成纤维细胞促进真皮替代物血管化的作用机制

目的 探讨成纤维细胞促进真皮替代物移植后血管化的作用机制。 方法 将成纤维细胞种植于无细胞真皮表面培养 ,形成活性真皮替代物 ,采用 EL ISA法测定培养上清中白介素 - 8(IL- 8)和转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )的含量 ,RT- PCR法检测成纤维细胞中酸、碱性成纤维细胞生长因子 (a FGF、b FGF) m RNA的表达量。将含成纤维细胞的真皮替代物植入 BAL B/ C小鼠全层皮肤缺损创面 ,采用原位杂交的方法观察成纤维细胞的转归。 结果 成纤维细胞种植于无细胞真皮表面生长良好 ,可形成单层细胞膜片 ,并分泌 IL - 8(192 .3± 15 .9) pg/ ml和TGF- β1 (1.10 5± 0 .0 5 1) pg/ ml,表达 a FGF、b FGF。植入创面后 3周 ,成纤维细胞仍成活并生长、增殖。 结论 成纤维细胞分泌多种与血管形成有关的活性肽 ,移植后继续生长、增殖 ,可能对真皮替代物的血管化具有重要作用。

含表皮细胞的无细胞真皮复合皮的构建及生长活性研究

为探讨体外构建复合皮的可能性 ,制备来源于猪皮的无细胞真皮基质 ,在其表皮面种植表皮细胞于体外培养 ,定期消化分离无细胞真皮上的表皮细胞 ,采用细胞计数法和增殖试验观察表皮细胞增殖活力 ,并分别于 1周和 2周后通过组织切片HE染色、扫描电镜观察细胞生长状况。结果显示 ,表皮细胞随培养时间延长 ,数量明显增多 ,且仍具有一定的增殖潜力。培养 1周、2周后分别形成单层细胞膜片及含 3～ 6层细胞的复层膜片。提示以异种无细胞真皮为载体 ,可于体外成功构建含表皮细胞层的活性复合皮。

含转表皮细胞生长因子基因人表皮细胞复合皮的构建与移植

目的探讨转染表皮细胞生长因子(EGF)基因的人表皮细胞移植后EGF的表达及对细胞增殖的影响。方法将Balb/c小鼠的表皮细胞和转染EGF基因的人表皮细胞按1∶1、1∶3、1∶5的比例混合,种植于脱细胞真皮替代物表面,于体外培养后形成复合皮,将复合皮移植于Balb/c小鼠全层皮肤缺损创面,抗EGF抗体免疫组织化学染色观察移植后EGF的表达,抗增殖性细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色观察表皮细胞的增殖情况。结果小鼠表皮细胞与转EGF基因的人表皮细胞按1∶5混合构建的复合皮移植后1～2周,抗EGF染色阳性,1周时,新生表皮基底层中PCNA阳性细胞比含单纯小鼠表皮细胞的复合皮移植后显著增多(P<0.01)。结论转染EGF基因的人表皮细胞在移植后早期可表达外源基因产物,并促进表皮细胞增殖。

含活性细胞的新型创面覆盖物的研制及初步应用

目的:制备含活性细胞的高生物学活性的创面覆盖物,并观察其对创面愈合的促进作用。方法:提取鼠尾胶原,与硫酸软膏素按一定比例混合制成胶原膜;采用胶原酶消化培养法,取健康成人(15～35岁)环切包皮分离成纤维细胞培养并传代。将异体成纤维细胞种植于胶原膜表面培养1周,采用ELISA法和RIA法测定培养上清中细胞因子IL-6、IL-8、TGF-β1及细胞外基质层粘连蛋白、透明质酸的分泌;从需手术植皮的烧伤患者(18～45岁,烧伤面积5％～32％TBSA)大腿外侧切取厚约0.4mm的中厚皮片,将成纤维细胞-胶原膜覆盖物用于中厚皮片供皮区,观察愈合时间。结果:成纤维细胞种植于胶原膜表面生长良好,可长入膜内形成具有三维结构的覆盖物。培养1周,上清中测得IL-6为(502.2±21.9)pg/ml、IL-8为(340.5±23.2)pg/ml、TGF-β1为(1.431±0.063)pg/ml,层粘连蛋白为(92.1±13.5)ng/ml,透明质酸为(2 037.4±105.8)ng/ml。将覆盖物用于供皮区,其表皮化时间为(6.2±2.5)d,较单纯胶原膜的(9.8±2.3)d、凡士林纱布的(10.1±1.9)d明显缩短(P<0.01),上皮分化程度高。结论:合成纤维细胞的胶原膜具有较高的生物学活性,可作为一种良好的暂时性创面覆盖物。

混合型皮肤替代物的构建及移植试验

目的构建含自体表皮细胞和异种表皮细胞的混合型皮肤替代物,并用于移植封闭全层皮肤缺损创面。方法以无细胞真皮基质为载体,将Balb/c小鼠的表皮细胞(自体表皮细胞)和人表皮细胞(异种表皮细胞)按1:1比例混合后种植于无细胞真皮基质表面,经体外培养后形成含表皮细胞层的皮肤替代物,然后移植于Balb/c小鼠全层皮肤缺损创面,观察移植效果。结果皮肤替代物移植于小鼠全层皮肤缺损创面后,可封闭创面,新生皮肤基底膜结构较完整,抗层粘连蛋白、Ⅳ型胶原染色阳性。移植后人表皮细胞随时间延长,数量逐渐减少并最终被小鼠自体表皮细胞替代。结论含自体表皮细胞和异种表皮细胞的混合型皮肤替代物可封闭全层皮肤缺损创面,可望节省自体皮源,缩短体外培养时间。

转EGF基因表皮细胞的生物学活性及移植实验

为探讨转表皮细胞生长因子 (EGF)基因的人表皮细胞在体外培养条件下及移植后EGF的表达 ,于体外培养转EGF基因的人表皮细胞 ,采用ELISA法测定不同培养时间及不同传代数时培养上清中EGF的含量。然后将转基因的人表皮细胞种植于无细胞真皮替代物表面 ,于体外培养后形成复合皮 ,移植于裸鼠全层皮肤缺损创面 ,移植后 3周以抗EGF抗体免疫组化染色观察移植后EGF的表达。结果显示 ,转EGF基因表皮细胞传至第 5代仍可分泌EGF ,达pg级水平 ;含转基因表皮细胞的复合皮移植后 1～ 3周 ,抗EGF染色阳性。提示转EGF基因表皮细胞在体内与体外均可稳定地表达外源基因产物 ,可望应用于组织工程皮肤的构建。

一种新型的无细胞真皮替代物的研制及移植试验

目的 研制带密集微孔的异种无细胞真皮替代物 ,提高真皮替代物与自体皮片复合移植的存活率。方法 采用机械的方法在异种无细胞真皮替代物上行密集的贯穿性打孔 ,孔径为 5 0 0～ 80 0 μm ,孔间距为3～ 5mm。将微孔无细胞真皮替代物埋入SD大鼠皮下 ,观察孔径大小的变化和新生血管的形成 ;同时将微孔无细胞真皮替代物与SD大鼠大张刃厚皮片复合移植 ,观察移植存活率及创面愈合情况。结果 在无细胞真皮替代物上打孔后可明显增强对创面基底血浆等渗液的渗透性 ,植入全层皮肤切除创面 ,基底血浆等渗液可通过孔隙渗透到无细胞真皮表皮面。埋入皮下 1周 ,孔隙仍较明显 ,部分孔隙可见有红细胞通过 ;2～ 3周时 ,新合成的胶原逐渐填充孔隙 ,孔腔变小。微孔无细胞真皮替代物与SD大鼠刃厚皮片复合移植的成活率为 89.5 % ,明显高于无孔的无细胞真皮替代物 (6 3.2 % ) ,创面愈合后外观光滑平整 ,具有良好的弹性及柔韧性。结论 带有密集微孔的无细胞真皮替代物可明显提高移植成活率 ,且不影响创面愈合后外观 。

微孔异种无细胞真皮复合移植用于烧伤创面烧伤创面F功能评估(英)

目的:观察微孔异种无细胞真皮(acellularxeno-drmalmatrix,ADM)与自体皮片复合移植的临床效果。方法:将打孔的无细胞真皮与自体的大张刃厚皮、网状皮、邮票皮微粒皮等复合移植,用于深度烧伤创面的修复,观察自体皮片存活率及创面愈合的色素沉着、弹性与柔韧性等,并与单纯自体皮片移植部位进行比较。结果:微孔无细胞真皮与自体刃厚皮、网状皮及邮票皮移植,存活率达100%,而与微粒皮移植存活率较低。与单纯自体皮片移植相比,复合移植后3个月,色素沉着浅,富有弹性与柔韧性,明显改善创面愈合质量。结论:微孔无细胞真皮具有完整的基底膜结构,胶原排列规则有序,可重建高质量真皮层,提高柔韧性、耐磨与耐压性。

异种无细胞真皮活性复合皮的制备

目的体外重建异种无细胞真皮活性复合皮。方法将表皮细胞、成纤维细胞种植于异种无细胞真皮基质表面，体外培养约 1周，定时取材行真皮表面 HE染色、常规组织切片 HE染色及扫描电镜观察。结果表皮细胞、成纤维细胞种植后 24 h即贴附于真皮表面，电镜观察可见有伪足形成。培养 5～ 7 d可融合为致密单层细胞膜。结论以无细胞真皮为支架，采用细胞培养技术可于体外重建复合皮。

表皮细胞和成纤维细胞在异种无细胞真皮上的生长和增殖

及时封密创面是烧伤治疗的关键,但大面积深度烧伤患者常存在自体皮源不足的问题.近年来,组织工程技术的应用为提供充足的皮源带来了希望,如在胶原-GAG(氨基葡聚糖)膜及PGA/PGL(聚羟基乙酸/聚乳酸)网上种植表皮细胞和(或)成纤维细胞,经体外培养后可形成复合皮,并初步用于烧伤创面的修复.本研究观察了表皮细胞和成纤维细胞种植于无细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)上的生长和增殖情况,为进一步移植试验奠定基础.……

PBL与LBL教学法在烧伤外科临床实习中的应用及比较研究

为了提高烧伤外科临床实习教学质量,对2005级79名本科学生分组,分别采用以问题为基础的教学法(PBL)和以授课为基础的教学法(LBL)进行临床实习教学,评价两种教学法的效果。结果表明,采用PBL教学法的学生测验平均成绩和对教学效果评价分数均高于采用LBL教学法(P<0.05),表明PBL教学法的教学效果明显优于LBL教学法,PBL教学法值得在烧伤外科临床实习教学中推广应用。

高压氧单次作用对小鼠脾脏胸腺淋巴细胞免疫粘附功能的影响

目的 观察高压氧 (HBO)对机体免疫功能的影响及可能机制。方法 小鼠 10只暴露于 0 .2 5MPa 99.2 %O2 的高压氧下 2h ,测定脾脏、胸腺淋巴细胞免疫粘附功能、丙二醛 (MDA)含量、血浆β -内啡肽 (β -EP)浓度。同时 ,小鼠各 10只注射SOD、维生素E及纳洛酮后观察上述指标变化。结果 HBO作用下淋巴细胞免疫功能显著下降 ,而MDA含量及血浆 β -EP浓度升高。应用SOD、维生素E可使MDA含量及血浆 β -EP浓度下降 ,抗氧化剂及纳洛酮均可使淋巴细胞粘附功能部分恢复。结论 HBO环境下 ,免疫器官的氧化损伤及血浆 β

真皮替代物

真皮替代物的研制与开发是皮肤组织工程中的关键 ,本文重点综述了各类真皮替代物的研制。

表皮细胞培养与移植进展

自体—异体表皮细胞混合培养及基因转染表皮细胞培养移植为缩短表皮细胞体外培养时间、促进皮肤缺损创面愈合、提高愈合质量提供了新的思路与方法。

高压氧对小鼠脾脏胸腺脂质过氧化作用的观察

材料和方法昆明种小鼠１３０只，雄性，体重１６～１８ｇ，第二军医大学动物室提供。高压氧组小鼠６０只置于加压舱内，压力０．２５ＭＰａ，氧浓度９９．２％，每日１次，每次２小时。１，３，５，１０，１５，２０天组各１０只分别作用１，３，５，１０，１５，２０天，...

人工真皮支架早期修复特重烧伤手足深度创面

目的与传统的切削痂自体中厚皮移植术相比,探讨切削痂人工真皮支架植入术＋自体刃厚皮移植术修复特重烧伤患者手足深度创面的疗效。方法选择2012年3月至2015年3月第二军医大学长海医院烧伤外科收治的有手足深度创面的特重烧伤患者作为研究对象。符合纳入标准的28例患者按手术方法不同分为两组,观察组（14例）在伤后第4~7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖＋手足创面切削痂、人工真皮支架植入术,伤后第21~28天行手足创面自体刃厚皮移植术;对照组（14例）在伤后第4~7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖术,手足深度创面以保痂换药为主,第28~35天行手足深度创面切削痂自体中厚皮移植术。记录每次手术持续时间、植皮成活情况、皮片坏死的原因、供皮区愈合时间、能否再次供皮、随访手足瘢痕增生情况。结果观察组第1次手术持续时间（h）与对照组比较差异无统计学意义[（4.50±0.76）vs（4.14±0.86）,P〉0.05];第2次手术持续时间（h）少于对照组[（2.11±0.35）vs（3.39±0.49）,P〈0.001]。植皮术后第8天打开换药时,观察组皮片全部成活者占97.37%（37/38）,创面出现感染者占2.63%（1/38）;对照组皮片全部成活者占73.68%（28/38）,部分成活者占23.68%（9/38）,创面感染者占2.63%（1/38）。观察组供皮区愈合时间（d）少于对照组[（6.07±0.83）vs（14.64±0.93）,P〈0.001]。经评估观察组可再次供皮者占78.57%（11/14）,对照组可再次供皮者占14.29%（2/14,P〈0.05）。随访1年,根据温哥华瘢痕量表评分（分）观察组手足瘢痕增生情况好于对照组[（5.07±1.21）vs（8.07±1.14）,P〈0.001]。结论应用人工真皮支架能早期修复特重烧伤手足深度创面,不需额外增添手术操作时间,植皮成活情况及远期活动功能可,对供皮区损伤小。

混合表皮细胞与脱细胞真皮基质构建复合皮的移植和转归研究

探讨混合表皮细胞与脱细胞真皮体外构建的复合皮作创面移植后的转归。将BALB/c小鼠的表皮细胞和人表皮细胞按一定比例混合 ,种植于脱细胞真皮基质表面 ,经体外培养后形成复合皮 ,然后移植于BALB/c小鼠全层皮肤缺损创面 ,观察人表皮细胞的转归。结果显示 ,复合皮移植后可封闭创面 ,人表皮细胞多位于新生表皮上层 ,随时间延长 ,数量逐渐减少并最终被小鼠自体表皮细胞替代。提示两种不同的表皮细胞按一定比例混合培养构建复合皮可封闭全层皮肤缺损创面 ,可望节省自体皮源 。

生物活性修复材料—康倍治疗烧伤的疗效观察

目的观察生物活性玻璃和透明质酸钠结合修复材料(康倍)治疗烧伤创面的疗效。方法2006年3月～9月,收治烧伤患者20例,其中男16例,女4例;年龄18～58岁,平均40岁。创面类型:深度烧伤创面7例,度烧伤残余肉芽创面9例,植皮后皮间隙4例。按随机、同体对照原则,试验组与对照组各20个创面,创面范围2.0cm×1.5cm～40.0cm×20.0cm。试验组创面以康倍换药,对照组以空白膏剂换药。分别于用药后1、3、6、11、16及21d观察各创面的肉芽生长和愈合情况,并检查用药前后肝、肾功能及血常规。结果试验组创面用药后11d愈合3例,16d愈合4例,21d愈合4例;对照组创面观察期无完全愈合者。观察期内愈合面积达2/3以上者试验组18例,对照组为1例。按照创面愈合评价标准,试验组显效18例,有效1例,可疑有效1例,总有效率为95%;对照组显效1例,有效9例,可疑有效10例,总有效率为50%,试验组疗效明显优于对照组(P<0.01)。患者治疗前后血常规及肝、肾功能等指标无明显异常改变。结论康倍具有良好促进肉芽生长、加快创面愈合的作用。

软聚硅酮敷料联合藻酸钙敷料用于烧伤后皮肤移植供皮区的疗效观察

目的观察软聚硅酮敷料联合藻酸钙敷料应用于烧伤后皮肤移植供皮区的疗效。方法将80例烧伤患者随机分为试验组(n=39)和对照组(n=41)。试验组供皮区内层覆盖藻酸钙敷料(德湿康敷料),外层覆盖软聚硅酮敷料(美皮康);对照组供皮区内层覆盖洗必泰油纱,外层覆盖多层无菌纱布。评价两组患者供皮区的创面愈合、疼痛改善及瘢痕形成情况。结果术后第7、10、12天试验组创面愈合率[(51.31±7.09)%、(78.77±8.80)%、(96.44±3.24)%]均高于对照组[(45.85±5.54)]%、(73.63±7.73)%、(93.12±4.08)%],差异有统计学意义(P<0.01)。试验组创面愈合时间短于对照组[(10.95±1.41)d vs(11.93±1.44)d,P<0.01]。术后第1、3、7、10天试验组视觉模拟评分(VAS)为5.36±1.21、4.29±1.25、4.00±0.46、1.00±0.45,均低于对照组(7.34±1.34、5.89±1.39、4.50±0.74、1.35±0.52),差异有统计学意义(P<0.01)。创面愈合后第1、3、6、12个月试验组温哥华瘢痕评价(VSS)评分(3.82±1.47、6.00±1.61、3.77±2.28、2.59±1.39)均低于对照组(5.80±1.68、7.80±1.65、5.24±1.67、4.05±1.41),差异有统计学意义(P<0.01)。结论软聚硅酮敷料与藻酸钙敷料联合应用可以显著提高供皮区创面愈合率、缩短创面愈合时间、缓解换药疼痛、改善愈合质量,有望成为有效的保护供皮区的临床治疗手段之一。

几丁质-胶原蛋白膜的制作及皮下埋植实验

目的 探讨几丁质 -胶原蛋白膜作为真皮支架的可行性。方法 以酸溶法制备胶原溶液 ,添加一定比例的脱乙酰化几丁质 ,冻干成膜 ,0 .0 5 %戊二醛溶液浸泡交联 ,行体外酶降解实验 ,检测其耐受酶降解能力 ;将制备的几丁质 -胶原蛋白膜包埋于 36只 SD大鼠皮下 ,术后 3、5天 ,1、2、3、4、6、8和 12周取材 ,检测其组织相容性、血管化能力及材料在体内降解情况。结果 制备的几丁质 -胶原蛋白膜 ,呈微黄、半透明状 ,纤维排列呈网状 ,一侧较光滑 ,孔小 ,另一侧孔稍大 ,孔径大小保持在 5 0～ 2 5 0μm之间 ,其体外降解缓慢。皮下埋植实验术后 5天～ 2周显示材料具有良好的组织相容性 ,无明显炎性反应 ,血管化早 ,体内降解缓慢 ;8周后经改建可形成纤维排列较规则的类真皮样结构。结论 几丁质 -胶原蛋白膜具有较好的物理及生物学性能 ,组织相容性好 ,血管化能力强 ,体内、外降解缓慢 ,具有良好的真皮替代功能。