黄芪甲苷Ⅳ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用(英文)

目的探讨从黄芪提取物黄芪甲苷Ⅳ对异常血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法离体培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别测定黄芪甲苷Ⅳ作用前后异常血管平滑肌细胞的增殖、凋亡、细胞一氧化氮(NO)和钙离子浓度的变化。用WST法测定细胞的增殖;细胞凋亡通过annexinV标记法用流式细胞仪测定;细胞内NO和钙离子用荧光素DAF-2和Flue-3/AM分别标记,运用激光共聚焦显微镜测定其浓度变化;细胞醛糖还原酶的活性通过测定NADPH在340nm的吸收光谱来表征。结果黄芪甲苷Ⅳ显著抑制了由血清诱导的平滑肌细胞增殖(P<0.01);流式细胞测定表明黄芪甲苷Ⅳ促进平滑肌细胞的凋亡(P<0.01);黄芪甲苷Ⅳ和醛糖还原酶抑制剂依帕斯他显著抑制了醛糖还原酶的活性(P<0.01);在黄芪甲苷Ⅳ作用下,平滑肌细胞NO和钙离子浓度增加。结论黄芪甲苷Ⅳ可能通过抑制醛糖还原酶的活性,促进细胞凋亡,增加NO的产生和钙离子浓度的途径来抑制异常血管平滑肌细胞的增殖。

胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究新制剂胰岛素 反义c myb 硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (PS ODN)对平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)置DMEM中培养。用 2 0 %胎牛血清刺激SMC快速增殖。胰岛素与反义c myb PS ODN在一定条件下 ,如反应液、pH、温度、离子浓度 ,共孵育形成交联物。通过高效液相色谱定性和纯化该交联物。用3H TdR掺入率反映SMC增殖抑制效率。结果在加 2 0 %FBS的DMEM中生长的SMC胰岛素结合力明显增强。交联物胰岛素 反义c myb PS ODN对SMC增殖的抑制作用比单纯反义c myb PS ODN的抑制作用强 ,抑制效率分别为 4 8.3 %和 2 9.5 %。结论胰岛素受体靶向途径可能为一种治疗再狭窄的有效方法。

一种降刺猬内源性脂蛋白(a)反义靶向连接物

通过酶联免疫法测定了刺猬体内脂蛋白（ａ）的含量，从中选出一些脂蛋白（ａ）水平较高的刺猬，研究脱唾液酸糖蛋白－多聚赖氨酸－反义载脂蛋白（ａ）ＲＮＡ连接物对刺猬内源性脂蛋白（ａ）的降低作用．结果表明，该连接物可明显降低刺猬体内脂蛋白（ａ）的水平，而脱唾液酸糖蛋白－多聚赖氨酸－正义载脂蛋白（ａ）ＲＮＡ连接物对刺猬体内脂蛋白（ａ）无降低作用，无脱唾液酸糖蛋白靶向的反义载脂蛋白（ａ）ＲＮＡ寡核苷酸对刺猬体内脂蛋白（ａ）的降低作用明显低于有脱唾液酸糖蛋白靶向的连接物．连接物几乎不影响刺猬体内的纤维蛋白溶酶原的活性，连接物对刺猬脂蛋白（ａ）的降低作用至少可持续１６ｈ．

高效液相色谱分析氧化型低密度脂蛋白处理的U937细胞胞内胆固醇及胆固醇酯

为找到一种判断泡沫细胞与非泡沫细胞的简便而较为实用的方法，本文采用正己烷-异丙醇从U937单核细胞内提取胆固醇，并用醇溶性氢氧化钾除去其中的甘油三酯成分，用三氯乙酸去其中的蛋白成分。以异丙醇：正己烷：乙腈为溶剂洗脱系统，采用疏水性较弱的核酸分离柱，进行高效液相色谱分析，分离纯化胆固醇和胆固醇酯成分，并采用L－B（LiebermanBurchard）显色法结合波谱分析法对所胆固醇峰进行鉴定。结果表明胆固醇含量在0．05～1g／L之间与其峰面积有较好的线性关系，其最低检出量为4mg／g细胞蛋白（100mg细胞蛋白相当于1×108个细胞），通过定性与定量分析，结果表明，U937单核细胞株经氧化型低密度脂蛋白处理48h后，其胞内的胆固醇酯占胞内总胆固醇60％以上。

羧肽酶B的稳定性考察

目的对羧肽酶B (CPB)进行稳定性考察。方法将同批比活为 2 0 0u mg的CPB分别以 0、0 .0 5、0 .1、0 .2、0 .3、1mol LNaCl溶液及 (NH4) 2 S0 465 %饱和度盐析形式保存 ,定期检测CPB活力。选择出相对稳定盐浓度条件 ,另分别以 4℃、- 2 0℃、冻融状态保存 ,定期检测CPB活力。结果以 0 .1mol LNaCl溶液在 - 2 0℃冻存CPB为最适条件。

基于LC-MS/MS成分分析结合高效液相色谱法评价泻白散基准样品质量

目的:建立泻白散基准样品特征图谱方法,以LC-MS/MS指认各特征峰并对其进行归属,建立基准样品各组成药味质控指标的含量测定方法综合评价其质量。方法:以色谱柱Hypersil ODS_(2)(250 mm×4.6 mm,5μm)、乙腈-0.1%磷酸/甲酸梯度洗脱、检测波长280nm、流速1.0 ml/min、柱温25℃、进样量10μl进行指纹图谱研究,以同一色谱条件使用LC-MS/MS联用进行峰归属并进行化学成分分析,以指认的各药味专属性峰建立基准样品质控指标含量测定方法。结果:泻白散基准样品特征图谱重复性良好,供试品溶液48 h内稳定,多批次检测显示泻白散指纹图谱共有峰14个,相似度均>0.9;峰归属确认其中5个归属于炒桑白皮,5个归属于炙甘草,3个归属于地骨皮;并通过LC-MS/MS指认出其中11个色谱峰;选取桑皮苷A、甘草酸、枸杞素B分别建立含量测定方法,结果显示方法均具有专属性,重复性良好,加样回收率分别为94.9%、93.5%、95.2%。结论:该指纹图谱方法经验证可行,可有效鉴别泻白散三味饮片;结合LC-MS/MS成分分析可有效选取基准样品各药味的质控成分;建立的检测桑皮苷A、甘草酸、枸杞素B含量测定方法经方法学考察确认可行。