腹水型单克隆抗体纯化方法的研究

目的比较不同纯化方法对腹水型抗体的纯化效果,探索出最适合实验室抗体生产的纯化方法。方法制备的IgG1单克隆抗体腹水(4-D10)分别利用两步硫酸铵沉淀法(AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法(CA-AS法)、辛酸-硫酸铵沉淀法联合DEAE阴离子交换层析法与辛酸-硫酸铵沉淀法联合蛋白G亲和层析法纯化处理后,经蛋白纯度、回收率、抗体免疫活性鉴定分析后,比较不同的纯化方法对腹水型抗体的纯化效果。结果①AS法的蛋白纯度为25%,低于CA-AS法(44%);AS法回收率为63%,高于CA-AS法(41.8%);比较抗体效价表明,AS法(1.024×106)与CA-AS法(1.024×106)两者相当。②粗提后纯化效果表明,蛋白G亲和层析法回收率明显降低,DEAE纯品虽纯度略低,但回收率较高,且效价(5.12×105)高于蛋白G亲和层析法(1.28×105)。结论 CA-AS联合DEAE离子交换法是适合实验室生产单抗的低成本、纯化效果和回收效果较佳的方法。