藤茶提取物对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制及相关淋巴肿瘤细胞生长活性的影响

目的:观察藤茶水提取物(AGE)对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解复制的影响,检测AGE抗KSHV相关淋巴瘤的安全性和细胞特异性,探索其可能的细胞通路机制。方法:采用组织型纤溶酶原激活剂(TPA)诱导人卡波式肉瘤相关疱疹病毒感染细胞系(BCBL-1)中的KSHV裂解复制,用AGE制备的低、中、高浓度溶液处理48~72 h,随后收集细胞样品,逆转录PCR(RT-PCR)检测KSHV潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45以及晚期基因K8.1的转录水平;实时荧光定量PCR检测KSHV子代病毒含量;蛋白质免疫印迹法(WB)检测KSHV潜伏蛋白LANA、裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达及KSHV裂解复制中相关信号通路蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 MAPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活化水平;噻唑蓝比色法(MTT)检测AGE对BCBL-1和正常外周血单个核细胞(PBMC)的细胞毒性。结果:与对照组比较,低浓度AGE对潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45的转录无明显抑制作用,对晚期基因K8.1的转录具有轻微的抑制作用(P<0.05);中浓度AGE对LANA、RTA和ORF45的转录具有轻微的抑制作用,并显著抑制K8.1的转录(P<0.05,P<0.01);高浓度AGE对LANA、RTA的转录无明显抑制作用,但显著抑制即时早期基因ORF45和晚期基因K8.1的转录(P<0.01)。20μg/mL浓度AGE能抑制73%子代KSHV颗粒的产生。与对照组比较,低、中、高浓度AGE对潜伏蛋白LANA的表达抑制均不明显,但对裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达均有不同程度的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001),且呈剂量依赖性抑制。低、中、高浓度的AGE对Akt的磷酸化均没有明显的抑制作用,但对mTOR(2448)、ERK1/2和p38 MAPK(180/182)的磷酸化均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.001)。100μg/mL的AGE显著抑制BCBL-1细胞的生长,最大细胞抑制率为67.7%,AGE对PBMC最大细胞抑制率为37.0%。BCBL-1细胞在潜伏期和裂解期的半数毒性浓度(CC50)分别为(25.7±0.5)μg/mL和(31.8±8.6)μg/mL,AGE对KSHV子代产生的半数抑制浓度(IC50)抑制作用小于10μg/mL,PBMC的CC50为49.54μg/mL。结论:高效低毒的天然植物药藤茶是潜在的治疗KSHV感染和相关淋巴瘤的有效药物来源,其抗KSHV作用可能与抑制ERK/MAPK/mTOR通路活化有关。

通督安神方对抑郁模型大鼠海马Bcl-2,Bax,Caspase-3蛋白表达影响

目的通过通督安神方对CUMS抑郁大鼠模型干预后观察大鼠海马神经细胞形态学及抗凋亡因子Bcl-2、促凋亡因子Bax、Caspase-3蛋白表达变化,探究通督安神方干预抑郁作用机制。方法选用SPF级SD大鼠50只,适应性喂养一周后随机分组,分组为:空白组、模型组、通督组(桂枝加葛根汤加减)、安神组(酸枣仁汤)、通督安神方组,每组10只。采用慢性不可预知温和应激造模法21天制备抑郁大鼠模型后,进行旷场实验及糖水偏好实验,验证造模是否成功。造模成功后治疗给药14天。给药结束再次开展旷场实验、糖水偏好实验对造模后各组大鼠行为学进行评价。评价结束取大鼠脑海马体组织采用WB法检测其抗凋亡因子Bcl-2、促凋亡因子Bax、Caspase-3蛋白表达,HE染色观察大鼠脑海马组织细胞形态学。结果①各组大鼠糖水偏好率:造模前各组大鼠糖水偏好率无显著差异,造模后,各组造模大鼠糖水偏好率显著低于空白组未造模大鼠(P<0.01),给药治疗后,与模型组相比,各治疗组大鼠的糖水偏好率显著升高(P<0.01);②旷场实验结果:造模前大鼠旷场实验无显著差异,造模后,与空白组比较,各组造模后大鼠旷场总距离降低、大鼠旷场静止时间增加(P<0.01)。给药结束后,与模型组比较,各治疗组大鼠的旷场总距离增加,静止不动时间显著缩短(P<0.01或P<0.05),差异具有统计学意义。③HE染色结果:与空白组相比,模型组大鼠海马体神经细胞间隙增大,排列散乱,数量减少,细胞核固缩,形态呈现三角形、梭形等,其中CA1区最为显著。与模型组相比,治疗各组大鼠海马体各区域神经细胞形态恢复,结构完整、排列较整齐、细胞密度大、层次分明,其中通督安神方组最为显著。④WB检测结果:与空白组相比,模型组大鼠海马中Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高,与模型组相比,通督安神方组、安神组大鼠Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),通督组Bcl-2蛋白表达有所升高,但无统计学意义,Bax、Caspase-3蛋白表达有所降低(P<0.05)。结论通督安神方能有效减少抑郁症引起的海马神经凋亡。能够提高CUMS抑郁模型大鼠糖水偏好率以及改善大鼠旷场实验,可以改善抑郁模型大鼠海马区神经细胞形态学,可以提高海马区抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平,降低促凋亡因子Bax、Caspase-3表达水平。