肿瘤干细胞中的Hippo信号通路研究进展

如何抑制肿瘤细胞的增殖和干性基因的表达已经成为近年来科学家在癌症治疗领域关注的重点之一。肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是肿瘤中一类具有自我更新能力的细胞类群,被认为是肿瘤发生过程中的驱动因素之一。Hippo信号通路在生物进化过程中高度保守,且对细胞增殖、组织发育和器官大小具有重要作用。简述了Hippo信号通路及其在肿瘤干细胞中的作用机制,并对肿瘤的治疗提出了展望,以期为肿瘤干细胞的发展和未来治疗提供参考。

肝细胞癌中的铁死亡与氧化应激

肝细胞癌(Hepatic Cellular Carcinoma, HCC)是全球发病率较高的癌症之一且其死亡率在全球每年持续增加约2%~3%。氧化应激(Oxidative Stress, OS)是指当生物体细胞在遭遇外界刺激时,机体细胞内部产生大量超氧化物,如单线态氧(1O2)、过氧化氢(H2O2),超氧阴离子(O2-)等,这些物质致机体细胞内氧化与抗氧化作用失衡,最终导致细胞和组织的损伤。氧化应激被认为是恶性肿瘤的起因之一。铁死亡(Ferroptosis)是近年发现的一种铁依赖性的新型细胞程序性死亡方式。本文主要阐述了肝细胞癌中氧化应激对铁死亡的影响的相关研究进展。

烯壳铁氮磁珠介导SurvivinASO对肿瘤细胞的转染和抑制作用

基于石墨烯的生物相容性和对单链核酸的吸附性,研究烯壳铁氮磁珠(graphene-shelled ferro-nitride magnetic beads,GFeNMB)运载靶向Survivin的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)及其对肿瘤细胞的抑制作用。首先用RNA Draw针对Survivin mRNA的二级结构设计ASO,合成FAM标记和未标记的ASO;基于石墨烯对单链核酸的吸附性和对荧光团的淬灭性,采用酶标仪检测荧光强度方法检测GFeNMB对ASO的吸附能力,并对GFeNMB和GFeNMB-ASO表征;磁极作用下将Survivin ASO磁转染至人非小细胞肺癌细胞A549中,荧光显微镜观察GFeNMB将ASO载入细胞的能力;ASO转染后,采用Western blot检测Survivinr的表达,活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒、流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力。结果表明,GFeNMB对ASO具有良好的吸附性,GFeNMB与ASO混合20 min达最大吸附量(0.44µg·mg^(-1));FAM-ASO经磁性载入细胞内呈绿色荧光且集中于细胞核,GFeNMB介导的核转染能力显著优于脂质体;ASO经磁转染至细胞后,Survivin蛋白的降低水平优于未处理组和脂质体转染组;磁转染Survivin ASO后,肿瘤细胞凋亡比例增大,细胞内ROS升高,细胞增殖和迁移能力受到抑制。综上,GFeNMB可将Survivin ASO转染至肿瘤细胞中,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。GFeNMB-ASO磁转染细胞后下调靶基因表达的情况表明,GFeNMB有望成为单链寡核苷酸的转染介质。

大鼠前列腺间质增生模型的建立

为建立前列腺间质增生的动物模型,将大鼠随机分为假手术组、去势组、去势+雄激素组、去势+雌激素组、去势+不同比例的雌/雄激素组(1∶50,1∶100,1∶200,1∶300),考察各实验组的前列腺指数、组织切片的形态学和平滑肌特异蛋白免疫组化染色的变化.结果表明与正常组比较,凡施用雌/雄激素组的前列腺指数均明显增高,以1∶100和1∶200组尤为明显.去势+不同比例雌/雄激素组较正常组的前列腺组织增生明显,而且间质中平滑肌细胞成分在雌/雄激素比例为1:100组明显增加.因此,用雌/雄激素协同作用诱导大鼠前列腺间质增生的最佳比例为1∶100.

前列腺间质细胞中雌二醇对MMP-2,MMP-9及其组织抑制因子表达的影响

目的:研究雌二醇(E2)对前列腺间质细胞中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及其组织抑制因子1(TIMP-1)、TIMP-2和雌激素受体α、β(ERα、ERβ)的影响。方法:实时定量PCR法检测E2在前列腺间质细胞中对MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA水平的影响;半定量RT-PCR法检测E2对ERα、ERβ mRNA水平的影响。酶谱电泳法检测MMP-2、MMP-9的活性。Western blotting检测E2在前列腺间质细胞中对ERα蛋白水平的影响。结果:前列腺间质细胞中有MMP-2和ERα mRNA的表达,未检测到MMP-9 mRNA;培养液中检测到MMP-2前体(pro-MMP-2),未检测到其活性形式,也未检测到MMP-9前体及其活性形式。用E2处理间质细胞后MMP-2 mRNA水平降低,pro-MMP-2蛋白量减少,雌激素受体抑制剂ICI182.780可抑制此作用。E2对TIMP-1,2 mRNA表达无显著影响。E2能够增加前列腺间质细胞中ERα mRNA及其蛋白表达的水平。结论:E2能够通过ERα下调前列腺间质细胞中MMP-2的表达。

病毒学实验技术的教学探索与实践

病毒学实验技术课程主要面向生物化学与分子生物学专业领域的硕士研究生。文章在教学理论的指导下,从教学目标的确定、实验教学的内容设置和教学方式的设计等,探讨了如何进行教学设计,以实现培养学生的综合科研能力。

白藜芦醇甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-6和IL-1及细胞内钙浓度的影响

目的:研究白藜芦醇甙(polydatin,pol)对大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)分泌TNF-α、IL-6和 IL-1的作用及其与[Ca^(2+)]_i 的关系,以了解 pol 的抗炎作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylterazolium bromide,MTT]比色法检测 IL-1、TNF-α和 IL-6,采用荧光指示剂和荧光分光光度计检测 PM 的[Ca^(2+)]_i。结果:(1)pol 增加正常大鼠 PM 分泌 TNF-α和 IL-6,对 IL-1的分泌无明显作用。pol 可降低经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠 PM 分泌 TNF-α、IL-6和 IL-1。(2)pol 降低正常的和经 LPS 刺激后的大鼠 PM 静息[Ca^(2+)]_i 和外加 CaCl_2后[Ca^(2+)]_i 的升高。结论:pol 对PM 分泌细胞因子有双向调节作用。pol 可以抑制细胞内贮存钙释放和细胞外钙的进入。Pol 的抗炎机制可能与其抑制上述炎症介质有关,并可能通过对炎细胞[Ca^(2+)]_i 的调节发挥作用。

保肺祛敏冲剂对小鼠迟发型变态反应及免疫器官重量的影响

保肺祛敏冲剂由川贝、桑白皮、黄芩等中药组成，临床上广泛应用于治疗慢性支气管炎、支气管哮喘及过敏性疾病，疗效显著。哮喘为气道高反应性炎症疾病，发病病因与机体免疫失调相关。本文旨在分析冲剂抗喘机理与对迟发型变态反应及免疫器官重量的影响，阐明中药治疗肺热喘...

雌二醇通过调节上皮细胞系的旁分泌促进前列腺间质细胞增殖和分化

目的:研究雌二醇通过调节上皮细胞的旁分泌对前列腺间质细胞增殖、分化和胞外基质蓄积的作用。方法:雌二醇处理前列腺增生上皮细胞系BPH-1,用收集的条件培养液(CM)培养人前列腺间质细胞,MTT法检测细胞的增殖;用实时定量RT-PCR检测细胞中smoothelin、纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达水平;用Western blotting检测细胞平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)的表达;用放射性免疫法和ELISA分别检测Ⅳ型胶原、纤维黏连蛋白和TGF-β1的蛋白水平。结果:雌二醇能够上调BPH-1细胞中TGF-β1的表达和分泌;经雌二醇刺激的BPH-1CM能促进间质细胞的增殖;雌二醇刺激的BPH-1CM对平滑肌细胞特异蛋白(smoothelin和SM-MHC)表达的促进作用较未经雌二醇刺激者更加明显;TGF-β1中和抗体可以抑制BPH-1CM对间质细胞中Ⅳ型胶原和SM-MHC的促表达作用。结论:BPH-1可通过分泌TGF-β1促进间质细胞的分化和胞外基质的蓄积;雌二醇可通过上调BPH-1TGF-β1的分泌进一步促进间质细胞的分化;雌二醇还可通过调节BPH-1分泌的某种活性因子促进间质细胞的增殖。

《食品毒理学》课程的教学改革探索

探讨了食品毒理学教学中存在的主要问题,并从教学内容、教学手段等方面探索了如何在教学中体现食品专业的特色,提高教学质量,为我国的食品质量与安全专业培养合格的人才。

激光扫描共聚焦显微镜原位检测核酸及蛋白质的实验教学设计

为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该教学设计采用激光扫描共聚焦显微镜在细胞原位检测核酸和绿色荧光蛋白,分析融合蛋白的亚细胞定位。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握激光扫描共聚焦显微镜的检测原理、操作步骤及结果分析方法。

流式细胞术检测Vpr蛋白对细胞周期影响实验

流式细胞术是生物学领域重要的检测技术。为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该设计采用流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白阳性细胞比例和细胞周期分布,分析质粒转染的效率并研究蛋白的功能。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握流式细胞术的检测原理、操作步骤及结果分析方法。

“食品毒理学”课程教学探讨

"食品毒理学"是食品质量与安全专业核心的专业基础课之一,是食品安全性评价的理论基础和方法学。通过几年的教学实践,结合课程的地位和特点,从教学内容、教学目标、教学方法、考核方式和问题与反思等方面进行了探讨,以期提高课程的教学质量。

白头翁体外对TNF、IL-1、IL-6产生的影响

目的 :观察白头翁对抑制脂多糖(LPS)刺激肝枯否氏细胞(KC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1(IL 1)和白细胞介素6(IL 6)的影响。方法:大鼠KC培养24h后,加入24孔板内(细胞终浓度为1×106 个/ml)静置4h。分4组:空白对照组:KC培养液 +RPMI1640。LPS组:KS培养液 +LPS(终浓度为20μg/ml) +RPMI1640。白头翁Ⅰ组:KC培养液 +LPS(终浓度为20μg/ml) +白头翁(终浓度为100μg/ml)。置37℃、5 %CO2 孵育箱中培养2、4、6、8、12、24h后取上清液,分别测定TNF、IL 1、IL 6的活性。结果:白头翁能明显抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL 6,且这种抑制作用随培养时间的延长而增强,并与药物浓度有关。结论:白头翁可能通过抑制LPS刺激肝KC分泌TNF、IL 1和IL

HPLC法同时测定布洛伪麻分散片中布洛芬盐酸伪麻黄碱的含量

目的 :建立同时测定布洛伪麻分散片中布洛芬和盐酸伪麻黄碱的含量的反相HPLC测定方法。方法 :色谱柱为YWG -C18,流动相 :甲醇 -0.01mol/L磷酸二氢钾 -磷酸 (75:25:0.1pH=3.6)、检测波长 :210nm ,流速 :1.0ml/min;进样量20μl。结果 :布洛芬和盐酸伪麻黄碱分别在20.0～400.0μg/ml;3.0～60.0μg/ml的范围内浓度与峰面积线性关系良好 ,相关系数分别为r=1.0000和r=0.9999。两组分的回收率分别介于100.67 %～101.40 %和99.66%～101.64 %之间 ,日内和日间RSD均低于5%。结论 :可同时测定布洛伪麻分散片中布洛芬和盐酸伪麻黄碱的含量 ,而且简便、准确、快速 ,可用于批次样品的含量测定及质量控制。

异丁司特胶囊正常人体耐受性研究

目的:观察中国健康男、女性志愿者对异丁司特胶囊的耐受性。方法:32名青年男、女入选受试者参加了单剂量耐受性试验;8名男性受试者入选参加每次10mg,q12h,持续8d的连续给药耐受性试验。分别比较单次给药和连续给药试验中给药前与给药后受试者的临床症状和实验室化验结果的变化。结果:在单次口服2.5,5,10,20和30mg异丁司特胶囊时,服药后1,3,6,12,24,48h时受试者的体征和实验室检查结果与给药前比较没有区别。连续给药耐受性试验结果显示服药后第5d和第10d受试者的体征和实验室检查结果与给药前比较也没有区别。结论:受试者对异丁司特胶囊具有很好的耐受性,推荐临床一次10mg的应用剂量是可以接受的。

活细胞成像系统在创新实践课程教学中的应用

探索大型仪器设备活细胞成像系统用于生物技术专业创新实践课程的教学方式。以核转录因子κB信号通路知识点讲述为例,从专业知识、检测原理、实验设计、操作规程、实验结果等方面,系统阐述将活细胞成像系统引入创新实践课程的教学方案。课程教学与科学研究紧密联系,培养了学生的创新意识和实践能力。

高效液相色谱法测定异丁司特的血药浓度

目的 :建立高效液相色谱法测定人血浆中异丁司特浓度的方法。方法 :采用YWG C18色谱柱 ,以甲醇 0 .0 5mol·L-1磷酸二氢钾 (6 5∶35 ,用磷酸调pH值 3.5 )为流动相 ,检测波长 2 2 5nm ,流速 1.0mL·min-1,进样量 5 0 μL ,内标物为桂利嗪。 结果 :异丁司特标准曲线在 2～ 12 0 μg·L-1范围内线性关系良好 (r =0 .995 6 ) ,最低检测浓度为 2 μg·L-1,平均回收率为10 0 .2 % ,RSD为 4 .7% (n =5 )。结论 :该法操作简便 ,灵敏 ,准确度高 ,适用于异丁司特血药浓度的测定和药动学的研究。

加味小承气颗粒剂对小鼠腹腔巨噬细胞合成白三烯B_4及对细胞内游离钙浓度的影响

目的：研究加味小承气（ＸｉａｏＣｈｅｎｇＱｉ，ＸＣＱ）颗粒剂治疗腹腔炎症机理与小（大）鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）合成释放白三烯Ｂ４以及对细胞内游离钙浓度的影响。方法：应用高效液相色谱分析ＬＴＢ４，应用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ及荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度。结果：不同浓度的ＸＣＱ颗粒剂（０１５～１０ｇ／Ｌ）明显抑制大鼠（ＭΦ）合成释放白三烯Ｂ４并抑制小鼠细胞内钙离子释放（静止期细胞内钙离子浓度为６３４５±１２４４ｎｍｏｌ／Ｌ，与对照组（１４８３９±１６６２ｎｍｏｌ／Ｌ）比较有显著性差别，在细胞外钙浓度增高条件下，ＸＣＱ尚促使外钙内流。结论：小承气颗粒剂抗炎机理与抑制小（大）鼠（ＭΦ）合成释放白三烯Ｂ４及调节细胞内外钙离子浓度有关。