办公自动化环境下医院档案管理的意义及策略探讨

档案管理工作是医院正常运营的基础保障,是切实提高医院医疗服务水平、满足人们医疗服务需求的前提。因此,医院应该提高对档案管理工作的认识与重视程度,加强档案管理并推动我国各大医院的档案管理工作朝着信息化、智能化、智慧化方向升级转型,进而发挥医院档案的最大价值,为医院的可持续发展提供保障。基于此,文章以办公自动化环境为研究背景,对医院档案管理的意义及具体策略进行探讨,以期为医院现代化转型提供理论帮助。

医院数字档案室建设现状及优化路径探讨

随着社会经济水平的提升,医院运行进程逐渐加快,档案管理工作是医院管理中十分重要的一项环节,在医院运行期间占据着十分重要的位置。信息化时代来临,医院需要正确了解数字档案室建设的必然性和重要性,加大医院档案管理力度,进一步强化医院档案工作质量,提升档案信息资源的利用率,将整体价值发挥到最高,为医院后期建设发展提供优质且良好的服务,从根本上满足新时代发展需求,顺应发展形势。本文主要分析和探讨了医院建设数字档案室的基本现状,结合实际情况提出了优化路径。

小鼠IL-1β在H22细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的:重组表达小鼠IL-1β全长基因,转染H22肝癌细胞,分析对NK细胞杀伤活性的影响。方法:构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β,利用jetPEI转染H22肝癌细胞,RT-PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达,MTT方法分析转染前后,野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化。结果:RT-PCR扩增出小鼠IL-1β,长度约843bp。纯化的PCR产物与pIRES2-EG-FP同时经XhoI和EcoRI双酶切,在T4连接酶作用下连接,转化大肠杆菌,提取质粒经PCR、限制性酶谱分析(XhoI+EcoRI)和DNA序列测定后,确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β。将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中,RT-PCR和荧光观察证实,H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体,与转染空载体的对照组细胞相比,IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强,同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降,效靶比40:1时下降了约10%。结论:IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制。

小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达

目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平。方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平。结果:经SOE法拼接获得的融合基因与GenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepa1-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化。结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β。

分泌型人IL-1β表达载体的构建及在H7402细胞中的表达

目的构建经典途径分泌型人白细胞介素1β(shIL-1β)重组表达载体,检测其在H7402肝癌细胞中的表达。方法采用SOE方法将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和编码人白细胞介素(hIL-1β)成熟蛋白的基因序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建shIL-1β真核表达载体pIRES2-EGFP-shIL-1β,利用jetPEI方法将其稳定转染H7402细胞(H7402/shIL-1β),荧光显微镜及RT-PCR检测融合基因的表达水平,间接ELISA方法测定培养上清hIL-1β分泌水平。结果荧光显微镜下观察可见H7402/shIL-1β细胞发出明亮绿色荧光,RT-PCR检测显示pIRES2-EGFP-shIL-1β能够在H7402细胞中稳定表达融合基因mRNA,同时细胞培养上清中hIL-1β表达水平明显上升。结论成功构建了经典途径分泌的hIL-1β重组表达载体,该载体可在H7402细胞中稳定分泌生物活性的hIL-1β。

聚丙烯酸酯包裹炭黑水性涂料防腐蚀性能的研究

利用乳液聚合制得一种聚丙烯酸酯包裹了炭黑的水性涂料。通过正交实验表明:当m_(APS):m_(SDS):m_(MMA):m_(BA)=1:20:100:100,炭黑的质量占MMA单体的0.2%时,该水性涂料作为A3碳钢的涂层在3.5%(质量分数)NaCl溶液的腐蚀环境中,腐蚀电流为0.79μA,较纯聚丙烯酸酯涂层的1.58μA低;电化学阻抗谱(EIS)也表明:以聚丙烯酸酯包裹炭黑乳液作涂层防腐蚀效果较纯聚丙烯酸酯好,其阻抗值有很大提高;扫描电镜显示大部分炭黑粒子均匀分散在聚丙烯酸酯胶团中。

肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制

目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1β反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1β1组、H22/antiIL-1β2三组,RT-PCR检测IL-1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1β反义RNA的表达载体pafpIRES2-anti-IL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,转染H22细胞后细胞中IL-1β表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比,H22/antiIL-1β2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P<0.05)。H22/anti-IL-1β1、H22/antiIL-1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建的肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL-1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关。

人caspase-1基因在肝癌细胞中的表达及对IL-1β水平的影响

目的:将人caspase-1基因真核表达载体转染肝癌细胞后观察其表达水平及对IL-1β水平的影响,为研究cas-pase-1与IL-1β的关系及其在慢性炎症与肿瘤中的作用提供依据。方法:利用阳离子聚合物(jetPEI)将pIRES2-EGFP-caspase-1重组表达载体和pIRES2-EGFP对照载体转染人肝癌细胞HepG2(HepG2/caspase-1、HepG2/mock),48小时后倒置相差荧光显微镜下观察表达情况,利用RT-PCR、Western blot方法检测两组细胞caspase-1表达水平,采用caspase-1底物显色分析研究的方法检测两组细胞中caspase-1的活性。夹心ELISA法检测细胞培养上清以及细胞裂解液中IL-1β的表达水平。结果:转染48小时后倒置相差显微镜下可见,pIRES2-EGFP-caspase-1和pIRES2-EGFP重组表达载体均能在HepG2细胞中高效表达;HepG2/caspase-1细胞中caspase-1 mRNA表达水平显著提高;经LPS刺激后,HepG2/caspase-1细胞中caspase-1总蛋白的水平明显升高;caspase-1的生物活性水平与对照组相比具有显著性差异(t=25.679,P<0.05);HepG2/caspase-1细胞培养上清中IL-1β的水平明显高于HepG2/mock组细胞(t=3.417,P<0.05),胞浆裂解液中的变化相对不显著(t=2.396,P>0.05)。结论:人caspase-1基因真核表达载体pIRES2-EGFP-caspase-1能够在肝癌细胞中高效表达caspase-1,且该重组表达载体在HepG2细胞中能提高活性IL-1β的表达。

人IL-1β重组表达载体在肝癌细胞的表达及对其NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:构建全长人IL-1β真核表达载体,转染H7402肝癌细胞,分析对其NK细胞杀伤敏感性的影响。方法:RT-PCR法扩增人IL-1β基因全长编码序列,经T-A克隆,构建pIRES2-EGFP-IL-1β重组表达载体,采用阳离子聚合物jetPEI的方法转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,RT-PCR分析IL-1β的表达水平,MTT方法分析转染前后NK细胞对肝癌细胞杀伤活性的变化。结果:从LPS处理的人外周PBMCs总RNA中扩增出IL-1β(大小约829 bp),先构建pMD18-IL-1β克隆载体,DNA序列鉴定正确后,利用Pfu DNA聚合酶将IL-1β基因亚克隆到pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IL-1β,经PCR、限制性酶谱分析(BamHⅠ和EcoRⅠ)和DNA序列测定正确后,将其转染H7402肝癌细胞,G418筛选获得稳定表达IL-1β的细胞,与转染空载体的细胞相比,该细胞对NK-92细胞杀伤的敏感性显著降低,效靶比10∶1时下降了约30%。结论:促炎性细胞因子IL-1β能够显著增强肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是导致肝癌细胞发生天然免疫逃逸的重要机制。

IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响

目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepa1-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响。方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL-1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体。利用transIT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用。结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepa1-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对干扰素的抵抗性明显增强。结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepa1-6细胞的增殖抑制作用。

带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达

目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。

慢性乙型肝炎患者氧化损伤指标的检测及临床意义

目的:探讨血清中氧化损伤指标与慢性乙型肝炎的关系。方法:采用化学比色法检测42例慢性乙型肝炎患者(A组)、30例非活动性乙肝表面抗原(HBsAg)携带者(B组)及22例健康对照者(C组)血清中氧化损伤指标:丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAR),常规测定血清中谷丙转氨酶(ALT)浓度、乙肝病毒载量(HBV-DNA),并进行统计分析。结果:A组与其他两组相比,MDA及氧化损伤指数(OxidativeStress Index,OSI)均明显升高(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01),TAR差异无统计学意义(P>0.05,P>0.05);B组与C组中,MDA及OSI差异无统计学意义(P>0.05,P>0.05);A组中MDA浓度及OSI与ALT水平呈正相关(r=0.61,r=0.45);HBV-DNA水平与氧化损伤指标间无明显相关。结论:慢性乙型肝炎患者体内存在氧化-抗氧化平衡紊乱,氧化损伤指标是判断病情的良好指标。

三氧化二砷在低氧下对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响

目的:探讨低氧条件下三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响.方法:用氯化钴(CoCl2)创造低氧条件,取1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L的As2O3分别在常氧和低氧条件下作用于HepG2细胞12、24和48h后,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡.设常氧对照组、低氧对照组、低氧下不同浓度As2O3(4.0、8.0μmol/L)组,用免疫细胞化学法观察不同浓度As2O3作用于HepG2细胞48h后HIF-1α蛋白表达的变化.结果:MTT法和Hoechst染色法分别显示,在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间剂量依赖性地抑制和诱导HepG2细胞增殖和凋亡(均P<0.01),8.0μmol/LAs2O3作用HepG2细胞48h后其抑制率和凋亡率分别为38.40%,37.83%和45.25%,49.28%.在常氧和低氧两种条件下,HepG2细胞生长抑制率及凋亡率的差异均无统计学意义.免疫细胞化学法显示,常氧条件下HIF-1α蛋白呈弱阳性表达,低氧诱导48h后HIF-1α蛋白表达显著升高(t=114.37,P<0.05),低氧条件下HIF-1α蛋白表达随As2O3浓度的增加而逐渐降低(F=347.042,P<0.01).结论:低氧条件下,As2O3能抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与As2O3下调HIF-1α的表达有关.

BALB/c小鼠原位移植肝癌模型的建立及鉴定

目的：利用小鼠肝癌细胞株H22细胞肝脏原位种植法建立BALB／c小鼠原位移植肝癌模型，为研究肝脏肿瘤奠定基础。方法取新鲜小鼠腹腔传代的H22细胞，生理盐水洗涤2次，调细胞浓度为1×10^7／ml，与Matrigel按4∶1比例混合，用10μl微量进样针在开腹直视下沿肝叶长轴种植于BALB／c小鼠的肝左叶，每只5μl，逐层关腹，常规饲养2周后，处死小鼠观察肿瘤形成情况，检测小鼠肝脏原位癌的形成率及小鼠存活率，形态学和病理学方法鉴定造模效果。结果肉眼可见小鼠肝脏出现单个灰白肿瘤结节，病理学方法证实为肝癌，小鼠存活率和成瘤率均为95％，肿瘤大小均匀。结论成功建立了一种稳定、简单可行的BALB／c小鼠原位移植肝癌模型。

(SiC)C_f/Si_3N_4复合陶瓷的制备及性能

采用CVD法制备了SiC涂层包覆短碳纤维,并通过凝胶注模成型工艺制备了(SiC)C_f/Si_3N_4复合陶瓷,探讨了烧结温度对复合陶瓷中(SiC)C_f形貌的影响。同时研究了(SiC)C_f的含量对复合陶瓷力学以及介电性能的影响,当(SiC)C_f含量达到10wt%时,样品的抗弯强度比纯Si_3N_4陶瓷降低了112 MPa,但断裂韧性显著提高,增加了11.5 MPa·m^(1/2),介电常数实部和虚部达到最大,介电实部约为15~18,虚部约为6~8;反射衰减随(SiC)C_f的含量和厚度的增加而向低频移动。

pLIVE-IL-1β表达载体的构建及在Hepa1-6细胞的表达

目的构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-PA1-6细胞中的表达水平。方法分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定。利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平。结果从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到一822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经XhoⅠ和NheⅠ双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒XhoⅠ+NheⅠ限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致。将该载体转染Hepa1-6细胞,RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β。

IL-1β反义RNA在HepG2细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

目的:构建IL-1β反义RNA真核表达载体,转染HepG2细胞,探讨阻断IL-1β作用后对其NK细胞杀伤敏感性的作用。方法:RT-PCR方法扩增两段基因序列IL-1β1(17-331,315bp)和IL-1β2(246-505,260bp),经T-A克隆后构建反义RNA表达载体pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-anti-IL1β2。采用阳离子聚合物(jetPEI)的方法转染HepG2肝癌细胞,RT-PCR方法检测反义RNA的表达水平,胞内因子染色的方法分析IL-1的表达水平,MTT方法分析NK-92细胞对HepG2杀伤活性的变化。结果:以LPS刺激的人PBMC总RNA为模板,RT-PCR扩增得到两个约315bp和260bp的基因片段,先构建克隆载体pMD18T-IL-1β1和pMD18T-IL-1β2,质粒PCR、XhoI酶切和DNA序列分析正确后,利用PfuDNA聚合酶进行PCR,产物纯化后经EcoRI、XhoI双酶切,反向插入pcDNA3.0,获得人IL-1β反义RNA真核表达载体pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2。PCR、PstI酶切和DNA序列分析正确后,将其分别转染HepG2细胞,RT-PCR检测显示HepG2细胞能够高水平表达两种反义RNA,胞内因子染色发现IL-1β的表达水平明显下降,同时该细胞对NK-92杀伤的敏感性明显升高,其中IL-1β1反义RNA的作用更为显著,效靶比10∶1时,NK细胞对HepG2的杀伤活性提高了约20%。结论:以促炎性细胞因子IL-1β为靶点进行干预,能够有效地下调肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗能力。

IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响

目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-1β1和IL-1β2,将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,构建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体,利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞,荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达,RT-PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT-PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段,与IL-1β1和IL-1β2相符,将其反向与PafpIRES2-EGFP连接,经菌落PCR和DNA序列分析证实,获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后,荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光,而YAC-1细胞则未见荧光。RT-PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降,尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。

人caspase-1真核表达载体的构建及表达

目的构建人caspase-1真核表达载体,观察其在人肝癌细胞HepG2中的表达。方法分离人外周血淋巴细胞,LPS刺激提取细胞总RNA,RT-PCR方法分别扩增caspase-1两片段S_1、S_2,利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得caspase-1全长序列,将其克隆入pIRES_2-EGFP载体,进行茵落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染HepG2肝癌细胞,倒置相差荧光显微镜下观察其表达情况,RT-PCR分析caspase-1的表达水平。结果从外周淋巴细胞中经RT-PCR分别扩增出365bp和883bp片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一1234bp的条带,与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES_2-EGFP经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后连接,茵落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ限制性酶谱分析酶解出1234bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank中人caspase-1序列完全一致。将该载体转染至HepG2细胞中,经RT-PCR证实,与转染pIRES_2-EGFP空载体的对照组细胞相比,caspase-1水平明显升高。结论本研究成功构建人caspase-1表达载体pIRES_2-EGFP-caspase-1,该载体能够在人肝癌细胞中高效表达外源基因。

ZZ亲和肽在大肠杆菌中的表达及IgG抗体亲和活性测定

目的:ZZ亲和肽是源于葡萄球菌蛋白A的人工合成序列,能结合IgG抗体Fc段,在免疫学领域具有广泛的应用价值。本研究利用大肠杆菌表达C端带有6×His标签的ZZ亲和肽,并测定其生物学活性。方法:以pEZZ18为模板PCR扩增ZZ亲和肽基因,克隆至pUC18载体的EcoRⅠ/HindⅢ位点构建pUC-ZZ表达载体。利用大肠杆菌表达C端带有6×His的ZZ亲和肽,表达产物经Ni亲和层析纯化,利用竞争ELISA测定其与IgG抗体的亲和活性。结果:成功构建pUC-ZZ表达载体,SDS-PAGE显示ZZ亲和肽的Mr为16×103,与兔IgG抗体相对亲和常数为Ka≌1.45×108L/mol。结论:ZZ亲和肽基因成功在大肠杆菌中表达,具有与IgG抗体结合活性,为ZZ亲和肽的进一步开发利用奠定了基础。