泰国斗鱼酪氨酸羟化酶基因cDNA的克隆及表达分析

泰国斗鱼(Betta splendens)雄性天生好斗,适合作为鱼类好斗性研究的模型生物.首先通过RT-PCR从泰国斗鱼的全脑中克隆并鉴定出酪氨酸羟化酶基因(tyrosine hydroxylase gene,th)的部分cDNA片段,并进行序列分析;然后通过镜像斗争法和配对斗争法观察泰国斗鱼的打斗行为,最后用实时定量PCR检测比较其在斗争前、后及优、劣势个体间th的mRNA表达差异.克隆获得了261 bp泰国斗鱼th部分核苷酸序列,编码86个氨基酸;氨基酸同源性显示,泰国斗鱼th与同为鲈形目、攀鲈亚目龟壳攀鲈(Anabas testudineus)的同源性最高为98.82%,遗传距离最小,为0.14168;而与爬行纲、有鳞目的鬓狮蜥(Pogona vitticeps)遗传距离最大,为0.37119;与泰国斗鱼th的亲缘关系由近至远分别为鱼纲、哺乳纲、鸟纲和爬行纲.行为学观察显示,镜子放入烧杯后,斗鱼立即表现出张鳃、咬镜、撞镜等好斗性行为;配对斗争更为剧烈,两鱼相互撕咬、撞击、追逐,直止分出胜负.实时定量PCR检测结果显示,th在优势个体中的表达水平显著高于劣势个体;经配对斗争或镜像斗争后的个体其th的mRNA表达水平均高于斗争前个体,由此推测泰国斗鱼th可能与其好斗性正相关.