中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血细胞生成的初步研究

为了揭示失血和LPS刺激后中华绒螯蟹血细胞的生成及成熟过程,利用流式细胞技术将中华绒螯蟹造血组织细胞和血细胞按大小进行分类,利用EdU标记检测失血刺激后中华绒螯蟹造血组织细胞的增殖情况,分析失血和LPS刺激后中华绒螯蟹不同类型血细胞比例的变化.结果显示:中华绒螯蟹造血组织细胞分布于106~384μm^(2)之间,而血细胞分布在119~434μm^(2)之间,其中,透明细胞和小颗粒细胞主要分布在200~300μm^(2)之间,中颗粒和大颗粒细胞主要分布在300~400μm^(2)之间,随着血细胞颗粒性的增加,细胞逐渐增大.在失血刺激6、12和24 h时,中华绒螯蟹造血组织细胞增殖加速,说明失血刺激可以促进造血组织细胞增殖以加速新血细胞的生成.失血刺激2 h后透明细胞比例显著降低,至12 h时,各类细胞基本恢复至正常水平.LPS刺激1、3、6和9 h后,透明细胞比例呈现先降低后升高再降低的变化,而小、中和大颗粒细胞比例变化与透明细胞比例变化趋势相反,LPS刺激24 h和48 h后,透明细胞比例显著升高,大颗粒细胞比例显著降低.由此可知,失血和LPS刺激引起了中华绒螯蟹机体不同细胞的免疫反应,可能通过不同方式影响血细胞的生成、分化和成熟.

中华绒螯蟹血细胞体外原代培养条件研究

为研究中华绒螯蟹血细胞的体外培养方法,分别从培养基、渗透压、胎牛血清和添加生长因子等培养条件进行探讨。结果表明,在23℃、2.5%CO_(2)条件下,在L-15培养基中添加200 IU/mL双抗和1‰葡萄糖,400~600 mOsm/kg渗透压,4~5 d半换液,中华绒螯蟹血细胞可存活10 d以上。该研究建立了中华绒螯蟹血细胞体外原代培养体系,为深入研究中华绒螯蟹血细胞分子免疫机制研究奠定了理论和技术基础。