右美托嘧啶对糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 基于Toll样受体7(TLR7)/核因子-κB(NF-κB)信号通路探讨右美托嘧啶(DEX)对糖尿病大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的作用。方法 用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,并随机分为假手术组、模型组和实验组,每组6只。实验组和模型组用双侧肾蒂夹闭25 min再灌注48 h制备肾I/R损伤模型,假手术组不夹闭肾蒂。模型制备前30 min,实验组腹腔注射50μg·kg^(-1)DEX;假手术组和模型组均给予腹腔注射等体积0.9%NaCl。用Western blot法检测TLR7和NF-κB蛋白的表达水平,测定血清尿素氮(BUN)和肌酸酐(Cr)浓度,用酶联免疫吸附实验法检测炎性因子的水平。结果 实验组、模型组和假手术组的肾组织TLR7蛋白相对表达量分别为0.46±0.11,0.71±0.08和0.36±0.09,NF-κB蛋白相对表达量分别为0.56±0.10,0.80±0.06和0.35±0.04,血清BUN分别为(15.69±0.30),(23.83±5.38)和(15.35±2.45)mmol·L^(-1),血清Cr分别为(87.22±6.80),(111.50±26.33)和(48.54±12.03)μmol·L^(-1),TNF-α分别为(80.25±5.32),(117.20±10.83)和(60.13±10.59)pg·mL^(-1),凋亡指数分别为(16.65±2.22)%,(41.63±3.68)%和(9.86±1.83)%。实验组和假手术组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 DEX可以通过抑制TLR7/NF-κB通路,参与对糖尿病大鼠肾I/R损伤的保护。

TXNIP在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用。方法将HK-2细胞随机分为三组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HHR组),高糖缺氧复氧+TXNIP干扰组(HHR-siRNA组)。采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型。CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,活性氧(ROS)检测细胞氧化应激水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和Caspase-1,Western blot法检测TXNIP和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白-3(NLRP3)的表达。结果与HG组相比较,HHR组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3升高,而CCK-8降低,差异有统计学意义(P<0.05);与HHR组相比较,HHR-si RNA组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3降低,而CCK-8升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TXNIP在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中发挥了重要作用,抑制TXNIP可以降低高糖缺氧复氧损伤。

大鼠急性高糖对肾缺血再灌注损伤的影响及右美托咪定预处理的保护作用

目的观察大鼠急性高糖对肾缺血再灌注损伤的影响及右美托咪定（Dex）预处理的保护作用。方法60只成年雄性SD大鼠随机分为6组：假手术组（NG-Sham）、缺血再灌注组（NG—I/R）、右美托咪定预处理组（NG-Dex）、高糖假手术组（HG-Sham）、高糖缺血再灌注组（HG-I／R）、高糖右美托咪定预处理组（HG—Dex）。制备肾缺血再灌注模型，Dex预处理组于缺血前30min腹腔注射Dex50μg／kg。血标本测定各组血糖水平、肾功能、苏木素-伊红（HE）染色观察肾形态学改变、原位缺口末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡、Westernblot检测肾脏B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白（bax）、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）。结果与NG-Sham组比较，NG-I／R组尿素氮[BUN：（7．41±0．16）mmol／L比（20．24±2．94）mmol／L]，肌酐[Cr：（31．25±2．44）μmol／L比（76．50±3．59）μmol／L]、TUNEL（1．88±0．64比35．88±2．70）、bax（0．21±0．03比0．62±0．01）、p-Akt（O．11±0．01比0．31±0．03）表达升高，而bcl-2（0．52±0．03比0．20±0．01）表达降低（P〈0．05）。NG—Dex组BUN[（13．98±1．23）mmol／L比（20．24±2．94）mmol／L]、Cr[（49．13±6．96）μmol／L比（76．50±3．59）μmol／L]、TUNEL（23．38±2．33比35．88±2．70）、bax（O．37±0．02比0．62±0．01）低于NG—I／R组，而p-Akt（0．41±0．03比0．31±0．03）、bcl-2（0．33±0．01比0．20±0．01）高于NG-I／R组（P〈0．05）；HG-I／R组、HG-Dex组的BUN[（24．90±2．31）、（23．54±2．40）mmol／L比（20．24±2．94）、（13．98±1．23）mmo]／L]、Cr[（81．13±3．48）、（79．38±1．69）μmol／L比（76．50±3．59）、（49．13±6．96）μmol／L]、TUNEL（41．63±3．38、39．25±3．20比35．88±2．70、23．38±2．33）、bax（0．70±0．02、0．66±0．04比0．62±0．01、0．37±0．02）、p-Akt（0．43±0．03、0．42±0．04比0．31±0．03、0.41±0．03）均高于正常对应组，而bel-2（0．16±0．03、0．21±0．02比0．20±0．01、0．33±0．01）低于对应组（P〈0．05）。结论Dex对正常肾缺血再灌注损伤具有保护作用，但这种作用在高糖环境中被抑制。可能与通过抑制p-Akt的表达，调控bcl-2与bax的表达，进而增加肾I／R损伤有关。

叔丁基对苯二酚对糖尿病大鼠肾缺血再灌注时DJ-1/Nrf2通路的影响

目的 评价叔丁基对苯二酚( t-BHQ)对糖尿病大鼠肾缺血再灌注时DJ-1∕核因子E2相关因子(Nrf2)通路的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠40只,体重200~220 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、糖尿病组(D组)、糖尿病肾缺血再灌注组(I∕R组)和t-BHQ组(T组).制备糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤模型,T组于术前24 h分3次,每次间隔8 h,腹腔注射t-BHQ 50 mg∕kg,D组和I∕R组给予等容量生理盐水.于再灌注24 h时心尖部采血,测定血清肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys C)和β2微球蛋白(β2-MG)的浓度;随后处死大鼠取肾组织,光镜下观察形态学并行病理学评分;采用Western blot法检测DJ-1、Nrf2、血红素氧合酶1 ( HO-1)的表达.结果 与C组比较,D组、I∕R组和T组血清Cr、Cys C、β2-MG浓度和肾组织病理学评分升高,肾组织DJ-1、Nrf2和HO-1表达上调(P<0. 05);与D组和I∕R组比较,T组血清Cr、Cys C、β2-MG浓度和肾组织病理学评分降低,肾组织DJ-1、Nrf2和HO-1表达上调(P< 0. 05).结论 t-BHQ可通过激活DJ-1∕Nrf2通路减轻糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤.

TLR7在1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨Toll样受体7(TLR7)介导的My D88/NF-κB信号通路在1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为3组(n=6),糖尿病假手术组(DS),糖尿病缺血再灌注组(DIR),糖尿病缺血再灌注+氯喹预处理组(DIR+CQ)。采用腹腔注射链尿佐菌素65 mg/kg建立糖尿病模型,TLR7抑制剂氯喹预处理于糖尿病模型成功后第3周0.5%氯喹40 mg/kg进行腹腔注射,连续给药7天。于第四周采用双侧肾蒂夹闭25 min,再灌注48 h建立肾缺血再灌注损伤模型。取大鼠肾脏HE染色观察大鼠病理学结果,血标本测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测TLR7,My D88和NF-κB蛋白表达。结果:与DS组相比,DIR组肾小管肿胀,间质水肿,刷状缘丢失,空泡变性坏死,Paller评分升高(P<0.01)。与DIR组相比,氯喹预处理可以改善肾损伤(P=0.017);与DS组相比,DIR组BUN,Scr,IL-6,TNF-α,细胞调亡指数(Apoptosis%),TLR7,My D88,NF-κB增高(P<0.05);与DIR组相比,DIR+CQ组BUN,Scr,IL-6,TNF-α,Apoptosis%,TLR7,My D88,NF-κB降低(P<0.05)。结论:TLR7介导的My D88/NF-κB信号通路参与糖尿病肾缺血再灌注损伤,氯喹通过抑制TLR7表达,阻断My D88/NF-κB信号通路,降低炎症反应,从而减轻1型糖尿病大鼠肾缺血再灌注损伤。